【目的】WRKY是轉(zhuǎn)錄因子大家族,在植物生長(zhǎng)發(fā)育及逆境脅迫應(yīng)答中發(fā)揮著核心調(diào)控作用。通過分析轉(zhuǎn)錄因子MsWRKY42在紫花苜�？鼓婢尺^程中的作用,為進(jìn)一步研究WRKY轉(zhuǎn)錄因子在紫花苜�？鼓娣肿诱{(diào)控中的作用奠定基礎(chǔ)�！痉椒ā客ㄟ^同源比對(duì)方法從紫花苜蓿轉(zhuǎn)錄組基礎(chǔ)數(shù)據(jù)庫中獲得MsWRKY42序列。使用MEGA-X對(duì)MsWRKY42蛋白序列及擬南芥序列進(jìn)行多序列比對(duì),構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹。通過PlantCARE預(yù)測(cè)分析MsWRKY42啟動(dòng)子的順式作用元件。采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qRT-PCR）方法分析MsWRKY42在紫花苜蓿不同組織中的表達(dá)量及其在NaCl(0.3 mol·L^-1)、PEG（15%）、4℃、40℃、低磷以及ABA(0.1×10^-3 mol·L^-1)處理后的表達(dá)量變化。構(gòu)建pCAMBIA1300-WRKY-GFP融合表達(dá)載體,通過農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化本氏煙草（Nicotiana benthamiana）,確定MsWRKY42蛋白的亞細(xì)胞定位。利用酵母單雜交系統(tǒng)檢測(cè)MsWRKY42和啟動(dòng)子區(qū)域順式作用元件W-box的體外結(jié)合活性... 

【文章來源】：中國農(nóng)業(yè)科學(xué). 2020,53(17)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：12 頁

【部分圖文】：

MsWRKY42蛋白的結(jié)合活性分析

將PCR產(chǎn)物純化回收后，連接至Peasy-T1-Blunt載體上，再轉(zhuǎn)化至DH5α大腸桿菌感受態(tài)中，挑取單菌落檢驗(yàn)。菌液PCR結(jié)果顯示，所選菌液能夠擴(kuò)增出與目的片段大小一致的DNA片段。將上述菌液送至生物公司測(cè)序，結(jié)果顯示與參考序列一致，表明MsWRKY42克隆成功。2.2 MsWRKY42的序列分析

采用q RT-PCR技術(shù)分析MsWRKY42在紫花苜蓿各個(gè)組織中的相對(duì)表達(dá)量。結(jié)果（圖7）表明，MsWRKY42在紫花苜蓿在各個(gè)組織中均有不同程度表達(dá)。其中在根、葉中的表達(dá)豐度較高，莖、花、莢果中次之，在芽中表達(dá)豐度最低。圖3 基于擬南芥和MsWRKY42構(gòu)建的WRKY系統(tǒng)發(fā)育樹

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]擬南芥WRKY61轉(zhuǎn)錄因子的轉(zhuǎn)錄活性與互作蛋白分析[J]. 范曉江,郭小華,牛芳芳,楊博,江元清.  西北植物學(xué)報(bào). 2018(01)
[2]紫花苜蓿耐鹽性研究進(jìn)展[J]. 張立全,張鳳英,哈斯阿古拉.  草業(yè)學(xué)報(bào). 2012(06)



本文編號(hào)：3443729