本文關(guān)鍵詞：大鼠毛囊干細胞體外培養(yǎng)及基因轉(zhuǎn)染方法

  更多相關(guān)文章： 干細胞 毛囊 細胞培養(yǎng)技術(shù) 轉(zhuǎn)染 大鼠

【摘要】：目的:探討大鼠毛囊干細胞體外培養(yǎng)和基因轉(zhuǎn)染的方法。方法:采用組織塊法分離、培養(yǎng)大鼠觸須隆突部毛囊干細胞,經(jīng)Ⅳ型膠原差速貼壁法純化后,采用堿性磷酸酶染色和細胞免疫熒光染色進行細胞鑒定,測定細胞生長曲線,并分別采用脂質(zhì)體和慢病毒質(zhì)粒進行毛囊干細胞基因轉(zhuǎn)染。結(jié)果:經(jīng)兩次Ⅳ型膠原貼壁篩選后,毛囊干細胞呈克隆性生長,具有典型的干細胞生物學(xué)特征,堿性磷酸酶染色陽性,角蛋白-15、整合素-α6和整合素-β1表達均為陽性。細胞生長曲線顯示毛囊干細胞在接種后第3天時出現(xiàn)干細胞克隆;第5天和第6天時細胞處于對數(shù)生長期。脂質(zhì)體介導(dǎo)的毛囊干細胞基因轉(zhuǎn)染率為1.55%~17.21%,中位數(shù)9.63%;慢病毒介導(dǎo)的毛囊干細胞基因轉(zhuǎn)染率為62.14%~79.42%,中位數(shù)71.52%。結(jié)論:采用組織塊法分離、培養(yǎng)大鼠觸須隆突部毛囊干細胞,經(jīng)Ⅳ型膠原差速貼壁法純化后,毛囊干細胞可保持較好的生長狀態(tài)和較強的克隆形成能力,且慢病毒介導(dǎo)毛囊干細胞基因轉(zhuǎn)染比脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染更高效、穩(wěn)定。
【作者單位】： 浙江省杭州市蕭山區(qū)中醫(yī)院;浙江中醫(yī)藥大學(xué);
【關(guān)鍵詞】： 干細胞 毛囊 細胞培養(yǎng)技術(shù) 轉(zhuǎn)染 大鼠
【基金】：浙江省科技廳公益技術(shù)應(yīng)用研究項目(2010C33133)
【分類號】：R329
【正文快照】： 壓軋傷、切割傷、大面積燒傷及體表腫瘤切除等造成的皮膚大面積缺損,可導(dǎo)致患者嚴重殘疾,甚至死亡。毛囊干細胞(hair follicle stem cells,HFSCs)是一種自我更新和體外增殖能力較強的未分化細胞,主要存在于毛囊外根鞘的隆突部[1-2]。Rochat等[3]的研究表明,體外培養(yǎng)的HFSCs具

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 蘇小虎;高峰;劉迎春;王宏;張焱如;周歡敏;;絨山羊皮膚干細胞的初步分離及堿性磷酸酶鑒定[J];中國畜牧獸醫(yī);2012年10期

2 李光輝;紀(jì)華;陳正堂;呂勝青;胡義德;王東林;;Lentivirus介導(dǎo)RNAi抑制人膠質(zhì)瘤干細胞STAT3基因生物學(xué)效應(yīng)觀察[J];中華神經(jīng)外科疾病研究雜志;2008年06期

3 楊珂;姜自林;楊恬;;大鼠毛囊干細胞的體外分離培養(yǎng)及增強型綠色熒光蛋白示蹤[J];中國組織工程研究與臨床康復(fù);2008年08期

4 王聯(lián)群;藍蔚;黃培信;林尊文;劉德伍;;Ⅳ型膠原快速黏附法體外分選人胎兒表皮干細胞[J];中國組織工程研究與臨床康復(fù);2008年43期

5 史明艷;楊學(xué)義;竇忠英;;山羊毛囊干細胞分離培養(yǎng)方法研究[J];畜牧獸醫(yī)學(xué)報;2006年05期

【共引文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 蔣東霞,楊勝利,何琳;惡性腫瘤患者外周血淋巴細胞mdr-1基因表達在原發(fā)耐藥與繼發(fā)耐藥中的作用研究[J];癌變.畸變.突變;2002年04期

