本文關(guān)鍵詞：生物技術(shù)通報(bào)，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

篇一：生物技術(shù)通報(bào)

生物技術(shù)通報(bào)

·技術(shù)與方法· BIOTECHNOLOGY BULLETIN2006 年第 4 期

收稿日期: 2006-03-30

基金項(xiàng)目: 國(guó)家自然科學(xué)基金資助( 50508014)

作者簡(jiǎn)介: 徐曉宇( 1978-) 女, 助理館員, 主要從事科學(xué)研究熱點(diǎn)情報(bào)追蹤工作 E-mail: iist@sytu.edu.cn 電話: 0510-85888050

環(huán)境微生物基因組技術(shù)研究進(jìn)展

徐曉宇

1

劉和

2

(

1

江南大學(xué)圖書(shū)館, 無(wú)錫 214036;

2

江南大學(xué)生物工程學(xué)院, 無(wú)錫 214036)

摘 要: 環(huán)境微生物基因組學(xué)是基于功能和序列的基礎(chǔ)上對(duì)得到的環(huán)境樣品基因組進(jìn)行分析的科學(xué), 是目前國(guó)際生

物技術(shù)研究開(kāi)發(fā)的最新熱點(diǎn)之一。對(duì)環(huán)境微生物基因組技術(shù)的概念、研究策略和篩選方式進(jìn)行了介紹, 并對(duì)該技術(shù)存在的

問(wèn)題和未來(lái)發(fā)展方向做了展望。

關(guān)鍵詞: 環(huán)境微生物基因組 SIGEX FACS

The Progress of Metagenomics Technology

Xu Xiaoyu

1

Liu He

2

(

1

Library of Jiangnan University, Wuxi 213036;

2

School of Biotechnology Jiangnan University, Wuxi 214036)

Abstract: Metagenomic describes the functional and sequence-based analysis of the collective microbial genomes

contained in an environmental sample. It is one of the t hot points in the biotechnology study at present. In this review,

comprehensive of concepts and methodologies regarding metagenomics and screening methods are described. Furthermore, the

prioritiesare discussed.

Key words: Metagenomics SIGEX FACS

1 環(huán)境微生物基因組

環(huán)境微生物基因組又稱(chēng)宏基因組, 是由 Han-

dels-man 等人 1998 年提出的, 即生境中全部微小

生物遺傳物質(zhì)的總和, 主要是指環(huán)境樣品中的細(xì)菌

和真菌的基因組總和

[1]

。環(huán)境微生物基因組技術(shù)是

基于功能和序列的基礎(chǔ)上對(duì)所得到的環(huán)境樣品基

因組進(jìn)行分析的技術(shù)。自然界 99%以上的微生物是

不可培養(yǎng)的

[1, 2]

, 人們對(duì)這部分微生物的生態(tài)、遺傳

以及代謝性能了解很少。環(huán)境微生物基因組技術(shù)是

在 PCR 技術(shù)和對(duì)自然環(huán)境 基因中的相似性基因

( 如 16SrRNA,nif、recA) 的克隆技術(shù)的基礎(chǔ)上發(fā)展

起來(lái)的, 是一種可以不需要獲得實(shí)驗(yàn)室純培養(yǎng)物而

對(duì)自然界的樣品的生物多樣性進(jìn)行分析的強(qiáng)有力

手段。環(huán)境微生物基因組技術(shù)的研究用途十分廣

泛, 可以用于篩選新的功能基因、在微生物分類(lèi)學(xué)

和微生物生態(tài)學(xué)以及改進(jìn)微生物培養(yǎng)基和培養(yǎng)技

術(shù)等方面具有重要的科學(xué)意義。由于環(huán)境微生物

基因組技術(shù)建立在不需要對(duì)環(huán)境微生物進(jìn)行培養(yǎng)

的基礎(chǔ)上, 因此避開(kāi)了微生物分離培養(yǎng)的問(wèn)題, 極

大地?cái)U(kuò)展了微生物資源的利用空間, 其在挖掘和利

用那些未能培養(yǎng)微生物的基因資源方面顯示了強(qiáng)

的大能力, 為最大限度的獲取微生物資源并為人類(lèi)

