目的改進(jìn)串聯(lián)親和純化質(zhì)譜(TAP-MS)技術(shù),鑒定并驗(yàn)證Rab40b和Rab40c在樹(shù)突狀細(xì)胞中的相互作用蛋白質(zhì)。方法用分子克隆技術(shù)構(gòu)建融合蛋白基因e Xact-6×His-EYFP-Rab40b和e Xact-6×His-EYFP-Rab40c的表達(dá)載體,采用慢病毒感染建立融合蛋白e Xact-6×His-EYFP-Rab40b和e Xact-6×His-EYFP-Rab40c穩(wěn)定表達(dá)的樹(shù)突狀細(xì)胞系。改進(jìn)串聯(lián)親和純化技術(shù),通過(guò)e Xact-6×His標(biāo)簽進(jìn)行新型串聯(lián)親和純化和q TOF液質(zhì)檢測(cè),運(yùn)用Comp PASS算法過(guò)濾和GO富集分析,鑒定Rab40b和Rab40c的相互作用蛋白,并采用免疫共沉淀驗(yàn)證。結(jié)果成功構(gòu)建e Xact-6×His-EYFP-Rab40b和e Xact-6×His-EYFP-Rab40c融合蛋白穩(wěn)定表達(dá)的樹(shù)突狀細(xì)胞系。采用新型串聯(lián)親和純化方法,鑒定獲得26個(gè)Rab40b高可信相互作用蛋白和16個(gè)Rab40c高可信相互作用蛋白。Rab40b、Rab40c分別與Elongin B、Elongin C、Cullin5具有相互作用。結(jié)論成功建立新型串聯(lián)親和純化方法...

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1. 1 材料及試劑
    1. 2 方法
        1. 2. 1構(gòu)建融合蛋白基因e Xact-6 × His-EYFPRab40b和e Xact-6 × His-EYFP-Rab40c的表達(dá)載體
        1. 2. 2 構(gòu)建融合蛋白e Xact-6 × His-EYFP-Rab40b和e Xact-6 × His-EYFP-Rab40 穩(wěn)定表達(dá)的樹(shù)突狀細(xì)胞系
        1.2.3串聯(lián)親和純化質(zhì)譜鑒定Rab40b和Rab40c的相互作用蛋白復(fù)合物
        1.2.4免疫共沉淀驗(yàn)證蛋白質(zhì)相互作用
2 結(jié)果
    2. 1 融合蛋白e Xact-6 × His-EYFP-Rab40b和e Xact-6 ×His-EYFP-Rab40c穩(wěn)定表達(dá)的樹(shù)突狀細(xì)胞系的構(gòu)建
    2. 2 串聯(lián)親和純化質(zhì)譜鑒定Rab40b / c在樹(shù)突狀細(xì)胞中的蛋白復(fù)合物
    2. 3 Rab40b / c與蛋白復(fù)合體相互作用驗(yàn)證
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