本文關(guān)鍵詞：恩諾沙星多克隆抗體制備技術(shù)的優(yōu)化及其ELISA分析方法的建立

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【摘要】：目的優(yōu)化人工抗原合成條件及免疫程序,制備親和力高、特異性強(qiáng)及檢測限低的多克隆抗體,并建立適用中華絨螯蟹中恩諾沙星殘留檢測的免疫學(xué)分析方法。方法采用優(yōu)化的碳二亞胺法合成免疫原(c BSA-ENR)、N-羥基琥珀酰亞胺活性酯法合成包被抗原(c OVA-ENR)及免疫方式等技術(shù),制備恩諾沙星多克隆抗體并用方陣ELISA及間接競爭ELISA對其滴度、親和力及特異性進(jìn)行分析,進(jìn)而應(yīng)用于中華絨螯蟹加標(biāo)樣品回收率和精密度的檢測。結(jié)果恩諾沙星多抗的工作濃度為1:80000,IC50為8.68ng/m L,有效檢測范圍為0.4~125ng/m L,與環(huán)丙沙星等競爭物的交叉反應(yīng)率均小于0.5%;分別在中華絨螯蟹血淋巴、肌肉、肝胰腺樣品中添加10、30和90ng/g(ng/m L)3個(gè)濃度水平的恩諾沙星,平均回收率分別為72.23%~85.45%、68.66%~74.12%和50.17%~56.30%,相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為7.64%~12.26%、12.41%~22.23%和28.28%~35.40%。結(jié)論通過優(yōu)化制備技術(shù)獲得恩諾沙星多克隆抗體,并建立的免疫分析方法能夠滿足中華絨螯蟹等水產(chǎn)品中恩諾沙星殘留檢測的基本要求。
【作者單位】： 蘇州大學(xué)醫(yī)學(xué)部基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與生物科學(xué)學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： 中華絨螯蟹 恩諾沙星 多克隆抗體 酶聯(lián)免疫吸附測定
【基金】：蘇州市應(yīng)用基礎(chǔ)項(xiàng)目(SYN201223)
【分類號】：R446.6;R392
【正文快照】： 恩諾沙星(enrofloxacin,ENR)是第3代喹諾酮類抗生素,因其具有高效、廣譜的抗菌效果而被應(yīng)用于防治水產(chǎn)及畜禽動物的細(xì)菌性疾病[1]。恩諾沙星可在哺乳動物肝臟內(nèi)轉(zhuǎn)化為人類用抗生素環(huán)丙沙星,肝微粒體內(nèi)恩諾沙星和環(huán)丙沙星的代謝可產(chǎn)生自由基,引起細(xì)胞膜氧化損傷[2]。因此,飼料

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本文編號：1034883