服務(wù)帶來(lái)了前所未有的機(jī)遇, 已經(jīng)成為國(guó)際生命科

學(xué)技術(shù)研究和開(kāi)發(fā)最重要的熱點(diǎn)之一。

2 環(huán)境微生物基因組技術(shù)的研究策略

環(huán)境微生物基因組技術(shù)研究的通常的步驟是:

環(huán)境樣品 DNA 的提取、將 DNA 克隆到合適的載體

中、將載體轉(zhuǎn)化到宿主細(xì)胞建立環(huán)境微生物基因組

文庫(kù)以及對(duì)環(huán)境微生物基因組文庫(kù)的分析。直接從

環(huán)境中克隆 DNA 的構(gòu)想最初是由 Pace 提出來(lái)的

[4]

, 隨即由 Schmidt 等人加以實(shí)施

[5]

。DeLong 等人的

研究將海水樣品改為土壤樣品

[6]

。DNA 提取和純化

后需要采用合適的載體和宿主構(gòu)建 DNA 文庫(kù), 以

往插入小片段 ( <10kb) 做載體并導(dǎo)入 Escherichia2006 年第 4 期

coli 的方法

[7]

不適合檢測(cè)大的基因簇和操縱子。為

了解決這個(gè)問(wèn)題, 研究人員構(gòu)建了含有較大插入片

段的 DNA 文庫(kù)。例如 cosmid DNA 文庫(kù)( 通常采用

pWE15 載體) , 插入片段為 25~35kb

[8]

, 細(xì)菌人造染

色體( BAC) 文庫(kù), 插入片段為 200kb

[9, 10]

。已經(jīng)有人

報(bào)

道采用 40kb 的外源基因構(gòu)建了 fosmid 文庫(kù)

[11]

。

研究中通常采用 E.coli 作為環(huán)境微生物基因組克

隆 基 因 表 達(dá) 的 宿 主 菌 , 近 來(lái) 有 少 數(shù) 采 用 Strepto-

myces lividans 作為宿主菌

[12]

。有一些實(shí)驗(yàn)室采用新

的革蘭氏陰性細(xì)菌作為表達(dá)的宿主菌以提高表達(dá)

的效率。

3 環(huán)境微生物基因組文庫(kù)的篩選策略

對(duì)環(huán)境微生物基因組文庫(kù)進(jìn)行篩選分析有三

種策略: 以功能為基礎(chǔ)的篩選、以序列為基礎(chǔ)的篩

選以及最近提出的底物誘導(dǎo)基因表達(dá)篩選。

3.1 以功能為基礎(chǔ)的篩選

以功能為基礎(chǔ)的篩選最初是從文庫(kù)中篩選出

能夠表達(dá)某種特性的克隆, 此后用于分子生物學(xué)和

生物化學(xué)分析。這些鑒別克隆的方法在新藥的發(fā)現(xiàn)

上有潛在的應(yīng)用價(jià)值。所獲取的有活性的蛋白質(zhì)在

工業(yè)和農(nóng)業(yè)上也具有一定的用途。采取這種方法可

以從環(huán)境微生物基因組文庫(kù)中迅速找到具有工業(yè)

應(yīng)用前景的克隆。此外, 它也能用于檢測(cè)編碼已知

生物活性物質(zhì)的 DNA 序列。目前, 運(yùn)用以功能為基

礎(chǔ)的篩選策略, 已經(jīng)成功獲得抗生素基因

[12~16]

, 抗

生素抗性基因

[17~19]

, 淀粉酶

[20, 21]

, 木聚糖酶

[22]

, 乙醇

氧化還原酶

[23]

果膠酸酯、裂解酶

[24]

等等。

3.2 以序列為基礎(chǔ)的篩選

以序列為基礎(chǔ)的篩選方法不需要在不同的宿

主中表達(dá)所克隆的基因。通常是基于已知的基因序

列對(duì)文庫(kù)中的靶標(biāo)序列例如 16SrRNA 或 recA 基因

進(jìn)行分析

[25]

。最初也是最有名的以序列為基礎(chǔ)的分

析的例子是 Craig Venter 在采用序列分析的方法分

析馬尾藻海域的微生物, 鑒定出大量的新基因

[26]

