發(fā)布時(shí)間：2024-04-22 00:37

　　重金屬污染是世界普遍存在的環(huán)境問題。目前,重金屬的生物修復(fù)因其成本低,無二次污染越來越被人們重視。植物吸收重金屬是目前研究最多、應(yīng)用最廣的生物修復(fù)重金屬技術(shù)。微生物修復(fù)是另一種較有前景的技術(shù)。目前相關(guān)研究的重點(diǎn)和難點(diǎn)在于獲得對重金屬具有天然抗性或在各種環(huán)境中都能旺盛生長的微生物和高親和力、高特異性的金屬結(jié)合肽。此外,利用植物和微生物之間共生等關(guān)系,將植物和微生物聯(lián)合培養(yǎng)處理重金屬,可望更好地修復(fù)環(huán)境中重金屬的污染。 本研究在本實(shí)驗(yàn)室前期工作的基礎(chǔ)上,將利用噬菌體十二肽隨機(jī)庫篩選得到的Cd重金屬結(jié)合肽經(jīng)基因重組展示在實(shí)驗(yàn)室菌XLI-Blue和野生大腸桿菌的表面。通過瓊脂糖凝膠電泳、Western、ELISA等實(shí)驗(yàn),確認(rèn)重金屬結(jié)合肽在大腸桿菌表面的正確展示。然后對這些工程菌進(jìn)行Cd重金屬的耐受和Cd重金屬吸附能力的測試,證實(shí)導(dǎo)入重金屬結(jié)合肽的工程菌對Cd重金屬的耐受能力有顯著地提高。重組實(shí)驗(yàn)室菌對重金屬的耐受結(jié)果如下：XLI-Blue-MBP1>XL1-Blue-MBP2>XL1-Blue-HAGS>XL1-Blue,重組野生菌對重金屬的耐受結(jié)果如下：Wild-MBP1&...

【文章頁數(shù)】：70 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮寫詞表
第1章 緒論
    1.1 重金屬污染及修復(fù)現(xiàn)狀
        1.1.1 重金屬污染的現(xiàn)狀
        1.1.2 重金屬污染的修復(fù)
    1.2 重金屬結(jié)合蛋白(肽)
        1.2.1 天然金屬結(jié)合肽
        1.2.2 富含Cys酸和His的金屬結(jié)合短肽
        1.2.3 高效專一金屬結(jié)合肽的篩選
    1.3 微生物表面展示技術(shù)
        1.3.1 革蘭氏陰性細(xì)菌表面展示系統(tǒng)
        1.3.2 革蘭氏陽性細(xì)菌表面展示系統(tǒng)
        1.3.3 酵母菌表面展示系統(tǒng)
    1.4 本課題研究意義、目的及內(nèi)容
        1.4.1 課題研究背景與研究目的、意義
        1.4.2 研究內(nèi)容
第2章 工程菌對Cd等重金屬的耐受及吸附作用
    2.1 引言
    2.2 實(shí)驗(yàn)材料
        2.2.1 主要儀器
        2.2.2 主要試劑
        2.2.3 主要試劑配制
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 工程菌展示肽的菌體ELISA檢測
        2.3.2 不同重組實(shí)驗(yàn)室菌對同等濃度重金屬溶液的耐受曲線
        2.3.3 不同重組野生菌對同等濃度重金屬溶液的耐受曲線
        2.3.4 Wild-MBP1對不同濃度Cd²⁺溶液的耐受曲線
        2.3.5 Wild-MBP2對不同濃度Cd²⁺溶液的耐受曲線
        2.3.6 重組實(shí)驗(yàn)室菌對Cd、Ni重金屬的吸附作用
        2.3.7 重組野生大腸桿菌對Cd、Ni重金屬的吸附作用
    2.4 結(jié)果
        2.4.1 ELISA檢測重金屬結(jié)合肽表面展示結(jié)果
        2.4.2 重組實(shí)驗(yàn)室菌對48mg/L的Cd²⁺重金屬離子的生長情況
        2.4.3 重組野生菌48mg/L的Cd²⁺濃度下的生長情況
        2.4.4 Wild-MBP1在不同Cd²⁺濃度下的生長情況
        2.4.5 Wild-MBP2在不同Cd²⁺濃度下的生長情況
        2.4.6 重組實(shí)驗(yàn)室菌對Cd、Ni重金屬的修復(fù)
        2.4.7 重組野生菌對Cd、Ni重金屬的修復(fù)
    2.5 討論
    2.6 小結(jié)
第3章 苜蓿和工程菌對重金屬的聯(lián)合修復(fù)
    3.1 引言
    3.2 實(shí)驗(yàn)材料
        3.2.1 主要儀器
        3.2.2 主要試劑
        3.2.3 主要試劑配制
    3.3 實(shí)驗(yàn)方法
        3.3.1 苜蓿的催種實(shí)驗(yàn)
        3.3.2 重組野生菌在Hoagland培養(yǎng)基中生長情況
        3.3.3 苜蓿和重組野生菌對Cd的聯(lián)合吸附
        3.3.4 硝酸—高氯酸法消化苜蓿
    3.4 結(jié)果
        3.4.1 苜蓿催種發(fā)芽率的統(tǒng)計(jì)
        3.4.2 Hoagland培養(yǎng)基中重組野生菌的活菌數(shù)隨時(shí)間變化
        3.4.3 重組野生菌對苜蓿吸收重金屬的促進(jìn)作用
    3.5 討論
    3.6 小結(jié)
第4章 重組酵母的構(gòu)建及其對重金屬的吸附作用
    4.1 引言
    4.2 實(shí)驗(yàn)材料
        4.2.1 主要儀器
        4.2.2 主要試劑
        4.2.3 主要試劑配制
    4.3 實(shí)驗(yàn)方法
        4.3.1 重組質(zhì)粒pYD1-MBP1質(zhì)粒的提取
        4.3.2 重組質(zhì)粒PYD1-MBP1的鑒定
        4.3.3 電轉(zhuǎn)化EBY100
        4.3.4 EBY100-pYD1-MBP1對Cd²⁺重金屬的吸附
        4.3.5 EBY100-pYD1-MBP1對Ni²⁺重金屬的吸附
    4.4 結(jié)果
        4.4.1 重組質(zhì)粒PYD1-MBP1的提取
        4.4.2 重組質(zhì)粒PYD1-MBP1的鑒定
        4.4.3 MBP1-pydl-EBY100對Cd²⁺/Ni²⁺重金屬的修復(fù)
    4.5 討論
    4.6 小結(jié)
全文總結(jié)
致謝
參考文獻(xiàn)
附錄
攻讀碩士期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文
個(gè)人簡歷



本文編號：3961676