2 何琳,張巧,胡杰英;抗腫瘤藥物體外誘導(dǎo)新鮮癌組織及其外周血淋巴細胞mdr-1基因表達的相關(guān)性研究[J];癌變.畸變.突變;2002年04期

3 何志穎,江千里,姚玉成,溫麗敏,李建秀,王新民,胡以平,王健民;RFP標(biāo)記的YCD基因在HeLa細胞中的表達及其介導(dǎo)的細胞毒性[J];癌變.畸變.突變;2004年05期

4 單保恩,李俊新,張靜,梁文杰,李宏芬;中藥香加皮與其易混品體外抑瘤效果研究[J];癌變.畸變.突變;2005年05期

5 朱京童;白玉;司文秀;劉洪喜;任曲輝;;中藥白頭翁提取物抗腫瘤活性的體外實驗研究[J];癌變.畸變.突變;2007年01期

6 劉俊康;吳小蘭;章榮華;徐啟旺;;小鼠EP瘤細胞株建立的初步研究[J];癌變.畸變.突變;2007年04期

7 趙文紅;莊穎;趙紅;張鼎;;膽固醇誘導(dǎo)內(nèi)皮細胞凋亡及抑制細胞增殖的實驗研究[J];癌變.畸變.突變;2007年06期

8 杜牡丹;宋旭紅;劉戈飛;梁斌;張巧霞;李蕊;謝健平;甘雪瓊;黃東陽;;抗兔輔酶Ⅱ依賴性視黃醇脫氫/還原酶單克隆抗體的制備和鑒定[J];癌變.畸變.突變;2008年03期

9 張銘清;;中華補血草黃酮抑制白血病細胞增殖的初探[J];安徽農(nóng)學(xué)通報(上半月刊);2011年01期

10 李有文;魏風(fēng);郭志儒;陳創(chuàng)夫;;山羊痘病毒培養(yǎng)及其細胞病變觀察研究[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2009年03期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 郝冬海;曹珂;劉檢;張予陽;;細胞損傷模型在化合物抗腦缺血活性篩選中的應(yīng)用[A];2011年中國藥學(xué)大會暨第11屆中國藥師周論文集[C];2011年

2 洪勝輝;張軍;張蕊;王來娣;邵丹;張宜輝;董飚;段修軍;龔道清;;鵝原代肝細胞的簡易、高純分離及培養(yǎng)[A];安全優(yōu)質(zhì)的家禽生產(chǎn)——第十五次全國家禽學(xué)術(shù)討論會論文集[C];2011年

3 王德文;王煒;左紅艷;姚華;常公民;王瑞娟;高亞兵;王水明;董波;張志毅;彭瑞云;;不同波段電磁輻射對淋巴細胞的損傷效應(yīng)[A];第十二屆中國體視學(xué)與圖像分析學(xué)術(shù)會議論文集[C];2008年

4 路廣林;郝鈺;董建勛;鄭宏;陳淑長;黃啟福;;溫脈通抑制血管平滑肌細胞增殖、遷移作用的實驗研究[A];第三屆全國中醫(yī)藥免疫學(xué)術(shù)研討會論文匯編[C];2006年

5 陳磊;凌沛學(xué);張?zhí)烀?;硫酸軟骨素對兔軟骨細胞體外培養(yǎng)的影響[A];2009年中國藥學(xué)大會暨第九屆中國藥師周論文集[C];2009年

6 陳磊;凌沛學(xué);張?zhí)烀?;硫酸軟骨素對兔軟骨細胞體外培養(yǎng)的影響[A];2010年中國藥學(xué)大會暨第十屆中國藥師周論文集[C];2010年

7 李英;馬勇江;許麗娜;張媛;李玉谷;;不同培養(yǎng)體系對小鼠胸腺上皮細胞體外培養(yǎng)的影響[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會動物解剖學(xué)及組織胚胎學(xué)分會第十五次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2008年

8 司紅麗;王建娜;胡延春;王建華;;狗舌草總黃酮對L_(1210)細胞的體外作用研究[A];紀(jì)念中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會中獸醫(yī)學(xué)分會成立30周年中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會中獸醫(yī)學(xué)分會2009年學(xué)術(shù)年會、華東區(qū)第十九次中獸醫(yī)科研協(xié)作與學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2009年

9 弓慧敏;龐全海;;羊駝毛囊干細胞分離培養(yǎng)的初步研究[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會獸醫(yī)產(chǎn)科學(xué)分會第五屆全體會議第十次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2009年

