1 引言 

麻醉（Anesthesia）一詞源自于希臘語(yǔ)（Anaisthaesia）。麻醉是由于藥物的注射、口服或者其他有效方法對(duì)中樞神經(jīng)或周圍神經(jīng)系統(tǒng)的可逆性的功能抑制。中國(guó)早在東漢時(shí)期就對(duì)麻醉有著一定的研究，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)第一次記載運(yùn)用麻醉技術(shù)的是 1842 年 3 月 30 日的美國(guó) Crawdord Williamson  Long 醫(yī)生，他在幫他夫人接生的時(shí)候首次采用的麻醉藥。隨著麻醉技術(shù)的發(fā)展，即給數(shù)千萬(wàn)的病人帶來(lái)大量的好處，但是麻醉的機(jī)理以及作用機(jī)制，是如何發(fā)揮作用的，至今仍然無(wú)法解釋清楚。 隨著近年來(lái)經(jīng)過(guò)大量的國(guó)內(nèi)外實(shí)驗(yàn)表明，小型豬和人在比較醫(yī)學(xué)上同源關(guān)系較近，，解剖生理結(jié)構(gòu)相近[1]。所以在醫(yī)學(xué)、生命科學(xué)中小型豬是非常理想的動(dòng)物模型。然而在實(shí)際操作過(guò)程中，國(guó)內(nèi)并沒(méi)有一款針對(duì)小型豬專用的全身麻醉劑。東北農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)學(xué)院外科教研室麻醉課題組成功研制出小型豬復(fù)合麻醉劑（XFM）以及小型豬復(fù)合麻醉劑頡頏劑。由東北農(nóng)業(yè)大學(xué)外科實(shí)驗(yàn)室前期研究結(jié)果表明 XFM 對(duì)小型豬麻醉誘導(dǎo)迅速，效果確實(shí)；小型豬特異性麻醉頡頏劑催醒效果確實(shí)，催醒迅速，無(wú)復(fù)睡現(xiàn)象，安全穩(wěn)定[2]。 隨著麻醉技術(shù)的發(fā)展與進(jìn)步，麻醉界對(duì)麻醉的機(jī)制有著許多不同的看法，但是大多數(shù)已經(jīng)被摒棄。大量的實(shí)驗(yàn)以及數(shù)據(jù)表明，F(xiàn)ranks  NP 和 Lie  WR 的“蛋白質(zhì)學(xué)說(shuō)”為今天的全麻機(jī)制奠定了基礎(chǔ)。 

1.1 麻醉概述
麻醉界認(rèn)為，麻醉是由藥物或者其他方法使中樞神經(jīng)（或）周圍神經(jīng)系統(tǒng)的可逆性功能抑制，這種抑制可以使感覺(jué)特別是痛覺(jué)全部喪失或者部分喪失[3]。這種概念說(shuō)明：麻醉是一種人為的可逆性的生理過(guò)程，在這個(gè)過(guò)程中，機(jī)體可以對(duì)外界感覺(jué)全部喪失或者部分喪失以及肌肉的張力減弱或者消失。這個(gè)過(guò)程時(shí)長(zhǎng)可以可控制，并且可逆。機(jī)體內(nèi)的麻醉藥物被相應(yīng)的頡頏劑、代謝或者排出后，機(jī)體便可逐漸恢復(fù)正常水平。良好的麻醉是外科手術(shù)以及相應(yīng)處理的保障，妥善的麻醉可以簡(jiǎn)化保定方法，節(jié)省人力以及器械的支出；肌肉松弛性良好，使手術(shù)順利的進(jìn)行；避免手術(shù)以及相應(yīng)的處置對(duì)機(jī)體中樞神經(jīng)的刺激導(dǎo)致疼痛休克；手術(shù)以及相應(yīng)的處置過(guò)程中避免機(jī)體產(chǎn)生意外損傷。所以，良好的麻醉需要達(dá)到充分的鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛、肌松以及安定的效果，并且保證因?yàn)槁樽硭鶎?dǎo)致的不良副為作用最小的程度[4]。
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1.2 麻醉藥在中樞神經(jīng)系統(tǒng)各個(gè)部位的作用 
中樞神經(jīng)系統(tǒng)（Central Nervous System）是由動(dòng)物所有腦組織以和脊髓組成的，是機(jī)體神經(jīng)組織最集中的部位。中樞神經(jīng)系統(tǒng)可以接受全身各個(gè)地方的傳入的信息，以及時(shí)間和空間的信息，經(jīng)過(guò)中樞神經(jīng)系統(tǒng)整加工整合后，使神經(jīng)元之間在機(jī)體的機(jī)能上產(chǎn)生突觸聯(lián)系。中樞神經(jīng)系統(tǒng)可以將傳入的信息學(xué)習(xí)，儲(chǔ)存或發(fā)出興奮、抑制等信號(hào)。麻醉藥物達(dá)到鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜、肌松或者失去意識(shí)的作用就是通過(guò)抑制中樞神經(jīng)系統(tǒng)信號(hào)的傳遞來(lái)實(shí)現(xiàn)的。全身麻醉對(duì)于神經(jīng)中樞系統(tǒng)的干預(yù)是非常強(qiáng)烈的，從而使機(jī)體出現(xiàn)感覺(jué)上暫時(shí)消失、意識(shí)的消失以及良好的肌肉松弛效果[9]。哺乳動(dòng)物有著相對(duì)發(fā)達(dá)的大腦皮層，隨著中樞神經(jīng)系統(tǒng)的不斷進(jìn)化和完善，大腦皮層也進(jìn)化的更為迅速。大腦皮層是調(diào)節(jié)軀體運(yùn)動(dòng)、調(diào)節(jié)機(jī)體與外界環(huán)境的平衡、信息的整合、儲(chǔ)存和檢索的主要部位，也就是說(shuō)大腦皮層是維持機(jī)體正�；顒�(dòng)的基礎(chǔ)。然而中樞神經(jīng)系統(tǒng)有著復(fù)雜的結(jié)構(gòu)，全麻藥是如何對(duì)大腦皮層產(chǎn)生作用的，至今麻醉界仍然沒(méi)有一個(gè)明確的答案，隨著各種方法以及技術(shù)對(duì)其的研究，腦電圖（electroencephalogram，EEG）明確的記錄了在機(jī)體注射全麻藥后大腦皮層 EEG 的變化。楊同濤[10-11]等人證實(shí)了小型豬靜脈注射乳化異氟醚后，EEG 的變化顯示出乳化異氟醚可以使小型豬達(dá)到鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜和肌松等效果良好的麻醉深度，隨著麻醉深度的變化，EEG 的波形圖也隨著變化。張志龍[12]等人研究出動(dòng)態(tài)觀察氯胺酮對(duì)大鼠大腦皮層Na+，K+-ATP 以及 Ca2+-ATP 酶的活性影響，大鼠在注射氯胺酮后 Na+，K+-ATP 以及 Ca2+-ATP酶的活性被抑制，隨之推斷大腦皮層可能為氯胺酮在中樞神經(jīng)的作用部位。侯金龍等人[13]研究后表明注射乳化異氟醚后的大鼠，大腦皮層的 n ACh Rs 的表達(dá)被抑制。 
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2 實(shí)驗(yàn)材料與方法 

