目的:乙型肝炎病毒感染可引起慢性乙型肝炎,極大地危害人類健康,其中固有免疫應(yīng)答機(jī)制在抵抗乙肝病毒感染中起到重要作用。本課題組前期研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)慢性乙肝患者肝組織和外周血單核細(xì)胞中核酸感受器IFI16的表達(dá)顯著低于正常水平,且體外細(xì)胞試驗(yàn)初步驗(yàn)證了IFI16的表達(dá)與HBV復(fù)制之間的相關(guān)性,但其具體機(jī)制尚未明確。本文旨在明確IFI16在HBV的復(fù)制與表達(dá)過(guò)程中所發(fā)揮的作用,以及誘導(dǎo)肝細(xì)胞內(nèi)固有免疫應(yīng)答的分子機(jī)制,為尋找抗HBV免疫治療靶點(diǎn)及新藥研發(fā)提供思路。方法:采用p BS-HBV1.3和IFI16質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染Hep G2細(xì)胞,ELISA檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清中HBs Ag和HBe Ag的表達(dá),RT-q PCR檢測(cè)HBV m RNA的表達(dá),驗(yàn)證IFI16對(duì)HBV的抑制作用,并在HBV穩(wěn)定轉(zhuǎn)染模型Hep AD38細(xì)胞和HBV感染模型Hep G2-NTCP細(xì)胞中加以驗(yàn)證。將IFI16和STING共轉(zhuǎn)染入Hep G2細(xì)胞或Hep AD38細(xì)胞中,ELISA和RT-q PCR檢測(cè)IFI16與STING對(duì)于HBV的抑制是否具有協(xié)同作用,并在HBV刺激作用下,采用RT-q PCR驗(yàn)證STING-TBK1-IR...

【文章頁(yè)數(shù)】：62 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖1.HepG2細(xì)胞中IFI16過(guò)表達(dá)可抑制HBV的復(fù)制與表達(dá)

華中科技大學(xué)碩士學(xué)位論文三．結(jié)果1．IFI16抑制HepG2細(xì)胞中HBV的表達(dá)為了驗(yàn)證HBV的復(fù)制與表達(dá)是否受IFI16表達(dá)的影響，我們采用HepG2細(xì)胞系進(jìn)行了試驗(yàn)。將pEnter-IFI16表達(dá)質(zhì)�；蚱鋵�(duì)照載體pEnter分....

圖2.HepG2細(xì)胞中IFI16與STING可協(xié)同抑制HBV的表達(dá)與復(fù)制

3．IFI16對(duì)HBV的抑制效應(yīng)與STING信號(hào)通路的激活有關(guān)為了進(jìn)一步探究IFI16與STING信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路之間存在何種作用，我們?cè)贖epG2細(xì)胞中檢測(cè)了該通路中關(guān)鍵分子TBK1、IRF3及IFN-的mRNA表達(dá)，發(fā)現(xiàn)當(dāng)HBV刺激時(shí)，IFI1....

圖3.HepG2細(xì)胞中IFI16通過(guò)STING通路激活固有免疫

4．IFI16可抑制HepAD38細(xì)胞中HBV的表達(dá)，且該效應(yīng)與STING信號(hào)通路的激相關(guān)由于上述實(shí)驗(yàn)主要采用的是質(zhì)粒瞬時(shí)轉(zhuǎn)染的技術(shù)，可能存在轉(zhuǎn)染效率的差異，為排除轉(zhuǎn)染效率的影響，我們采用了HBV穩(wěn)定表達(dá)的細(xì)胞株HepAD38來(lái)驗(yàn)證上述結(jié)論在HepAD3....

圖4.HepAD38細(xì)胞中IFI16過(guò)表達(dá)可抑制HBV的表達(dá)

華中科技大學(xué)碩士學(xué)位論文胞培養(yǎng)上清液進(jìn)行HBsAg和HBeAg的ELISA檢測(cè)，48h提取細(xì)胞總RNA，對(duì)HBVmRNA進(jìn)行RT-qPCR檢測(cè)，觀察結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照組相比IFI16與STING共轉(zhuǎn)染組HBsAg、HBeAg和....

本文編號(hào)：3933815