【目的】制備特異性識(shí)別對(duì)硫磷(PA)的單克隆抗體,建立其間接競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫吸附分析方法(ic-ELISA),為實(shí)現(xiàn)對(duì)硫磷的農(nóng)殘快檢提供技術(shù)支持�！痉椒ā恳曰衔�4-(二乙氧基硫代磷酸酯基)苯甲酸為半抗原,分別與牛血清白蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA)偶聯(lián)制備人工抗原,免疫7周齡Balb/c雌性小鼠,取抗血清效價(jià)最高、特異性最優(yōu)小鼠的脾臟細(xì)胞與SP2/0骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞融合,采用間接酶聯(lián)免疫方法(i-ELISA)及ic-ELISA分別評(píng)價(jià)融合細(xì)胞株的陽(yáng)性和特異性,通過(guò)有限稀釋法篩選穩(wěn)定分泌對(duì)硫磷抗體的單克隆細(xì)胞株。再通過(guò)棋盤格試驗(yàn)篩選出抗原抗體最佳工作濃度組合建立對(duì)硫磷ic-ELISA標(biāo)準(zhǔn)曲線,并基于對(duì)硫磷單克隆抗體與各結(jié)構(gòu)類似物的交叉反應(yīng)率,評(píng)估ic-ELISA的特異性。采購(gòu)西紅柿樣品進(jìn)行對(duì)硫磷的添加回收試驗(yàn),運(yùn)用氣相色譜法(GC)驗(yàn)證ic-ELISA的準(zhǔn)確性�！窘Y(jié)果】成功合成對(duì)硫磷人工抗原PA-BSA和PA-OVA,經(jīng)5次免疫后融合小鼠的血清效價(jià)為8×103;通過(guò)有限稀釋法篩選獲得靈敏度高、特異性最強(qiáng)的對(duì)硫磷單克隆細(xì)胞株4F11A10。以2μg/mL包被抗原PA-OVA、0.25...

【文章頁(yè)數(shù)】：8 頁(yè)

【文章目錄】：
0 引言
1 材料與方法
    1.1 試驗(yàn)材料
    1.2 對(duì)硫磷抗原合成及單克隆抗體制備
        1.2.1 對(duì)硫磷半抗原、完全抗原合成及鑒定
        1.2.2 免疫方案及小鼠血清效價(jià)測(cè)定
        1.2.3 細(xì)胞融合與單克隆抗體篩選
        1.2.4 單克隆抗體制備及純化
    1.3 對(duì)硫磷ic-ELISA建立
        1.3.1 抗原抗體最佳工作濃度篩選
        1.3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線建立
        1.3.3 特異性分析
        1.3.4 基質(zhì)效應(yīng)影響和方法準(zhǔn)確性分析
        1.3.5 GC測(cè)定對(duì)硫磷含量
2 結(jié)果與分析
    2.1 人工抗原鑒定結(jié)果
    2.2 融合小鼠的篩選結(jié)果
    2.3 單克隆抗體的制備結(jié)果
    2.4 最佳抗原抗體工作濃度的篩選結(jié)果
    2.5 ic-ELISA檢測(cè)對(duì)硫磷的標(biāo)準(zhǔn)曲線
    2.6 特異性分析結(jié)果
    2.7 實(shí)際樣品檢測(cè)結(jié)果
3 討論
4 結(jié)論



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