2.1 實(shí)驗(yàn)材料
雌雄各半，選取購(gòu)買(mǎi)自哈爾濱市醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心的體重均在 220g-240g 的 90只 SD 大鼠。 
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2.2 實(shí)驗(yàn)方法

將體重為 220-240g 的 90 只 SD 大鼠（雌雄各半），放置于安靜且舒適的環(huán)境飼養(yǎng)，不人工強(qiáng)制喂食飲水，光照適宜，一周后進(jìn)行隨機(jī)實(shí)驗(yàn)分組：分為 XFM 麻醉組（M 組）、小型豬復(fù)合麻醉頡頏劑組（J 組）、XFM 與頡頏劑交互組（MJ 組）；其中 M 組分為 5 個(gè)亞組（各亞組 6只）：  M1 組、M2 組、M3 組和 M4 組，M 組對(duì)照組為生理鹽水對(duì)照組 C1 組；J 組根據(jù)注射頡頏劑后的時(shí)長(zhǎng)分為 5 個(gè)亞組（各亞組 6 只）：  J1 組、J2 組和 J3 組和 J4 組，J 組對(duì)照組為生理鹽水對(duì)照組 C2 組；MJ 組則分為 5 個(gè)亞組（各亞組 6 只）：  MJ1 組、MJ2 組、MJ3 組和 MJ4 組，MJ 組對(duì)照組為生理鹽水對(duì)照組 C3 組。下圖 2-1 為具體分組情況。 M 組中各亞組（C1 組除外）分別于腹腔注射 XFM 進(jìn)行麻醉，其中 M1 組于注射 XFM 10min 后立即斷頸處死并取腦，將取出的腦組織立即放置在無(wú) RNA 酶的紗布并放置在冰塊上；M2 組于注射 XFM  20min 后立即斷頸處死并取腦，將取出的腦組織立即放置在無(wú) RNA 酶的紗布并放置在冰塊上；M3 組于注射 XFM  40min 后立即斷頸處死并取腦，將取出的腦組織立即放置在無(wú) RNA 酶的紗布并放置在冰塊上；M4 組則于注射 XFM  60.0min 后立即斷頸處死并取腦，將取出的腦組織立即放置在無(wú) RNA 酶的紗布并放置在冰塊上；而 C1 組腹腔注射與 XFM 麻醉劑量等量的生理鹽水，待大鼠靜置恢復(fù)平靜后立即斷頸處死并取腦，將取出的腦組織立即放置在無(wú) RNA 酶的紗布并放置在冰塊上。 J 組各亞組（C2 組除外）分別于腹腔注射 XFM 復(fù)合頡頏劑，J1 組于注射頡頏劑 10min 后立即斷頸處死并取腦，將取出的腦組織立即放置在無(wú) RNA 酶的紗布并放置在冰塊上；J2 組于注射頡頏劑 20min 后立即斷頸處死并取腦，將取出的腦組織立即放置在無(wú) RNA 酶的紗布并放置在冰塊上；J3 組于注射頡頏劑 40min 后立即斷頸處死并取腦，將取出的腦組織立即放置在無(wú) RNA酶的紗布并放置在冰塊上；J4 組于注射頡頏劑后 60min 后立即斷頸處死并取腦，將取出的腦組織立即放置在無(wú) RNA 酶的紗布并放置在冰塊上；C2 組注射與頡頏劑相同劑量的生理鹽水，待大鼠恢復(fù)平靜后立即斷頸處死并取腦，將取出的腦組織立即放置在無(wú) RNA 酶的紗布并放置在冰塊上。 

