大豆除了含有大量的脂類和蛋白質外,還含有糖類和酚類物質,為解決難于從大豆中提取高質量DNA和傳統(tǒng)提取方法耗時長的問題,本研究以中豆41與天隆一號的幼嫩葉片(V3)和成熟種子作為材料,對高鹽低pH法進行改良,提高其裂解液pH值,同時結合冷凍裂解法縮短裂解時間,使用不同pH值醋酸鈉純化DNA,并與經(jīng)典CTAB法進行比較,評價其提取DNA的效果及其應用范圍。結果表明,高鹽高pH法對成熟種子的DNA提取效率較高,且蛋白與RNA污染少。CTAB法提取的DNA雖然完整性較高,但是耗時較長,蛋白與RNA污染較多。另外,高鹽高pH法提取的DNA PCR擴增條帶清晰,與常規(guī)CTAB法提取DNA擴增效果一致,但其DNA質量不能滿足高通量測序要求。綜上,改良的高鹽高pH法是一種快速有效的大豆DNA提取方法,可滿足常規(guī)分子試驗的要求。

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
    1.2 主要試劑和儀器
    1.3 試驗設計
    1.4 方法
        1.4.1 高鹽高pH法
        1.4.2 CTAB法
        1.4.3 DNA質量檢測
        1.4.4 PCR擴增檢測
        1.4.5 建庫合格性檢測
    1.5 數(shù)據(jù)分析
2 結果與分析
    2.1 不同方法提取DNA得率分析
    2.2 不同方法提取DNA質量分析
    2.3 PCR擴增結果
    2.4 建庫合格性檢測結果
3 討 論
4 結 論



本文編號：3779169