重金屬鎘污染嚴(yán)重威脅著人們的生存環(huán)境以及身心健康,與傳統(tǒng)的物理、化學(xué)等修復(fù)技術(shù)相比,微生物因具有繁殖快、分布廣、適應(yīng)性和代謝能力強(qiáng)等優(yōu)勢(shì),微生物修復(fù)技術(shù)備受廣大科研工作者青睞。課題組前期以湖南省多地鎘污染土壤的混合樣品為材料,從中選育出一株在固體培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基中能夠分別耐受50 mmol/L和45mmol/L Cd²⁺的鏈霉菌Streptomyces sp.strain Cd TB01,并對(duì)該菌的培養(yǎng)條件以及吸附Cd²⁺的條件進(jìn)行了優(yōu)化,發(fā)現(xiàn)具有應(yīng)用于鎘污染環(huán)境治理的潛力。為了揭示鏈霉菌Streptomyces sp.strain Cd TB01的耐鎘作用機(jī)理,完成了該菌株的全基因組圖譜。本研究在此基礎(chǔ)之上,通過(guò)基因組序列分析、基因克隆、體外表達(dá)、定點(diǎn)突變以及功能驗(yàn)證等方法挖掘Streptomyces sp.strain Cd TB01中的耐鎘功能相關(guān)基因。獲得如下主要研究結(jié)果:(1)通過(guò)克隆與測(cè)序分析從Streptomyces sp.strain Cd TB01中獲得兩個(gè)鎘脅迫應(yīng)答候選基因orf09544＿6358和orf11342＿7...

【文章頁(yè)數(shù)】：71 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
英文縮寫(xiě)詞中英文對(duì)照表
1 文獻(xiàn)綜述
    1.1 重金屬鎘
    1.2 重金屬鎘污染
        1.2.1 鎘污染現(xiàn)狀
        1.2.2 鎘污染的特點(diǎn)
        1.2.3 鎘污染的危害
            1.2.3.1 鎘污染對(duì)植物的危害
            1.2.3.2 鎘污染對(duì)人體的危害
    1.3 鎘污染的治理
    1.4 微生物耐鎘作用機(jī)制
        1.4.1 阻止鎘的內(nèi)流
            1.4.1.1 菌體表面吸附
            1.4.1.2 胞外沉淀
            1.4.1.3 阻斷離子通道
        1.4.2 胞內(nèi)轉(zhuǎn)化
        1.4.3 外排作用
            1.4.3.1 P-type ATPase
            1.4.3.2 CDF家族
            1.4.3.3 CzcCBA轉(zhuǎn)運(yùn)體
    1.5 研究的目的與意義
    1.6 技術(shù)路線
2 材料與方法
    2.1 試驗(yàn)材料與試劑
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.2 化學(xué)試劑
        2.1.3 培養(yǎng)基
        2.1.4 常用儀器
    2.2 試驗(yàn)方法
        2.2.1 目的基因的克隆
        2.2.2 生物信息學(xué)分析
        2.2.3 原核表達(dá)載體的構(gòu)建
        2.2.4 原核表達(dá)與耐鎘特性的鑒定
        2.2.5 定點(diǎn)飽和突變
3 結(jié)果與分析
    3.1 目的基因的克隆和序列分析
        3.1.1 目的基因的克隆
        3.1.2 序列分析
        3.1.3 進(jìn)化樹(shù)分析
    3.2 原核表達(dá)載體構(gòu)建及耐鎘特性的分析
        3.2.1 pET30a(+)-6358、pET30a(+)-7483 載體載體構(gòu)建
        3.2.2 SDS-PAGE電泳
        3.2.3 耐鎘特性分析
    3.3 定點(diǎn)飽和突變
        3.3.1 突變位點(diǎn)選擇
        3.3.2 突變體載體構(gòu)建
        3.3.3 突變體耐鎘特性分析
4 討論
    4.1 CysK/M-6358初步鑒定為半胱氨酸合成酶CysK/M家族蛋白
    4.2 CorA-7483 初步鑒定為Mg/Co轉(zhuǎn)運(yùn)子
    4.3 耐鎘鏈霉菌Streptomyces sp.strain CdTB01具有一定的應(yīng)用前景
5 結(jié)論、創(chuàng)新點(diǎn)及下一步實(shí)驗(yàn)計(jì)劃
    5.1 結(jié)論
    5.2 創(chuàng)新點(diǎn)
    5.3 下一步實(shí)驗(yàn)計(jì)劃
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡(jiǎn)介



本文編號(hào)：3846838