為了建立一種從茶樹嫩葉中快速提取基因組DNA的方法,筆者通過采用常溫研磨、常溫裂解、一步抽提等措施對CTAB提取法進行了改良和簡化,省去了DNA純化和使用RNase酶降解RNA兩個環(huán)節(jié)。使用該方法以茶樹嫩葉為材料提取基因組DNA,并進行紫外光譜法、瓊脂糖電泳、PCR擴增等方式檢測。結(jié)果表明,該方法提取的DNA,其260 nm/280 nm吸光度比值介于1.81～1.84,260 nm/230 nm吸光度在1.75～1.88;經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳檢測,獲得的DNA條帶較亮且無明顯拖尾現(xiàn)象;利用ISSR引物進行PCR檢測,能夠獲得清晰穩(wěn)定條帶。說明該方法操作快速簡便,提取的基因組DNA能夠滿足PCR反應(yīng)需要。 

【文章來源】：茶葉通訊. 2020,47(04)北大核心

【文章頁數(shù)】：4 頁

【部分圖文】：

6份茶樹基因組DNA的電泳圖譜

在去除蛋白、酚類、RNA等雜質(zhì)時，一般都會在粗提之后進行純化，粗提時進行兩次（采用氯仿∶異戊醇∶乙醇）抽提、純化時一次抽提以及使用RNase酶降解RNA，雖然有部分研究[3,4]在粗提DNA和純化過程中分別只進行了一次抽提，但在整個提取過程中共實施了兩次抽提。本試驗中，省去了DNA純化和使用RNase酶降解RNA兩個環(huán)節(jié)，并只在DNA粗提時進行一次抽提，依然獲取了較高質(zhì)量DNA，擴增出了清晰穩(wěn)定的茶樹ISSR圖譜，這是因為減少了氯仿等有機溶劑對DNA降解的影響、RNA在提取過程中會逐步自然降解以及PCR反應(yīng)對模板DNA的純度要求并不是很高。因此，本方法采用常溫研磨、常溫裂解、一步抽提，省去DNA純化和使用RNase酶降解RNA兩個環(huán)節(jié)，降低了操作難度，簡化了提取步驟，為現(xiàn)有報道中較為簡便的茶樹全基因組DNA提取方法[1-9]，且所獲得全基因組DNA量較大、降解較少、純度較高，是一種簡單快速、可用于PCR反應(yīng)的茶樹全基因組DNA提取方法。

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3330938