【目的】炭疽病是南方葡萄的重要病害,刺葡萄是高抗炭疽病的重要野生葡萄資源,目前尚未見到關(guān)于葡萄炭疽菌侵染后的葡萄果皮酵母cDNA文庫的報道。本文構(gòu)建了葡萄炭疽菌侵染后刺葡萄果皮的酵母cDNA文庫,為葡萄抗炭疽病分子機理研究提供材料基礎(chǔ)。【方法】提取葡萄炭疽菌侵染后1、3、7 d的刺葡萄福安果皮總RNA,采用SMART的方法將總RNA反轉(zhuǎn)錄合成c DNA,使用試劑盒將cDNA純化,隨后將純化產(chǎn)物(雙鏈cDNA)酶切處理及短片段去除,獲得質(zhì)量良好的cDNA。將其克隆到pGADT7三框質(zhì)粒載體,經(jīng)純化精制,獲得初級c DNA文庫。對初級cDNA文庫擴增后,提取文庫質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到Y(jié)187酵母菌中,制作擴增的酵母文庫,并對酵母文庫進行鑒定�！窘Y(jié)果】經(jīng)檢測所構(gòu)建的初級cDNA文庫庫容約為5.2×10⁶ cfu,重組率約為97.92%,插入的片段長度主要分布在400～2 000 bp,具有良好的多態(tài)性。進一步獲得的Y187酵母文庫滴度約為6.0×10⁷ cfu·mL^-1�！窘Y(jié)論】構(gòu)建的葡萄炭疽菌誘導(dǎo)的刺葡萄果皮酵母cDNA文庫質(zhì)量符合酵母...

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