。

歐洲實(shí)驗(yàn)室運(yùn)用同樣的方法對(duì)系統(tǒng)發(fā)生關(guān)系復(fù)雜

的生物膜進(jìn)行全部或部分的序列分析。Tyson 等人

對(duì)一個(gè)嗜酸的生物膜進(jìn)行全序列分析, 試驗(yàn)結(jié)果證

明其中生物多樣性較低

[27]

。上述兩個(gè)發(fā)現(xiàn)成為 2004

年最重要的 10 大科學(xué)突破之一。

3.3 底物誘導(dǎo)基因表達(dá)篩選(SIGEX)

Kazuya Watanabe 和他的同事們提出了底物誘

導(dǎo)基因表達(dá)篩選策略, 利用 SIGEX 篩選方法對(duì)包含

152 000 個(gè)克隆的環(huán)境微生物基因組文庫(kù)進(jìn)行分

析, 用苯甲酸鹽誘導(dǎo)分離出 33 個(gè)克隆, 采用萘作為

底物誘導(dǎo)得到兩個(gè)克隆

[28]

.

SIGEX 策略是基于代謝基因的表達(dá)而設(shè)計(jì)的,

由一定的調(diào)控機(jī)制控制的代謝底物或者代謝酶的

誘導(dǎo)。SIGEX 檢測(cè)底物存在時(shí)表達(dá)而底物不存在時(shí)

就不表達(dá)的代謝基因。整個(gè)過(guò)程如圖 1 所示, 為了

提高 SIGEX 的產(chǎn)率, 構(gòu)建出一個(gè) p18GFP 載體, 克

隆位點(diǎn)將 lac 啟動(dòng)子和 gfp 結(jié)構(gòu)基因分開(kāi)( 步驟 1) 。

采用 p18GFP 載體構(gòu)建環(huán)境微生物基因組文庫(kù), 運(yùn)

用 IPTG, 分離自行連接和連接有外源基因的克隆

( 步驟 2) , 在底物存在的條件下表達(dá)環(huán)境微生物基

因組 DNA 中由 gfp 基因編碼的分解代謝特性( 步驟

3) , 從瓊脂平板上分離陽(yáng)性克隆并鑒定( 步驟 4) 有

熒光活性的細(xì)胞。在篩選過(guò)程中, 熒光激活細(xì)胞揀

選法( Fluorescence-activated cell sorting FACS)被用

于檢測(cè)分離。

3.4 三種篩選方式比較

環(huán)境微生物基因組學(xué)的三種篩選方法均有其

優(yōu)缺點(diǎn)。以功能為基礎(chǔ)的篩選能夠獲取所需的全部

基因或基因簇, 缺陷是它要求在宿主細(xì)胞中表達(dá)所

想要的功能和要求了解表達(dá)該功能的基因。它同樣

需要建立和廣大的文庫(kù)使人們便利和有效地篩選

對(duì)含有人們感興趣的特性的克隆。因?yàn)楂@取所需的

克隆數(shù)量很少, 為了克服這些困難, 人們使用了很

多手段, 近來(lái)人們采用穿梭載體在不同的宿主中用

以表達(dá)環(huán)境微生物基因組 DNA, 并對(duì) Escherichia.

coli 進(jìn)行修改使以提高其表達(dá)范圍。

雖然編碼次級(jí)代謝產(chǎn)物的基因的 DNA 片段通

常成簇分布, 但是仍然很難獲取超過(guò) 100 個(gè)基因的

DNA 片段的合成抗生素基因。研究中需要在大量

的環(huán)境微生物基因組文庫(kù)中篩選出所需的極少的

克隆。

為了克服這個(gè)困難, 研究人員設(shè)計(jì)出能夠在大

量的樣品中進(jìn)行檢測(cè)的高靈敏的自動(dòng)檢測(cè)系統(tǒng)。通

常采用在特別的培養(yǎng)基 ( 例如加入抗生素的培養(yǎng)

基) 中培養(yǎng), 篩選出一個(gè)便于選擇的特性, 這樣使得

從大量克隆中進(jìn)行篩選更為便利�；谛蛄袨榛A(chǔ)

徐曉宇等: 環(huán)境微生物基因組技術(shù)研究進(jìn)展 55生物技術(shù)通報(bào) Biotechnology Bulletin 2006 年第 4 期

