【摘要】：古樹是獨特的風(fēng)景園林資源,是城市人文景觀和自然景觀的綜合載體,但是古樹面臨不同程度衰老甚至死亡的問題,保護(hù)古樹可以充分發(fā)揮其在園林綠化中的重要作用。為了保護(hù)古樹景觀資源,本文以陜西黃帝陵的側(cè)柏古樹為研究對象,以古樹上當(dāng)年生枝條莖尖為外植體,通過組織培養(yǎng)對古樹進(jìn)行克隆,完全保留了古樹的性狀;同時通過克隆端�；�,在分子水平研究古樹衰老,對古樹復(fù)壯進(jìn)行初步研究。主要的研究結(jié)果如下:1.滅菌方法的選擇:通過對外植體滅菌方法的篩選發(fā)現(xiàn),側(cè)柏古樹外植體適宜的消毒方法是先用75%酒精處理30 s,無菌水沖洗5次,然后用0.1%Hg Cl2消毒8 min,此時的污染率最低,死亡率也最低,成活率最高,初步解決了側(cè)柏古樹的滅菌問題。2.初代培養(yǎng)基篩選:利用MS、1/2MS、B5、WPM與DKW 5種基本培養(yǎng)基對側(cè)柏古樹的外植體進(jìn)行組織培養(yǎng),經(jīng)一個月培養(yǎng)后發(fā)現(xiàn),1/2MS培養(yǎng)基對側(cè)柏古樹嫩枝的組織培養(yǎng)有良好的效果,B5培養(yǎng)基誘導(dǎo)的效果比1/2MS稍差,誘導(dǎo)率低。MS、WPM與DKW培養(yǎng)基對外植體培養(yǎng)的效果都不理想,可能與培養(yǎng)基本身的營養(yǎng)有關(guān)。然后以1/2MS為基本培養(yǎng)基篩選出了NAA和6-BA適宜的使用濃度,最后得出初代培養(yǎng)最適宜培養(yǎng)基為:1/2MS+0.2 mg/L NAA+0.1 mg/L 6-BA。3.增殖培養(yǎng)基篩選:通過對不同基本培養(yǎng)基(MS、1/2MS、WPM、B5、DKW)和不同激素(6-BA、KT、NAA)組合的優(yōu)化,增殖最適培養(yǎng)基為:1/2MS+0.05 mg/L6-BA+0.2 mg/L NAA+0.1 mg/L KT。4.生根培養(yǎng)基的篩選:內(nèi)、外源激素的配比關(guān)系對不定根的形成起著決定性的作用。試驗表明,在生根培養(yǎng)中WPM效果較1/2MS好,這與初代培養(yǎng)、增殖培養(yǎng)時明顯不同。說明生根階段所需要的營養(yǎng)物質(zhì)有所不同,側(cè)柏古樹最適生根培養(yǎng)基為WPM+0.5mg/L NAA+0.5 mg/L IBA。5.三個端�；虻目寺�:應(yīng)用RACE技術(shù)從側(cè)柏中克隆出3個端粒基因的全長:Po TRF1、Po POT1和Po Ku70。Po TRF1基因長度為1464 bp,包括176 bp 5’-非編碼區(qū)(UTR,untranslated region),和361 bp的3'-UTR,26 bp的poly A尾巴,927 bp的開放閱讀框(ORF,open reading frame),編碼蛋白質(zhì)的分子量是119 k Da,等電點是5.04。Po POT1基因長度為1337 bp,包括163 bp 5’-UTR,和556 bp的3'-UTR,28 bp的poly A尾巴,618 bp的ORF,編碼蛋白質(zhì)的分子量是110 k Da,等電點是4.98。Po Ku70基因長度為1010 bp,包括81 bp 5’-UTR,和368 bp的3'-UTR,24 bp的poly A尾巴,561 bp的ORF,編碼蛋白質(zhì)的分子量是82 k Da,等電點是5.02。在NCBI中BLAST比對發(fā)現(xiàn):Po TRF1、Po POT1和Po Ku70編碼的蛋白質(zhì)序列與擬南芥和楊樹中的同源性分別為54%、43%;54%、44%;和70%、66%。
[Abstract]:Ancient trees are unique resources of landscape architecture and comprehensive carriers of urban human and natural landscape. However, ancient trees are faced with the problem of aging and even dying to varying degrees, so protecting ancient trees can give full play to their important role in landscape greening. In order to protect the ancient tree landscape resources, this paper takes the ancient Platycladus orientalis in Huangdi Mausoleum of Shaanxi Province as the research object, takes the old branch stem tip on the ancient tree as the explant, carries on the clone through the tissue culture to the ancient tree, completely retains the ancient tree characteristic; At the same time, by cloning telomere gene, the aging of ancient trees was studied at molecular level, and the rejuvenation of ancient trees was preliminarily studied. The main findings are as follows: 1: 1. The selection of sterilization method: through the screening of explant sterilization method, it was found that the suitable disinfection method for explants of Platycladus orientalis was to first treat them with 75% alcohol for 30 s, wash them with sterile water for 5 times, and then sterilize them with 0.1 Hg Cl 2 for 8 min. The pollution rate of the explants was the lowest at this time. The mortality rate was also the lowest and the survival rate was the highest. The problem of sterilizing the ancient trees of Platycladus orientalis was preliminarily solved. 