柑橘黃龍病菌主要致病種亞洲種（‘Candidatus Liberibacter asiaticus’,Las）具有完整的Sec依賴型分泌系統(tǒng),可分泌致病因子（效應(yīng)子）作用于寄主靶標(biāo)蛋白或基因,調(diào)控寄主的抗（感）病反應(yīng)。為了研究黃龍病菌Sec依賴型效應(yīng)子在柑橘中的致病機(jī)理及其寄主靶標(biāo)基因,本研究中從感病‘錦橙’中克隆了Las病原菌Sec依賴型效應(yīng)子基因SDE70（CLIBASIA₀2470）。生物信息分析顯示,SDE70蛋白全長132個氨基酸,N端20個氨基酸為典型信號肽。大腸桿菌堿性磷酸酶活性分析顯示,該信號肽具有胞外分泌功能。亞細(xì)胞定位顯示,SDE70::GFP融合蛋白在洋蔥細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核中積累。定量PCR分析發(fā)現(xiàn),耐黃龍病酸柚顯癥葉脈中SDE70表達(dá)量顯著低于未顯癥葉脈,相反,易感黃龍病‘錦橙’顯癥葉脈中表達(dá)顯著高于未顯癥葉脈;‘錦橙’根中SDE70表達(dá)量顯著高于葉脈,而幼葉葉脈中顯著低于老葉。SDE70在不同品種不同癥狀發(fā)育時期以及不同組織中表達(dá)差異顯著。利用酵母雙雜交試驗篩選獲得26個與SDE70互作的柑橘蛋白。GO富集分析表明,42.3%的蛋白質(zhì)與細(xì)胞內(nèi)... 

【文章來源】：園藝學(xué)報. 2020,47(08)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：12 頁

【部分圖文】：

SDE70蛋白二級結(jié)構(gòu)預(yù)測分析

如圖3，攜帶已知信號肽的陽性對照PET-phoA與含基因全長的融合蛋白PET-SDE70::mpohA為深藍(lán)色菌斑，而陰性對照與去掉信號肽序列的融合蛋白PET-trSDE70::mpohA為淺藍(lán)色菌斑，表明SDE70效應(yīng)子N端20個氨基酸序列為具有分泌功能的信號肽。圖3 SDE70蛋白質(zhì)信號肽驗證

圖4所示，轉(zhuǎn)入35S::SDE70:GFP融合基因的洋蔥表皮細(xì)胞中熒光分布均勻，與轉(zhuǎn)35S::GFP基因相似，均在細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核、質(zhì)膜中分布，但前者在細(xì)胞核中熒光較強(qiáng)。2.4 SDE70在柑橘中的表達(dá)

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]ADP核糖基化因子的結(jié)構(gòu)及其功能機(jī)制[J]. 王磊,宿紅艷,王昌留,穆春華.  細(xì)胞生物學(xué)雜志. 2007(05)

博士論文
[1]柑橘黃龍病的細(xì)胞病理及其寄主轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究[D]. 傅仕敏.西南大學(xué) 2014
[2]中國柑橘黃龍病病原調(diào)查、種群遺傳分化及其原噬菌體溶菌酶蛋白原核表達(dá)[D]. 蘇華楠.西南大學(xué) 2013

碩士論文
[1]CsSAMT-1基因在水楊酸信號響應(yīng)柑橘黃龍病侵染中的功能研究[D]. 白曉晶.西南大學(xué) 2018



本文編號：3423051