本文關(guān)鍵詞：SASR-CoV核衣殼蛋白在桿狀病毒-昆蟲系統(tǒng)的克隆表達及抗原性分析

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【摘要】：目的:SARS冠狀病毒(SARS-CoV)核衣殼蛋白(N蛋白)在桿狀病毒-昆蟲系統(tǒng)的表達,研究其抗原性。方法:利用PCR方法擴增SARS-NP全長基因,使用BamHⅠ和SalⅠ限制性內(nèi)切酶定向插入Bac-to-Bac系統(tǒng)的pFastBac HTC載體,構(gòu)建重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化DH10Bac細胞,獲得重組桿粒DNA后轉(zhuǎn)染Sf9細胞,在High Five細胞中表達SARS-NP;表達產(chǎn)物經(jīng)NiNTA親和層析純化及免疫印跡和ELISA方法驗證抗原性。結(jié)果:成功構(gòu)建pFastBac HTC-SARS-NP重組質(zhì)粒,并在High Five細胞高效表達,獲得相對分子量約48 kD的重組蛋白質(zhì)。經(jīng)驗證,重組蛋白能被SARS-CoV NP的特異性單抗(8E1A17)和兔免疫血清識別,能與SARS患者血清反應(yīng),與健康人血清、人冠狀病毒229E型和OC43型的雜交瘤培養(yǎng)上清、相對應(yīng)的兔免疫血清、患者血清均無交叉反應(yīng),具良好抗原反應(yīng)性。結(jié)論:SARS-NP成功表達于桿狀病毒-昆蟲系統(tǒng),具較強抗原反應(yīng)性,初步認為其與229E型和OC43型感染血清無交叉反應(yīng)性。
【作者單位】： 南方醫(yī)科大學珠江醫(yī)院檢驗醫(yī)學部;
【關(guān)鍵詞】： 嚴重急性呼吸綜合征(SARS) SARS冠狀病毒(SARS-CoV) 核衣殼蛋白 桿狀病毒 抗原反應(yīng)性
【基金】：國家重大科技專項課題(2012ZX10004-213) 廣東省高等學校珠江學者崗位計劃資助項目(2009GDUPS)
【分類號】：R373
【正文快照】： 冠狀病毒是引起人類呼吸道感染的常見病原之一。2012年發(fā)生的中東呼吸綜合征(MERS-CoV引起)和2003年爆發(fā)的嚴重急性呼吸綜合征(SARS-CoV引起)病原體均為新型的冠狀病毒,引起全球廣泛關(guān)注[1,2]。前期研究證實SARS-CoV的核衣殼蛋白(N)可誘導產(chǎn)生強烈的體液和細胞免疫,是主要的抗

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