2. 2. Screening of primary culture medium: the explants of ancient Platycladus orientalis were cultured in 5 basic media, MS1 / 2 MSB5 WPM and DKW, respectively. After one month of culture, it was found that 1 / 2 MS medium had a better effect on tissue culture of shoots of ancient Platycladus orientalis than that on 1 / 2 MS medium, and the induction rate was low. Both MSWPM and DKW medium were not effective in explant culture. It may be related to the nutrition of the medium itself. Then the suitable concentration of NAA and 6-BA was screened out on 1 / 2 MS as the basic medium. Finally, the optimal medium for primary culture was: 1 / 2 MS 0.2 mg / L NAA 0.1 mg / L 6-BA.3. Culture medium selection: by optimizing the combination of different basic medium (MS1 / 2MSPPMB5DKW) and different hormone (6-BAKTNAA), the optimal medium for proliferation was: 1 / 2 MS 0.05 mg / L 6-BA 0.2 mg / L NAA 0.1 mg / L KT.4. Selection of rooting medium: endogenous and exogenous hormones play a decisive role in the formation of adventitious roots. The results showed that the effect of WPM in rooting culture was better than that in 1 / 2 MS, which was obviously different from that in primary culture and proliferation culture. The optimum rooting medium of Platycladus orientalis was WPM 0.5 mg / L NAA 0.5 mg / L IBA.5. Cloning of three telomere genes: the full length of three telomere genes were cloned from Platycladus orientalis by race. The full length of the three telomere genes was 1464 BP in length, including the poly A tail of 361bp, the 3- UTR26 BP, and the 1464 BP length of the Po Ku70. Po TRF1 gene, including the 176bp UTRuntranslated region), and the 361bp 3- UTR26bp poly A tail motif of the three telomere genes, which were cloned from Platycladus orientalis by race technique. The molecular weight of ORF open reading frame), protein is 119k Da. the isoelectric point is 5.04.Po POT1 gene length is 1337 BP, including 163bp 5tr -UTRs, and 556bp poly A tail 618bp, the molecular weight of coding protein is 110k. The isoelectric point is 4.98.Po Ku70 gene with a length of 1010 BP, including 81bp 5r-UTR-UTRR, and 368bp 3H-UTR-24bp poly A tail 561bp ORF.The molecular weight of the protein is 82kDaand the isoelectric point is 5.02bp. In the NCBI, blast showed that the homology of the protein sequences encoded by the two proteins were 54443 and 5445, respectively, and 70666666 in Arabidopsis thaliana and poplar, respectively.
【學(xué)位授予單位】：中國林業(yè)科學(xué)研究院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：S791.38

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本文編號：2137401