目的探討氧化低密度脂蛋白/β2糖蛋白I/抗β2糖蛋白I抗體(oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗體)復(fù)合物對(duì)大鼠血管平滑肌A7r5細(xì)胞鈣化、炎癥因子表達(dá)的影響以及Toll樣受體4(TLR4)在其中的作用。方法分別用oxLDL、 oxLDL/β2GPI復(fù)合物、β2GPI/抗β2GPI抗體復(fù)合物、 oxLDL/抗β2GPI抗體復(fù)合物、 oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗體復(fù)合物干預(yù)刺激大鼠A7r5細(xì)胞系不同時(shí)間,采用或不采用TLR4抑制劑TAK-242處理。茜素紅染色觀察細(xì)胞鈣化結(jié)節(jié),實(shí)時(shí)熒光定量PCR和Western blot法檢測平滑肌蛋白22α(SM22α)和RUNX家族轉(zhuǎn)錄因子2(RUNX2)的mRNA和蛋白水平, ELISA檢測細(xì)胞培養(yǎng)上清中腫瘤壞死因子α(TNF-α)水平; A7r5細(xì)胞給予TNF-α刺激后,進(jìn)一步檢測SM22α和RUNX2 mRNA和蛋白水平的變化。結(jié)果 oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗體復(fù)合物能夠促進(jìn)A7r5細(xì)胞鈣化結(jié)節(jié)增多, SM22α表達(dá)減少而RUNX2明顯上升,促進(jìn)炎癥因子TNF-α的表達(dá), TLR4抑制劑能夠緩解這一現(xiàn)象;外加不同濃度的T...

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圖1 A7r5細(xì)胞鈣化情況(茜素紅染色, ×100)

不同處理組培養(yǎng)12d后進(jìn)行茜素紅染色,與對(duì)照組相比,陽性對(duì)照2.6mmol/L高磷組可見明顯深色鈣化結(jié)節(jié),說明鈣化模型建立成功(圖1～8,紅色箭頭)。各處理均出現(xiàn)了鈣化顆粒,但其中oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗體復(fù)合物處理組可見明顯多個(gè)鈣化結(jié)節(jié)(圖1),加....

圖2 不同刺激對(duì)A7r5細(xì)胞SM22α、 RUNX2表達(dá)的影響

與培養(yǎng)基對(duì)照組相比,不同干預(yù)均能使TNF-α表達(dá)提高,但其中oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗體復(fù)合物處理組TNF-α的表達(dá)增高最為明顯(P<0.01,圖4)。圖3TAK-242處理后不同干預(yù)刺激對(duì)A7r5細(xì)胞SM22α和RUNX2表達(dá)影響

圖3 TAK-242處理后不同干預(yù)刺激對(duì)A7r5細(xì)胞SM22α和RUNX2表達(dá)影響

圖2不同刺激對(duì)A7r5細(xì)胞SM22α、RUNX2表達(dá)的影響圖4不同處理對(duì)A7r5細(xì)胞TNF-α水平的影響

圖4 不同處理對(duì)A7r5 細(xì)胞TNF-α水平的影響

圖3TAK-242處理后不同干預(yù)刺激對(duì)A7r5細(xì)胞SM22α和RUNX2表達(dá)影響2.4TNF-α呈劑量依賴性導(dǎo)致A7r5細(xì)胞發(fā)生成骨樣表型改變

本文編號(hào)：4031379