底物誘

導(dǎo)啟動(dòng)子

的篩選能夠克服不等同表達(dá)的特點(diǎn), 以往采用鳥(niǎo)槍

法測(cè)序獲得大量的數(shù)據(jù), 但是鳥(niǎo)槍法測(cè)序資金昂貴

且勞動(dòng)強(qiáng)度極大, 特別是在尋找表達(dá)某種特性基因

的時(shí)候。此外, 由于在鳥(niǎo)槍法測(cè)序分析中所得到的

數(shù)據(jù)是根據(jù)構(gòu)建的數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行相似性研究的, 不免

有它的局限性。近來(lái)發(fā)展出生物芯片的方法基于序

列為基礎(chǔ)的對(duì)生物種群序列進(jìn)行分析。生物芯片的

方法是一種能夠迅速識(shí)別和鑒定大量的克隆的有

效的手段, 它的缺陷是得到的序列不能被運(yùn)用于生

物化學(xué)反應(yīng), 但它不需要獲取目標(biāo)產(chǎn)物的全部基因

或者基因簇。在環(huán)境微生物基因組學(xué)研究中, 這種

檢測(cè)策略被成功的運(yùn)用于獲取幾種新的具有廣泛

工業(yè)應(yīng)用前景的酶。

表 1 幾種環(huán)境微生物基因組文庫(kù)篩選方法的比較

圖 1 SIGEX 過(guò)程圖的原理圖

562006 年第 4 期

基于功能的篩選和基于序列的篩選均可運(yùn)用于

分離環(huán)境微生物基因組中的新型化合物, 但是每種

方法在研究中工作量都極大, 因?yàn)楂@取具有目的特

性的克隆數(shù)量太少, 為了克服這個(gè)困難, 人們采用了

一些改進(jìn)的手段。例如, 人們除了利用 E.coli 表達(dá)之

外 還 采 用 了 Streptomyces lividans 或 Pseudomonas

putida 作為宿主進(jìn)行表達(dá)以解決次級(jí)代謝產(chǎn)物不等

篇二：生物技術(shù)通報(bào)格式

《生物技術(shù)通報(bào)》原創(chuàng)性研究論文寫(xiě)作模板

（黑體小二號(hào)居中）

【說(shuō)明：題目要簡(jiǎn)短、醒目、準(zhǔn)確反映主題、一般不超過(guò)20個(gè)字，盡量不用動(dòng)賓結(jié)構(gòu)，用名詞

性短語(yǔ)】 作者1□□作者2□□作者1,2

（四號(hào)楷體，居中，之間不加逗號(hào)，加兩個(gè)空格）

（1.單位名稱(chēng)，城市□郵編；2.單位名稱(chēng)，城市□郵編）

（小五號(hào)宋體，居中，以分號(hào)隔開(kāi)）

□□摘□□要（小五號(hào)黑體，空兩格）：【目的】30-50字，□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□�！痉椒ā�30-50字□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□。【結(jié)果】核心部分，約150字□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□。【結(jié)論】不能忽略，約50字□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□。（內(nèi)容為小五號(hào)宋體）

【說(shuō)明：要使用科學(xué)性文字和具體數(shù)據(jù)，不使用文學(xué)性修飾詞；不使用圖、表、參考文獻(xiàn)、復(fù)雜的公式和復(fù)雜的化學(xué)式，不使用非公知公用的符號(hào)或術(shù)語(yǔ)；不要加自我評(píng)價(jià)，如“該研究對(duì)?有廣闊的應(yīng)用前景”，“目前尚未見(jiàn)報(bào)道”等。摘要能否準(zhǔn)確、具體、完整地概括原文的創(chuàng)新之處，將直接決定論文是否被收錄、閱讀和引用。摘要一律采用第三人稱(chēng)表述，不使用“我們”、“本文”、“文章”、“作者”、“本研究”等作為主語(yǔ)。】

□□關(guān)鍵詞（小五號(hào)黑體，空兩格）：關(guān)鍵詞；關(guān)鍵詞；關(guān)鍵詞（小五號(hào)宋體，之間加分號(hào)）

【說(shuō)明：中文關(guān)鍵詞盡量不用英文或西文符號(hào)。不要使用過(guò)于寬泛、籠統(tǒng)的詞作關(guān)鍵詞， 如基因、表達(dá)，克隆，進(jìn)展等，這樣將失去檢索的作用】

