【目的】galectin-1是凝集素的一種,廣泛存在于各種生物體內(nèi),在生長(zhǎng)發(fā)育、免疫調(diào)節(jié)方面起重要作用。本研究克隆和表達(dá)了松材線蟲的galectin-1蛋白,并分析了各個(gè)齡期的表達(dá)量�！痉椒ā吭O(shè)計(jì)引物,擴(kuò)增松材線蟲的galectin-1基因,使用雙酶切的方法連接p ET-28a載體和目的基因,轉(zhuǎn)化到大腸桿菌DH5α感受態(tài)細(xì)胞,篩選陽(yáng)性克隆;在不同溫度下,用不同濃度的異丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）誘導(dǎo)表達(dá),Western blot檢驗(yàn)蛋白表達(dá)情況;采用RT-PCR技術(shù)檢驗(yàn)松材線蟲各個(gè)齡期galectin-1基因的表達(dá)情況。【結(jié)果】由SMART和Predict Protein軟件分析可知,該蛋白有2個(gè)結(jié)構(gòu)域,并且主要由無(wú)規(guī)卷曲和β折疊構(gòu)成;生物學(xué)信息分析顯示,松材線蟲的galectin-1與小卷蛾斯氏線蟲的相似性更高;與日本血吸蟲相比,線蟲能很好地聚集在一個(gè)分支上。Western blot檢測(cè)純化蛋白大小與查詢所得蛋白分子質(zhì)量一致。RT-q PCR結(jié)果顯示,以繁殖型2齡松材線蟲（L₂）為對(duì)照,galectin-1基因在繁殖型3齡（L₃）... 

【文章來源】：生物安全學(xué)報(bào). 2020,29(02)CSCD

【文章頁(yè)數(shù)】：8 頁(yè)

【部分圖文】：

松材線蟲galectin-1蛋白結(jié)構(gòu)域的預(yù)測(cè)

由PredictProtein軟件分析可知，galectin-1蛋白的二級(jí)結(jié)構(gòu)中無(wú)規(guī)卷曲占54.35%，β折疊占45.65%，沒有α螺旋。使用SWISS-MODEL軟件對(duì)galectin-1蛋白同源建模，顯示出該蛋白主要由無(wú)規(guī)卷曲和β折疊組成，結(jié)果與Predict Protein軟件一致。每個(gè)半乳凝素中，2個(gè)CRD的結(jié)構(gòu)相似，每個(gè)CRD具有典型的半乳凝素折疊，該褶皺由反平行的β-折疊構(gòu)成，β-折疊由β-三明治組合組成，沒有任何α-螺旋(圖2)。2.4 松材線蟲galectin-1同源序列對(duì)比及系統(tǒng)發(fā)育樹

通過對(duì)松材線蟲galectin-1蛋白序列的blast與氨基酸系列分析(圖3)，發(fā)現(xiàn)松材線蟲與小卷蛾斯氏線蟲Steinernema carpocapsae(Weiser)(TMS35925.1)的相似性最高，為84.36%;與鼠類圓線蟲Strongyloides ratti Sandground(XP＿024498502.1)相似性為82.01%。以日本血吸蟲Schistosoma japonicum Katsurada為外群，用MAGE 7.0建立成系統(tǒng)發(fā)育樹(圖4)，線蟲都聚集在一個(gè)大分支上，而小卷蛾斯氏線蟲、鼠類圓線蟲和秀麗桿線蟲Caenorhabditis elegans在同一個(gè)小分支上，與blast的結(jié)果一致。圖4 galectin-1與其同源基因基于氨基酸序列構(gòu)建的進(jìn)化樹(鄰接法)

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]攜帶與非攜帶松材線蟲的松墨天牛miRNA表達(dá)譜比較分析[J]. 寧?kù)o,張賓,田浩楷,柳小龍,楊炳琰,趙莉藺.  生物安全學(xué)報(bào). 2018(01)
[2]廣州管圓線蟲半乳凝素基因的克隆表達(dá)、蛋白純化及免疫反應(yīng)性研究[J]. 郝麗,吳焜,陳曉光,王瓊.  南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 2007(05)



本文編號(hào)：3510979