10 王金果;涂健;趙德明;;酸化條件對偽狂犬病毒清除效果的檢測[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會2010年學(xué)術(shù)年會——第二屆中國獸醫(yī)臨床大會論文集(下冊)[C];2010年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 李坤寅;橘荔散結(jié)丸有效部位對子宮肌瘤細胞增殖、凋亡及相關(guān)因子表達的影響[D];湖南中醫(yī)藥大學(xué);2010年

2 鐘興;hNIS轉(zhuǎn)染鼻咽癌介導(dǎo)放射性核素顯像和治療的實驗研究[D];暨南大學(xué);2010年

3 袁慧星;構(gòu)建saRNA激活大鼠陰莖海綿體平滑肌細胞iNOS基因表達治療ED的體外實驗研究[D];華中科技大學(xué);2011年

4 譚琦;加味丹參飲誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細胞分化為心肌樣細胞的研究[D];湖南中醫(yī)藥大學(xué);2011年

5 張銘杰;成人MSCs體外定向成骨分化及激素性股骨頭壞死MSCs活性研究[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2011年

6 關(guān)永格;子宮腺肌病中醫(yī)證型分布與化瘀止痛方及其拆方的干預(yù)機制研究[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2011年

7 袁爍;化瘀消ve殺胚法對輸卵管妊娠影響的臨床與實驗研究[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2011年

8 周仕軼;腫節(jié)風(fēng)對人前列腺癌DU-145細胞PI3K/Akt/mTOR信號傳導(dǎo)通路的影響[D];成都中醫(yī)藥大學(xué);2011年

9 張東;轉(zhuǎn)fat-1基因體細胞克隆綿羊的研究[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

10 趙麗;三種重金屬單抗的制備與抗體基因序列分析及其免疫檢測方法的建立[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 施六霞;富血小板血漿對不同條件下人牙周膜成纖維細胞功能的影響[D];南京醫(yī)科大學(xué);2010年

2 謝鵬;脂多糖、多巴胺對凡納濱對蝦血細胞作用機制的研究[D];中國海洋大學(xué);2010年

3 張賀佳;三種正畸用鎳鈦記憶合金絲細胞毒性的試驗研究[D];中國醫(yī)科大學(xué);2010年

4 徐佳麗;白首烏總苷A（CGA）酸水解產(chǎn)物的抗腫瘤作用研究[D];浙江中醫(yī)藥大學(xué);2010年

5 王代憲;負載BMP與VEGF的PDLLA組織工程材料修復(fù)兔橈骨缺損的實驗研究[D];泰山醫(yī)學(xué)院;2007年

6 王麗潔;凝血因子Ⅶ檢測試劑的研制[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2010年

7 高越穎;王不留行抑制血管新生有效部位的提取分離及其活性評價[D];江南大學(xué);2010年

8 劉莉娜;遠志與厚樸配伍對小鼠Cajal間質(zhì)細胞的影響[D];成都中醫(yī)藥大學(xué);2010年

9 張立靜;TEM1型β-內(nèi)酰胺酶免疫膠體金層析檢測方法的建立[D];河北農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

10 肖顏顏;富硒大麥苗生物學(xué)功能的研究[D];魯東大學(xué);2011年

【二級參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前7條

1 黃恩毅;楊恬;陳偉;楊力;;大鼠毛囊干細胞的純化培養(yǎng)鑒定及其生物學(xué)特性[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;2008年01期

2 史明艷;劉霞;楊學(xué)義;竇忠英;;山羊毛囊干細胞的分離及體外培養(yǎng)[J];黑龍江畜牧獸醫(yī);2009年11期

3 李光輝;王東林;陳正堂;尹昌林;紀(jì)華;呂勝青;;人惡性膠質(zhì)瘤干細胞的分離與鑒定[J];中華腫瘤防治雜志;2007年13期

4 李光輝;陳正堂;尹昌林;王東林;呂勝青;紀(jì)華;;人膠質(zhì)瘤干細胞內(nèi)在自我更新能力[J];中華神經(jīng)外科疾病研究雜志;2007年03期

5 孫曉慶,付小兵,盛志勇;表皮干細胞[J];中華創(chuàng)傷雜志;2000年10期

6 張翠萍;付小兵;李淑云;孫同柱;孫曉艷;蔡颯;;高鈣培養(yǎng)促進人表皮角質(zhì)細胞間的黏附和聚集[J];中華實驗外科雜志;2007年08期

7 李澄;呂紅莉;李燕;湯勁輝;;皮膚干細胞體外培養(yǎng)與誘導(dǎo)分化[J];中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志;2010年19期

