鎘(cadmium,Cd)是一種有毒重金屬,通常以二價(jià)離子形式存在,是最具毒性的環(huán)境和工業(yè)污染物之一。Cd具有強(qiáng)烈的生物毒性,長期暴露在Cd環(huán)境中會導(dǎo)致腎臟、肝臟、肺、胰腺、睪丸以及骨骼等組織器官中積累大量的Cd,并造成嚴(yán)重的器官功能異常。此外,Cd還可以穿透血腦屏障在大腦神經(jīng)元中積累,造成神經(jīng)元產(chǎn)生過量活性氧,引發(fā)氧化應(yīng)激甚至導(dǎo)致神經(jīng)元凋亡,目前發(fā)現(xiàn)Cd也是阿爾茲海默癥、帕金森病等神經(jīng)退行性疾病的重要誘因。由于Cd不是機(jī)體的必需元素,人們普遍認(rèn)為體內(nèi)的Cd可能是通過專門用于必需金屬的轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制進(jìn)入細(xì)胞的。據(jù)研究,體內(nèi)能夠轉(zhuǎn)運(yùn)Cd進(jìn)入細(xì)胞的載體通道有很多種,主要包括鐵離子轉(zhuǎn)運(yùn)載體、鈣離子通道、鋅調(diào)控蛋白等。對人成骨細(xì)胞的研究發(fā)現(xiàn),TRPM7是Cd進(jìn)入該細(xì)胞的重要通道。TRPM7屬于TRP超家族的一個(gè)蛋白,是一個(gè)非選擇性陽離子通道,對Ca2+、Mg2+等具有很高的滲透性,TRPM7在包括腦組織的幾乎所有組織中都有表達(dá),并且參與多種生理過程。因此我們認(rèn)為TRPM7也可能是Cd進(jìn)入中樞神經(jīng)細(xì)胞的重要途徑,但是,TRPM7通道是否參與鎘引起的神經(jīng)元損傷目前尚未見報(bào)導(dǎo)。源自于大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞腫瘤的...

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【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語表
第1章 前言
    1.1 鎘誘導(dǎo)的生物毒性及其作用機(jī)制
        1.1.1 鎘的生物毒性
        1.1.2 鎘生物毒性的作用機(jī)制
    1.2 TRPM7通路與鎘誘導(dǎo)的生物毒性
        1.2.1 TRPM7通路參與鎘攝取
        1.2.2 TRPM7通路的阻斷劑
    1.3 選題的目的及意義
第2章 TRPM7阻斷劑NS8593對細(xì)胞鎘損傷的保護(hù)作用
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)對象
        2.1.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑
        2.1.3 主要實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備
        2.1.4 主要溶液的配制及儲存
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 PC12細(xì)胞的培養(yǎng)
        2.2.2 PC12細(xì)胞鎘損傷模型的建立
        2.2.3 MTT法檢測細(xì)胞存活率
        2.2.4 LDH法測定乳酸脫氫酶的釋放
        2.2.5 Western Blot實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.6 數(shù)據(jù)分析
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.3.1 鎘損傷模型的成功建立
        2.3.2 TRPM7在PC12細(xì)胞及皮層神經(jīng)元的表達(dá)
        2.3.3 TRPM7通道阻斷劑NS8593顯著減弱鎘對PC12細(xì)胞活力的損傷作用
        2.3.4 驗(yàn)證TRPM7通道參與了PC12細(xì)胞對鎘的吸收
    2.4 討論
第3章 TRPM7阻斷劑NS8593抑制鎘誘導(dǎo)PC12細(xì)胞氧化應(yīng)激
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)對象
        3.1.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑
        3.1.3 主要實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備
        3.1.4 主要溶液的配制及儲存
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 DCFH-DA探針檢測細(xì)胞內(nèi)ROS水平
        3.2.2 TBA法檢測細(xì)胞脂質(zhì)氧化水平
        3.2.3 試劑盒檢測細(xì)胞內(nèi)SOD和CAT水平
        3.2.4 數(shù)據(jù)分析
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3.1 NS8593減弱鎘損傷引起的細(xì)胞內(nèi)ROS水平的升高
        3.3.2 NS8593減弱鎘損傷誘導(dǎo)的細(xì)胞MDA水平的升高
        3.3.3 NS8593減弱鎘損傷引起的細(xì)胞內(nèi)抗氧化酶SOD和CAT水平的下降
    3.4 討論
第4章 TRPM7阻斷劑NS8593抑制鎘損傷引起PC12細(xì)胞凋亡
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.1.1 實(shí)驗(yàn)對象
        4.1.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑
        4.1.3 主要實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備
        4.1.4 主要溶液的配制及儲存
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 JC-1檢測細(xì)胞線粒體膜電位
        4.2.2 TUNEL、DAPI染色
        4.2.3 Western Blot實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.4 數(shù)據(jù)分析
    4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.3.1 NS8593減弱鎘損傷誘導(dǎo)的細(xì)胞線粒體膜電位的下降
        4.3.2 TUNEL、DAPI染色法觀察NS8593減輕鎘損傷引起的PC12細(xì)胞凋亡
        4.3.3 NS8593對鎘損傷誘導(dǎo)的凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)的影響
        4.3.4 NS8593對鎘損傷條件下細(xì)胞通路的影響
    4.4 討論
第5章 結(jié)論與望展
    5.1 結(jié)論
    5.2 展望
參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號：4032743