MLO基因是植物中特有的一類抗病負(fù)調(diào)控因子,該基因突變導(dǎo)致植物產(chǎn)生廣譜抗病性。為研究MLO基因在辣椒中表達(dá)模式及功能分析,以前期本課題組通過SSH文庫獲得的ESTs,設(shè)計(jì)引物,采用RT-PCR和RACE的方法,成功克隆了一個(gè)CaMLO4基因,并對該基因的特性和表達(dá)模式進(jìn)行了初步分析,結(jié)果顯示了該CaMLO4基因可能參與辣椒白粉病的調(diào)控過程。 

【文章來源】：綠色科技. 2020,(02)

【文章頁數(shù)】：3 頁

【部分圖文】：

總RNA質(zhì)量檢測

跨膜結(jié)構(gòu)域是膜中蛋白與膜脂結(jié)合的主要部位，一般由20個(gè)左右的疏水氨基酸殘基組成，形成α螺旋，與膜脂相結(jié)合。預(yù)測和分析跨膜結(jié)構(gòu)域?qū)φJ(rèn)識蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)、功能、分類以及在細(xì)胞中的作用部位均存在一定的意義。利用TMHMM2.0Serve在線軟件對CaM-LO4基因的氨基酸進(jìn)行了跨膜結(jié)構(gòu)域的分析。如圖3所示，CaMLO4蛋白的跨膜結(jié)構(gòu)預(yù)測結(jié)果均顯示包含6個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)（seven-TM）。CaMLO4蛋白的6次跨膜結(jié)構(gòu)域，分別在15-35,61-83,157-179,281-300,305-322,392-414個(gè)氨基酸處形成跨膜的結(jié)構(gòu)域。利用NCBI中的Conserved Domain Database(CDD）數(shù)據(jù)庫對CaMLO4蛋白的保守結(jié)構(gòu)域進(jìn)行預(yù)測，結(jié)果顯示（圖4）該蛋白為MLO蛋白超家族成員。利用在線軟件PSORT II Prediction分析CaMLO4蛋白的亞細(xì)胞定位，發(fā)現(xiàn)該蛋白在plasma membrane中分布最多，達(dá)60.9%，其次為endoplasmic reticulum和vacuolar，達(dá)13.0%，再次是nuclear,mitochondrial,Golgi中也有分布，達(dá)4.3%。利用在線軟件SWISS-MODEL對CaMLO4蛋白進(jìn)行同源模建，預(yù)測其三級結(jié)構(gòu)模型，其最佳模型是（圖5），序列一致性為23.08%；另一模型是4ib4.1.A。

RT-PCR分析表明（圖6），樣品在35個(gè)循環(huán)時(shí)就有大量擴(kuò)增產(chǎn)物出現(xiàn)，說明供試基因在白粉菌接種后的cDNA群體中表達(dá)豐度較高，在未接種白粉時(shí)CaMLO4基因有一定的本底表達(dá)，接種白粉病菌后24h表達(dá)量開始升高，36h時(shí)達(dá)到最大，后續(xù)出現(xiàn)了較明顯的下調(diào)，基因的Northern雜交中（圖7），可以看出，在0h時(shí)就略微有表達(dá)，在36h時(shí)開始增加，并且在以后的48h表達(dá)量最高，與RT-PCR驗(yàn)證有一些區(qū)別。這與已經(jīng)報(bào)道的擬南芥和甜瓜MLO基因表達(dá)模式相似，說明CaMLO4基因可能參與辣椒白粉病的調(diào)控過程。圖5 CaMLO4蛋白三級結(jié)構(gòu)預(yù)測結(jié)果

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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