發(fā)布時(shí)間：2020-05-26 00:33

【摘要】：目的:本實(shí)驗(yàn)旨在研究長(zhǎng)鏈脂肪酸受體(GPR120)對(duì)表達(dá)于巨噬細(xì)胞(MΦ)炎性細(xì)胞因子表達(dá)以及吞噬功能的影響并探討可能的信號(hào)機(jī)制。方法:1.8-10周Balb/c小鼠應(yīng)用RT-PCR對(duì)腹腔和肺GPR120和炎性細(xì)胞因子的表達(dá)水平進(jìn)行了檢測(cè),并對(duì)GPR120與細(xì)胞因子表達(dá)的相關(guān)性進(jìn)行分析。2.培養(yǎng)12小時(shí)Balb/c小鼠肺泡MΦ分對(duì)照組、TUG-891(GPR120選擇性激動(dòng)劑)處理組加入粒徑1.0um熒光微球(紅色熒光),待兩組細(xì)胞吞噬4小時(shí)后,流式細(xì)胞儀對(duì)兩組細(xì)胞吞噬情況進(jìn)行檢測(cè)分析。3.培養(yǎng)12小時(shí)Balb/c小鼠肺泡MΦ分對(duì)照組和TUG-891組FLOU3鈣染料對(duì)肺泡MΦ胞內(nèi)鈣染料染色,細(xì)胞置于活細(xì)胞工作站內(nèi),運(yùn)用激光共聚焦顯微鏡分別對(duì)對(duì)照組和TUG-891組肺泡MΦ熒光強(qiáng)度進(jìn)行記錄,對(duì)細(xì)胞內(nèi)鈣的變化進(jìn)行了測(cè)量和分析。結(jié)果:1.觀察到兩組MΦ內(nèi)都有GPR120表達(dá),但肺泡MΦ的GPR120表達(dá)水平顯著高于腹腔MΦ(t=9.712,P㩳0.01)。IL-1(t=7.771,P㩳0.01).和TNF-α(t=5.993,P㩳0.01)的表達(dá)水平在肺泡MΦ也顯著高于腹腔MΦ,IL-10(t=6.009,P㩳0.01.)和IL-6(t=7.027,P㩳0.01.)的表達(dá)水平在肺泡MΦ顯著低于腹腔MΦ。腹腔GPR120表達(dá)水平與IL-10(R=0.928)、IL-6(R=0.95)、TNF-α(R=0.93)呈正相關(guān),與IL-1負(fù)相關(guān)(R=-0.914,)。肺MΦ的GPR120表達(dá)水平與IL-1(R=0.911)、IL-6(R=0.76)、TNF-α(R=0.836)呈正相關(guān),與IL-10負(fù)相關(guān)(R=-0.955)。2.與對(duì)照組相比,激動(dòng)劑組肺泡MΦ吞噬熒光微球的能力明顯減弱(P㩳0.01)。3.相較于對(duì)照組,激動(dòng)劑在肺泡MΦ內(nèi)會(huì)引起了一過(guò)性胞內(nèi)鈣增高(P㩳0.05)。結(jié)論:GPR120受體在巨噬細(xì)胞上表達(dá),其在巨噬細(xì)胞功能調(diào)節(jié)中的作用主要表現(xiàn)為抑制炎癥相關(guān)因子的表達(dá)并且抑制吞噬,細(xì)胞內(nèi)鈣變換可能參與其胞內(nèi)部信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過(guò)程。
【圖文】：

功能研究方面兩種重要的工具，據(jù)此對(duì)比我們認(rèn)為 TUG-891 是現(xiàn)有的激理想的一種，在實(shí)驗(yàn)中選擇了 TUG-891 作為 GPR120 特異性激動(dòng)劑。這現(xiàn)和闡明，為 GPR120 的功能研究提供了有力手段，也是本實(shí)驗(yàn)選擇 TU特異性激動(dòng)劑的依據(jù)。四.GPR120 的功能及胞內(nèi)信號(hào)機(jī)制:關(guān)于 GPR120 對(duì)細(xì)胞功能的影響主要集中在以下方面：在味蕾細(xì)胞的主要功能與飲食脂肪的味覺(jué)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)作用有關(guān)，有報(bào)道人和嚙齒類(lèi)動(dòng)物中可能參與脂肪酸味覺(jué)轉(zhuǎn)導(dǎo)[26,27]，進(jìn)而影響人和嚙齒動(dòng)物的食物選擇，另外調(diào)節(jié)胃腸肽類(lèi)激素、膽囊收縮素（CCK）分泌、葡萄糖依賴(lài)性促胰島素分泌分泌、腸促胰島素激素（GLP）分泌、在脂肪形成和影響細(xì)胞增殖方面等實(shí)驗(yàn)結(jié)果所涉及的細(xì)胞內(nèi)部信號(hào)轉(zhuǎn)到通路各不相同，，有研究已報(bào)道 GPR12轉(zhuǎn)導(dǎo)通路圖[28]，見(jiàn)圖 1

所收集細(xì)胞呈陽(yáng)性染色（圖2A、B）。收集的腹腔與肺泡 MΦ均呈圓形，腹腔 MΦ平均面積為 82.6±9.4μm2，而肺泡 MΦ平均面積為 121.8±17.8μm2,二者具有明顯差異。流式分析表明所收集腹腔細(xì)胞和肺泡細(xì)胞的 CD68 陽(yáng)性比例分別為 94%±5%和 97%±3%，表明所收集的腹腔與肺泡細(xì)胞為高純度 MΦ（圖 2C、D）。具體結(jié)果如圖 2 所示。圖 2 腹腔和肺泡 MΦ的鑒定分析A：腹腔 MΦ的 CD68 染色；B：肺泡 MΦ的 CD68 染色；C：免疫染色的陰性對(duì)照；D：腹腔 MΦ
【學(xué)位授予單位】：遵義醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：R329.2

【參考文獻(xiàn)】

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1 徐志鵬;左國(guó)平;靳建亮;;巨噬細(xì)胞異質(zhì)性及其在炎癥調(diào)控中的研究進(jìn)展[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;2015年12期

2 Pierluigi Marzuillo;Anna Grandone;Laura Perrone;Emanuele Miraglia del Giudice;;Understanding the pathophysiological mechanisms in the pediatric non-alcoholic fatty liver disease: The role of genetics[J];World Journal of Hepatology;2015年11期

3 王愛(ài)清;萬(wàn)建美;彭麗;田海林;李冰燕;;流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)大鼠肺泡巨噬細(xì)胞吞噬功能方法探討[J];激光雜志;2014年01期

4 趙乃倩;榮青峰;張?chǎng)?張策;;GPR120的結(jié)構(gòu)特征、生物學(xué)功能及作用機(jī)制[J];生理科學(xué)進(jìn)展;2013年04期

5 李全忠;孫婧;韓金杰;錢(qián)宗杰;;辛伐他汀對(duì)小鼠炎癥型巨噬細(xì)胞極性的影響[J];中華醫(yī)學(xué)雜志;2013年26期

6 黃雪蓮,金昱,郭新彪,王蕓,朱彤,胡敏;沙塵暴PM_(2.5)、PM_(10)對(duì)大鼠肺泡巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響[J];衛(wèi)生研究;2004年02期

本文編號(hào)：2680988