Biotechnology Bulletin

（Times New Roman，小二，加粗，居中，實(shí)詞首字母均大寫(xiě)，其余小寫(xiě)，特定除外）

Li Nan Di Yanhong Ma Xin

（Times New Roman，小四，居中，之間不加逗號(hào)，加兩個(gè)空格）

（Department, University, City, Zip Code, Institute, Beijing 100081)

（Times New Roman，小五，除括號(hào)、編號(hào)、逗號(hào)、分號(hào)和郵編正體外，其余斜體） 收稿日期：

基金項(xiàng)目：項(xiàng)目名稱(chēng)（編號(hào)）（基金項(xiàng)目必須要有編號(hào)，多個(gè)項(xiàng)目之間同逗號(hào)隔開(kāi)）

作者簡(jiǎn)介：姓名，性別，學(xué)歷，研究方向：XXX; E-mial:

通訊作者：姓名，性別，學(xué)歷，研究方向：XXX; E-mial:

□□Abstract（小五號(hào)，Times New Roman體，加粗，空兩格）: [Objective] □□□□□□□□□□

□□□□□□□□≈15%, [Methods] □□□□□□□□□□□□□□□□□□ ≈15%, [Results] □□□□

□□□□□□□□□□□□□□≈55%, [Conclusion] □□□□□□□□□□□□□□□□□□ ≈15%（內(nèi)

容小五號(hào)Times New Roman體）

【說(shuō)明： 英文摘要不能只是對(duì)中文摘要的簡(jiǎn)單翻譯，要詳細(xì)、準(zhǔn)確、完整，通過(guò)英文摘要就可以反映全文

概要。摘要應(yīng)回答好以下4方面問(wèn)題：1) What you want to do(直接寫(xiě)出研究目的)；2) How you did it(詳

細(xì)陳述過(guò)程和方法)；3) What results did you get and what conclusions can you draw(全面羅列結(jié)果和結(jié)

論)；4) What is original in your paper(通過(guò)2)和3)兩方面內(nèi)容展示文中創(chuàng)新之處)】。

1) 用過(guò)去時(shí)態(tài)敘述作者工作，用現(xiàn)在時(shí)態(tài)敘述作者結(jié)論；

2) 文摘中的縮寫(xiě)名稱(chēng)在第一次出現(xiàn)時(shí)要有全稱(chēng)；

3) 文摘中盡量少用特殊字符；

4) 能用名詞做定語(yǔ)不要用動(dòng)名詞做定語(yǔ)，例如：用measurement accuracy，不用measuring accuracy

5) 可直接用名詞或名詞短語(yǔ)做定語(yǔ)的情況下，要少用of句型，例如：用measurement accur不用accuracy

of measurement

□□Key words（小五號(hào)，Times New Roman，加粗）: Key words; Key words; Key words（小五號(hào)，Times

New Roman，之間加分號(hào)）

正文結(jié)構(gòu)：0引言；1 材料與方法；2 結(jié)果；3 討論；4 結(jié)論 （正文單倍行距， 單

欄排）

0引言（該標(biāo)題不列出，五號(hào)宋體）

【說(shuō)明：引言作為論文的開(kāi)端，主要回答“為什么研究”這個(gè)問(wèn)題。它介紹論文的背景、相關(guān)

領(lǐng)域的前人研究歷史與現(xiàn)狀，本文的切入點(diǎn)，擬解決的問(wèn)題。包括作者的研究意圖與分析依據(jù)，

研究范圍和理論、技術(shù)方案的選取等。引言中不需詳述已經(jīng)熟知的，包括教科書(shū)上已有陳述的

基本理論、實(shí)驗(yàn)方法和基本方程的推導(dǎo)。縮寫(xiě)名稱(chēng)在第一次出現(xiàn)時(shí)要有全稱(chēng)。】

1 材料與方法（小四號(hào)黑體，頂格，序號(hào)和標(biāo)題文字間空半格）

1.1 材料（五號(hào)楷體，頂格，序號(hào)和標(biāo)題文字間空半格）

1.2方法

1.2.1 三級(jí)標(biāo)題（五號(hào)宋體，頂格，序號(hào)和標(biāo)題文字間空半格，標(biāo)題與正文間空半格）

1.2.2三級(jí)標(biāo)題

2 結(jié)果

結(jié)果僅為試驗(yàn)的結(jié)果，不作分析，不出現(xiàn)涉及參考文獻(xiàn)的內(nèi)容。

【說(shuō)明：圖表題黑體、小五號(hào)字。表格一律用三線表。圖中文字一律用6號(hào)字。中文用宋體，英文、數(shù)字用Times

New Roman。雙欄圖寬不超過(guò)7.5cm；通欄圖寬不超過(guò)15.0cm；照片圖需提供清晰照片。圖按照在正文中出現(xiàn)

