人/猴嵌合免疫缺陷病毒（simian/human/immunodeficiency virus,SHIV）,是通過基因重組技術(shù),用HIV-1（hunman immunodeficiency viruses -1）的囊膜蛋白基因（env）和部分輔助基因與SIV（simian immunodeficiency viruses）相應(yīng)基因進(jìn)行置換,獲得的嵌合型病毒。SHIV具有親本HIV-1和SIV毒株相似的生物學(xué)特性,可以在非人靈長(zhǎng)類（NHP）動(dòng)物上模擬HIV-1感染,為研究HIV-1致病機(jī)制及疫苗開發(fā)提供了重要的模型。SHIV的衣殼蛋白p27構(gòu)成病毒粒子雙層殼的內(nèi)殼,而且與同屬病毒的衣殼蛋白具有相同或相似的抗原性,故可作為SHIV抗原檢測(cè)的標(biāo)志物。利用p27抗原和及其抗體,可以在細(xì)胞和機(jī)體水平對(duì)SHIV感染NHP模型進(jìn)行研究,為艾滋病疫苗研發(fā)、免疫策略的有效性以及相關(guān)基礎(chǔ)研究進(jìn)行評(píng)價(jià)。因此,鑒定p27抗原表位對(duì)于進(jìn)一步研究其蛋白結(jié)構(gòu)與功能、開發(fā)早期診斷試劑具有重要意義。本研究用Protein A Sepharose CL-4B柱子對(duì)前期工作中已制備的3株p27蛋白單克隆抗體（monoclo... 

【文章來(lái)源】：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)黑龍江省 211工程院校

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

HIV病毒顆粒的結(jié)構(gòu)模型

1.2.1 HIV 的生物學(xué)特性及形態(tài)結(jié)構(gòu)HIV屬于動(dòng)物逆轉(zhuǎn)錄病毒的慢病毒家族成員(Abbus AK et al.,2004)，能夠在細(xì)胞內(nèi)長(zhǎng)期潛伏感染，引起短暫的細(xì)胞病變效應(yīng)，而且病毒可以造成慢性進(jìn)行性和致死性的疾病，包括消耗性的綜合征及中樞神經(jīng)系統(tǒng)的退化。HIV包括兩種密切相關(guān)的類型，命名為HIV-1和HIV-2，絕大多數(shù)AIDS是由HIV-1引起的，而HIV-2的基因結(jié)構(gòu)與抗原性均HIV-1不同，引起類似的臨床綜合征，而且僅在西非流行。HIV-1和HIV-2病毒顆粒的形態(tài)完全相同，病毒顆粒直徑為100~120nm（如圖1-1所示），具有一不定型結(jié)構(gòu)。感染性病毒具有包膜蛋白及3個(gè)結(jié)構(gòu)Gag蛋白，包膜蛋白外膜為脂雙層膜，來(lái)自宿主細(xì)胞的細(xì)胞膜，膜中嵌有病毒表面糖蛋白（surface envelope protein,SU）gp120和跨膜糖蛋白（transmembrane envelope protein,TM）gp41，外膜內(nèi)緊貼著基質(zhì)蛋白（matrix protein,MA）p17。3個(gè)結(jié)構(gòu)Gag蛋白包括：基質(zhì)蛋白（MA，p17）、衣殼蛋白（CA，p24）和核衣殼蛋白（NC，p7）(Gomez et al., 2005)，MA在病毒顆粒包膜內(nèi)側(cè)形成一個(gè)內(nèi)殼；CA形成包裹病毒RNA基因組的圓錐形核心；NC與衣殼內(nèi)病毒RNA相連。這些病毒蛋白由病毒蛋白酶水解HIV-1前體蛋白p55而成（圖1-2）。Gag蛋白在p55前提蛋白的定位依次為：p17/p24/p2/p7/p1/p6。未被裂解的Gag P55有三個(gè)功能區(qū)：膜定位區(qū)（M）、作用區(qū)（I）和晚期（L）。M位于基質(zhì)蛋白內(nèi)，經(jīng)豆蔻酰化后引導(dǎo)Gag蛋白靶向細(xì)胞質(zhì)膜。I存在于核衣殼內(nèi)，主要介導(dǎo)Gag單體間相互作用。L也存在于核衣殼內(nèi)，和Gag多聚蛋白P6區(qū)一期介導(dǎo)逆轉(zhuǎn)錄病毒的出芽(Freed 2002)。

表達(dá)載體 pET-32a（+）（圖2-1），質(zhì)粒 pSIVmac239 均由同實(shí)驗(yàn)室保存。圖 2-1 表達(dá)載體 pET-32a (+)讀碼框架及主要特征圖譜Fig.2-1 Map of the plasmid pET-32a (+) showing the reading frames and main features2.2 主要酶類及生化試劑DL15 000 DNA Marker、dNTPs、DL2000 DNA Marker 購(gòu)于 TaKaRa（大連）公司；Taq聚合酶購(gòu)于 Prom

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3100466