發(fā)布時間：2021-03-14 18:53

　　流感病毒的跨種傳播是一個包含病毒和宿主因子之間大量相互作用的復(fù)雜過程。除了轉(zhuǎn)換細胞表面受體結(jié)合特異性,禽流感病毒還要克服核膜形成的另一個重要屏障–核輸入機制來進入細胞核進行有效轉(zhuǎn)錄和復(fù)制。本文主要研究人源importin-α7對不同來源、不同亞型流感病毒生長的影響。根據(jù)CRISPR/Cas9靶點設(shè)計原則分別在人importin-α7功能域第5和第6個外顯子設(shè)計一對小向?qū)NA（sgRNAs）并克隆入pX459載體,重組質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染A549細胞,構(gòu)建A549-importin-α7-KO細胞系;再分別用不同來源（人源、豬源和禽源）、不同亞型的甲型流感病毒與乙型流感病毒感染A549-importin-α7-KO細胞和野生型A549細胞,研究importin-α7對流感病毒生長特性的影響。經(jīng)測序和Western blotting驗證,成功構(gòu)建A549-importin-α7-KO細胞系;激光共聚焦觀察結(jié)果顯示,importin-α7敲除后vRNPs入核減少;同時Importin-α7敲除后流感病毒的生長均受到抑制,其中importin-α7對人流感病毒A/California/04/2009（... 

【文章來源】：病毒學(xué)報. 2017,33(06)北大核心

【文章頁數(shù)】：7 頁

【文章目錄】：
材料與方法
    1質(zhì)粒、病毒及細胞
    2主要試劑
    3 sgRNA oligo的設(shè)計及合成
    4重組質(zhì)粒pX459-importin-α7-sgRNAs的構(gòu)建及鑒定
    5細胞轉(zhuǎn)染及importin-α7基因敲除單克隆細胞系的篩選
    6單克隆細胞系測序鑒定
    7 Western blotting檢測細胞系中importin-α7蛋白的表達
    8 Importin-α7敲除對PR8-Luc復(fù)制的影響
    9 Importin-α7敲除對流感病毒vRNPs入核的影響
    10 Importin-α7敲除對不同來源、不同亞型流感病毒生長的影響
結(jié)果
    1 A549-importin-α7-KO細胞系的構(gòu)建和驗證
    2 Importin-α7敲除對PR8-Luc復(fù)制的影響
    3 Importin-α7敲除對流感病毒vRNPs入核的影響
    4 Importin-α7敲除對不同來源和不同亞型流感病毒生長的影響
討論



本文編號：3082758