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TRPM7通道在鎘導致的PC12細胞損傷中的作用及機制研究

發(fā)布時間:2025-02-09 19:22
  鎘(cadmium,Cd)是一種有毒重金屬,通常以二價離子形式存在,是最具毒性的環(huán)境和工業(yè)污染物之一。Cd具有強烈的生物毒性,長期暴露在Cd環(huán)境中會導致腎臟、肝臟、肺、胰腺、睪丸以及骨骼等組織器官中積累大量的Cd,并造成嚴重的器官功能異常。此外,Cd還可以穿透血腦屏障在大腦神經元中積累,造成神經元產生過量活性氧,引發(fā)氧化應激甚至導致神經元凋亡,目前發(fā)現(xiàn)Cd也是阿爾茲海默癥、帕金森病等神經退行性疾病的重要誘因。由于Cd不是機體的必需元素,人們普遍認為體內的Cd可能是通過專門用于必需金屬的轉運機制進入細胞的。據(jù)研究,體內能夠轉運Cd進入細胞的載體通道有很多種,主要包括鐵離子轉運載體、鈣離子通道、鋅調控蛋白等。對人成骨細胞的研究發(fā)現(xiàn),TRPM7是Cd進入該細胞的重要通道。TRPM7屬于TRP超家族的一個蛋白,是一個非選擇性陽離子通道,對Ca2+、Mg2+等具有很高的滲透性,TRPM7在包括腦組織的幾乎所有組織中都有表達,并且參與多種生理過程。因此我們認為TRPM7也可能是Cd進入中樞神經細胞的重要途徑,但是,TRPM7通道是否參與鎘引起的神經元損傷目前尚未見報導。源自于大鼠腎上腺嗜鉻細胞腫瘤的...

【文章頁數(shù)】:73 頁

【學位級別】:碩士

【文章目錄】:
摘要
Abstract
英文縮略語表
第1章 前言
    1.1 鎘誘導的生物毒性及其作用機制
        1.1.1 鎘的生物毒性
        1.1.2 鎘生物毒性的作用機制
    1.2 TRPM7通路與鎘誘導的生物毒性
        1.2.1 TRPM7通路參與鎘攝取
        1.2.2 TRPM7通路的阻斷劑
    1.3 選題的目的及意義
第2章 TRPM7阻斷劑NS8593對細胞鎘損傷的保護作用
    2.1 實驗材料
        2.1.1 實驗對象
        2.1.2 主要實驗試劑
        2.1.3 主要實驗儀器設備
        2.1.4 主要溶液的配制及儲存
    2.2 實驗方法
        2.2.1 PC12細胞的培養(yǎng)
        2.2.2 PC12細胞鎘損傷模型的建立
        2.2.3 MTT法檢測細胞存活率
        2.2.4 LDH法測定乳酸脫氫酶的釋放
        2.2.5 Western Blot實驗方法
        2.2.6 數(shù)據(jù)分析
    2.3 實驗結果
        2.3.1 鎘損傷模型的成功建立
        2.3.2 TRPM7在PC12細胞及皮層神經元的表達
        2.3.3 TRPM7通道阻斷劑NS8593顯著減弱鎘對PC12細胞活力的損傷作用
        2.3.4 驗證TRPM7通道參與了PC12細胞對鎘的吸收
    2.4 討論
第3章 TRPM7阻斷劑NS8593抑制鎘誘導PC12細胞氧化應激
    3.1 實驗材料
        3.1.1 實驗對象
        3.1.2 主要實驗試劑
        3.1.3 主要實驗儀器設備
        3.1.4 主要溶液的配制及儲存
    3.2 實驗方法
        3.2.1 DCFH-DA探針檢測細胞內ROS水平
        3.2.2 TBA法檢測細胞脂質氧化水平
        3.2.3 試劑盒檢測細胞內SOD和CAT水平
        3.2.4 數(shù)據(jù)分析
    3.3 實驗結果
        3.3.1 NS8593減弱鎘損傷引起的細胞內ROS水平的升高
        3.3.2 NS8593減弱鎘損傷誘導的細胞MDA水平的升高
        3.3.3 NS8593減弱鎘損傷引起的細胞內抗氧化酶SOD和CAT水平的下降
    3.4 討論
第4章 TRPM7阻斷劑NS8593抑制鎘損傷引起PC12細胞凋亡
    4.1 實驗材料
        4.1.1 實驗對象
        4.1.2 主要實驗試劑
        4.1.3 主要實驗儀器設備
        4.1.4 主要溶液的配制及儲存
    4.2 實驗方法
        4.2.1 JC-1檢測細胞線粒體膜電位
        4.2.2 TUNEL、DAPI染色
        4.2.3 Western Blot實驗方法
        4.2.4 數(shù)據(jù)分析
    4.3 實驗結果
        4.3.1 NS8593減弱鎘損傷誘導的細胞線粒體膜電位的下降
        4.3.2 TUNEL、DAPI染色法觀察NS8593減輕鎘損傷引起的PC12細胞凋亡
        4.3.3 NS8593對鎘損傷誘導的凋亡相關蛋白表達的影響
        4.3.4 NS8593對鎘損傷條件下細胞通路的影響
    4.4 討論
第5章 結論與望展
    5.1 結論
    5.2 展望
參考文獻
致謝



本文編號:4032743

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