發(fā)布時間：2022-01-17 15:33

　　MLO基因是植物中特有的一類抗病負(fù)調(diào)控因子,該基因突變導(dǎo)致植物產(chǎn)生廣譜抗病性。為研究MLO基因在辣椒中表達(dá)模式及功能分析,以前期本課題組通過SSH文庫獲得的ESTs,設(shè)計引物,采用RT-PCR和RACE的方法,成功克隆了一個CaMLO4基因,并對該基因的特性和表達(dá)模式進(jìn)行了初步分析,結(jié)果顯示了該CaMLO4基因可能參與辣椒白粉病的調(diào)控過程。 

【文章來源】：綠色科技. 2020,(02)

【文章頁數(shù)】：3 頁

【部分圖文】：

總RNA質(zhì)量檢測

跨膜結(jié)構(gòu)域是膜中蛋白與膜脂結(jié)合的主要部位，一般由20個左右的疏水氨基酸殘基組成，形成α螺旋，與膜脂相結(jié)合。預(yù)測和分析跨膜結(jié)構(gòu)域?qū)φJ(rèn)識蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)、功能、分類以及在細(xì)胞中的作用部位均存在一定的意義。利用TMHMM2.0Serve在線軟件對CaM-LO4基因的氨基酸進(jìn)行了跨膜結(jié)構(gòu)域的分析。如圖3所示，CaMLO4蛋白的跨膜結(jié)構(gòu)預(yù)測結(jié)果均顯示包含6個跨膜結(jié)構(gòu)（seven-TM）。CaMLO4蛋白的6次跨膜結(jié)構(gòu)域，分別在15-35,61-83,157-179,281-300,305-322,392-414個氨基酸處形成跨膜的結(jié)構(gòu)域。利用NCBI中的Conserved Domain Database(CDD）數(shù)據(jù)庫對CaMLO4蛋白的保守結(jié)構(gòu)域進(jìn)行預(yù)測，結(jié)果顯示（圖4）該蛋白為MLO蛋白超家族成員。利用在線軟件PSORT II Prediction分析CaMLO4蛋白的亞細(xì)胞定位，發(fā)現(xiàn)該蛋白在plasma membrane中分布最多，達(dá)60.9%，其次為endoplasmic reticulum和vacuolar，達(dá)13.0%，再次是nuclear,mitochondrial,Golgi中也有分布，達(dá)4.3%。利用在線軟件SWISS-MODEL對CaMLO4蛋白進(jìn)行同源模建，預(yù)測其三級結(jié)構(gòu)模型，其最佳模型是（圖5），序列一致性為23.08%；另一模型是4ib4.1.A。

RT-PCR分析表明（圖6），樣品在35個循環(huán)時就有大量擴(kuò)增產(chǎn)物出現(xiàn)，說明供試基因在白粉菌接種后的cDNA群體中表達(dá)豐度較高，在未接種白粉時CaMLO4基因有一定的本底表達(dá)，接種白粉病菌后24h表達(dá)量開始升高，36h時達(dá)到最大，后續(xù)出現(xiàn)了較明顯的下調(diào)，基因的Northern雜交中（圖7），可以看出，在0h時就略微有表達(dá)，在36h時開始增加，并且在以后的48h表達(dá)量最高，與RT-PCR驗證有一些區(qū)別。這與已經(jīng)報道的擬南芥和甜瓜MLO基因表達(dá)模式相似，說明CaMLO4基因可能參與辣椒白粉病的調(diào)控過程。圖5 CaMLO4蛋白三級結(jié)構(gòu)預(yù)測結(jié)果

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]煙草NtMLO5a和NtMLO5b基因克隆和表達(dá)分析[J]. 張孝廉,張吉順,郭玉雙,雷波,趙德剛.  植物生理學(xué)報. 2019(02)
[2]不同物種Mlo基因生物信息學(xué)分析[J]. 陳玲,邱顯欽,張顥,晏慧君,王其剛,唐開學(xué).  西南農(nóng)業(yè)學(xué)報. 2012(04)
[3]抗白粉病小偃麥衍生系的遺傳學(xué)研究[J]. 劉建霞,溫日宇,周鳳,王潤梅,武擘.  廣東農(nóng)業(yè)科學(xué). 2011(02)
[4]殼寡糖誘導(dǎo)辣椒抗白粉病的初步研究[J]. 肖仲久,蔣選利,李小霞,莫熙禮.  湖北農(nóng)業(yè)科學(xué). 2009(03)
[5]小麥TaMlo基因的原核表達(dá)、抗體制備及細(xì)胞化學(xué)分析（簡報）[J]. 李凡,胡東維,陳鋒,崔曉峰.  實驗生物學(xué)報. 2005(06)
[6]茄科蔬菜白粉病的發(fā)生與防治[J]. 李明遠(yuǎn).  中國蔬菜. 2004(06)
[7]甘肅省辣椒病害新記錄——辣椒白粉病[J]. 白濱,胡冠芳.  甘肅農(nóng)業(yè)科技. 2002(07)
[8]新疆辣椒病害一新紀(jì)錄——辣椒白粉病[J]. 方德立,賈菊生,張麗,方勇,閆秀玲.  新疆農(nóng)業(yè)科學(xué). 2002(01)

博士論文
[1]辣椒應(yīng)答逆境的轉(zhuǎn)錄譜分析及相關(guān)候選基因cDNA分離與鑒定[D]. 林明.福建農(nóng)林大學(xué) 2008



本文編號：3594984