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 楊學(xué)義;成年山羊皮膚干細胞分離與克隆[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2001年

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 ;毛囊干細胞分化成神經(jīng)細胞[J];世界科學(xué);2005年04期

2 張群,曹誼林;組織工程化皮膚的新種子細胞-毛囊干細胞[J];國外醫(yī)學(xué).生理.病理科學(xué)與臨床分冊;2005年01期

3 張藝;毛囊干細胞的生物學(xué)特性及意義[J];國外醫(yī)學(xué).生理.病理科學(xué)與臨床分冊;2004年01期

4 弓慧敏;李方華;萬婷;羅英霞;龐全海;;毛囊干細胞的研究進展[J];中國畜牧獸醫(yī);2010年07期

5 原璐;王春生;安鐵洙;;毛囊干細胞研究進展[J];中國生物工程雜志;2009年01期

6 林森;謝擁軍;李新枝;寧加亮;;大鼠胚胎背部皮膚發(fā)育過程中毛囊干細胞的發(fā)育初探[J];成都醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2008年03期

7 張群;叢笑倩;張文杰;劉偉;曹誼林;;利用中性蛋白酶消化法擴增毛囊干細胞的實驗研究[J];上海交通大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2007年04期

8 黃恩毅;楊恬;陳偉;楊力;;大鼠毛囊干細胞的純化培養(yǎng)鑒定及其生物學(xué)特性[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;2008年01期

9 姜自玲;楊力;連小華;楊恬;楊柯;;角膜緣基質(zhì)誘導(dǎo)毛囊干細胞角膜上皮樣轉(zhuǎn)分化的研究[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;2008年13期

10 連小華;;毛囊干細胞研究新進展[J];局解手術(shù)學(xué)雜志;2010年03期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 鄭業(yè)華;楊恬;;人毛囊干細胞與皮脂腺細胞共培養(yǎng)的體外實驗研究[A];中國細胞生物學(xué)學(xué)會第八屆會員代表大會暨學(xué)術(shù)大會論文摘要集[C];2003年

2 唐建兵;陳璧;湯朝武;胡大海;董茂龍;;人毛囊外根鞘細胞的培養(yǎng)[A];中華醫(yī)學(xué)會第六屆全國燒傷外科學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2001年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 毛磊;毛囊干細胞移植有望使毛發(fā)再生[N];中國醫(yī)藥報;2004年

2 ;毛囊干細胞自發(fā)生成毛囊毛發(fā)[N];新華每日電訊;2004年

3 唐立仁;生物技術(shù)為治療脫發(fā)帶來曙光[N];科技日報;2002年

4 記者 毛磊;植入干細胞有可能治療脫發(fā)[N];新華每日電訊;2004年

5 毛磊;干細胞療法有望治療脫發(fā)[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2004年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 楊蕾蕾;角質(zhì)細胞特異性Smad4基因敲除導(dǎo)致小鼠毛囊干細胞過度活化[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2008年

2 邢書亮;毛囊干細胞向上皮細胞分化及其相關(guān)調(diào)控信號的初步研究[D];復(fù)旦大學(xué);2007年

3 王洪濤;人胎兒毛囊隆突細胞的體外分離培養(yǎng)及誘導(dǎo)分化[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2006年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前7條

1 唐建兵;毛囊器官培養(yǎng)、毛囊細胞培養(yǎng)和毛囊干細胞的相關(guān)研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2001年

2 徐紅;毛囊干細胞的分離培養(yǎng)與鑒定[D];吉林大學(xué);2009年

3 王慧君;毛囊培養(yǎng)上清液誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細胞分化的初步研究[D];中國醫(yī)科大學(xué);2008年

4 黃恩毅;免疫磁珠體外分離純化大鼠毛囊干細胞的實驗研究[D];重慶大學(xué);2008年

5 林森;毛囊干細胞合成的β-NGF及受體p75NTR在皮膚創(chuàng)傷修復(fù)早期作用的初步研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2006年

6 譚挺;毛囊干細胞標(biāo)記與純化的相關(guān)研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2008年

7 鄧立歡;Wnt信號通路介導(dǎo)毛囊干細胞雙向分化的分子調(diào)控機制的初步研究[D];廣州醫(yī)學(xué)院;2011年

，

本文編號：1054440