的先后順序依次編號(hào)；隨文排圖、表；圖設(shè)圖序、圖題、圖注；圖題置于圖形的下方，圖注置于圖題的上方。】

常用符號(hào)書(shū)寫(xiě)格式

3 討論

討論應(yīng)充分，結(jié)合其它文獻(xiàn)進(jìn)行比較，深入分析討論，闡述及分析在實(shí)驗(yàn)中遇到的問(wèn)題，，

合理解釋?zhuān)约皩?duì)未來(lái)研究?jī)?nèi)容的展望等【說(shuō)明：盡量引用近5年的參考文獻(xiàn)】。

4 結(jié)論

高度簡(jiǎn)明、扼要，且條理清晰地概括本研究的主要結(jié)果，做了什么得到什么即可，不需要

有評(píng)述性語(yǔ)言【說(shuō)明：結(jié)論中不出現(xiàn)參考文獻(xiàn)序號(hào)、圖表及數(shù)學(xué)公式】。

參考文獻(xiàn)（宋體，Times New Roman，小六）

（1）參考文獻(xiàn)在正文中按出現(xiàn)的先后順序編號(hào)，文后的編號(hào)及順序與正文中一致。

(2) 參考文獻(xiàn)的作者少于3人（含3人）時(shí)全部列出，多于3人時(shí)只寫(xiě)前3人，后加“等”

或“et al”。

(3) 人名格式：姓（全稱(chēng)）＋名（首字母），不用縮寫(xiě)符號(hào)“.”。

(4) 注意被引的期刊要標(biāo)出：年，卷（期）：頁(yè)碼。

(5）引用期刊的名稱(chēng)（每個(gè)詞的首字母大寫(xiě)，正體）如果用縮寫(xiě)，不要用縮寫(xiě)符號(hào)“.”。

(6) 逗號(hào)、冒號(hào)、句號(hào)等符號(hào)均用半角。

各類(lèi)型參考文獻(xiàn)格式范例

（1）期刊——作者.題名[J ].刊名,出版年,卷(期):起-止頁(yè)碼.

[例] 劉洋,左山,鄒媛媛,等.雜交玉米農(nóng)大108及其親本種子內(nèi)生細(xì)菌群落多樣性的研究[J].中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué),

2011, 44(23): 4763-4771.

[例] 易欣, 周頌東, 何興金. 野生通江百合高頻率再生植株的研究[J]. 四川大學(xué)學(xué)報(bào): 自然科學(xué)版,

2013,1:55-60.

[例] Liu Y, Zuo S, Zou Y, et al. Investigation on diversity and population succession dynamics of endophytic

bacteria from seeds of maize (Zea mays L., Nongda108) at different growth stages [J]. Annals of Microbiology, 2013,

63: 71-79.

（2）專(zhuān)著——作者.書(shū)名[M].版本(第一版可略).出版地:出版商,出版年.

[例] 方中達(dá). 植病研究方法[M].第3版.北京:中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社, 1998.

[例] 中國(guó)科學(xué)院土壤研究所微生物室. 土壤微生物研究方法[M]. 北京：科學(xué)出版社，1985.

[例] 薩姆布魯克 J, 拉塞爾 DW. 分子克隆實(shí)驗(yàn)指南[M]. 第3版. 黃培堂, 譯. 北京: 科學(xué)出版社, 2008.

[例] Montgomery DC. Design and analysis of experiments [M]. 3rd ed. New York: John Wiley Sons, 1991.

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版地:出版商,出版年:析出文獻(xiàn)的頁(yè)碼.

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(6) 會(huì)議論文

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參考文獻(xiàn)類(lèi)型標(biāo)識(shí)

篇三：中文核心期刊生物工程方向影響因子排序

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