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3  實(shí)驗(yàn)結(jié)果 ......... 20 
3.1 XFM 及其頡頏劑對(duì)大鼠不同腦區(qū) 4Ebp1 m RNA 含量的測(cè)定 ......... 20 
3.2 XFM 及其頡頏劑對(duì)大鼠不同腦區(qū) 4Ebp1 和 p-4Ebp1 蛋白含量的測(cè)定 .......... 26 
3.2.1  免疫印跡結(jié)果 ..... 26 
3.2.2 XFM 對(duì)大鼠不同腦區(qū) 4Ebp1 蛋白含量的測(cè)定 .......... 27 
3.2.3 XFM 對(duì)大鼠不同腦區(qū) P-4Ebp1 蛋白含量的測(cè)定 ....... 28 
3.2.4  小型豬復(fù)合麻醉頡頏劑對(duì)大鼠不同腦區(qū) 4Ebp1 蛋白含量的測(cè)定 .... 30 
3.2.5  小型豬復(fù)合麻醉頡頏劑對(duì)大鼠不同腦區(qū) p-4Ebp1 蛋白含量的測(cè)定 ......... 32 
3.2.6 XFM 及其復(fù)合麻醉頡頏劑交互作用對(duì)大鼠不同腦區(qū) 4Ebp1 蛋白含量的測(cè)定 ......... 33 
3.2.7 XFM 及其復(fù)合麻醉頡頏劑交互作用對(duì)大鼠不同腦區(qū) p-4Ebp1 蛋白含量的測(cè)定 ........ 35 
4  討論......... 37 
4.1  試驗(yàn)設(shè)計(jì)總體思路 ........... 37 
4.2  試驗(yàn)因素的控制 ....... 37 
4.3 XFM 及其頡頏劑與 4Ebp1 m RNA 轉(zhuǎn)錄的影響 ........ 38 
4.4 XFM 及其頡頏劑與 4Ebp1  蛋白表達(dá)的影響 ........... 39 
4.5 XFM 及其頡頏劑與 p-4Ebp1  蛋白表達(dá)的影響 ........ 40 
4.6  全身麻醉與催醒過(guò)程中 4Ebp1 作用機(jī)制探討 ......... 40 
5  結(jié)論......... 42 

4 討論 

4.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)總體思路 
由于在國(guó)內(nèi)目前并沒(méi)有一款真正適合小型豬的麻醉方法，東北農(nóng)業(yè)大學(xué)外科教研室麻醉課題組通過(guò)大量的實(shí)驗(yàn)研究，逐漸克服了這一難題，成功研制出專用于小型豬的復(fù)合麻醉劑，主要成分由噻環(huán)已胺、賽拉嗪、強(qiáng)痛靈等組成的小型豬復(fù)合麻醉劑，即 XFM。經(jīng)過(guò)本課題組大量的實(shí)驗(yàn)研究表明，小型豬復(fù)合麻醉劑對(duì)小型豬的呼吸系統(tǒng)、循環(huán)系統(tǒng)基本無(wú)副作用，對(duì)肝功、腎功的影響較小。用過(guò)臨床實(shí)踐表明，XFM 對(duì)于小型豬的肌松、鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜效果良好，完全能夠支持手術(shù)的順利完成、以及對(duì)科學(xué)研究的需要[61-63]。 但是，所有的麻醉劑的研發(fā)都需要一款相對(duì)應(yīng)的頡頏劑為其的麻醉安全護(hù)航，憑借有效的頡頏劑為特異性麻醉劑的麻醉程度進(jìn)行操控。為了更好的推廣小型豬復(fù)合麻醉劑(XFM)東北農(nóng)業(yè)大學(xué)外科教研室成功研制出小型豬復(fù)合麻醉劑特異性頡頏劑，在成功麻醉小豬后為其生命安全保駕護(hù)航。特異性頡頏劑的研制成功意味著，高端科技研究的成功率以及準(zhǔn)確性得到極大的提高。 然而小型豬復(fù)合麻醉劑是通過(guò)中樞神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)揮作用，但是具體的作用位點(diǎn)、發(fā)揮作用的途徑至今仍然困擾著科研工作者們。之前東北農(nóng)業(yè)大學(xué)外科教研室研究發(fā)現(xiàn)了 XFM 麻醉小型豬可以抑制特定腦區(qū)的 Na+，K+-ATP 以及 Ca2+-ATP 酶的活性，[12]以及 c AMP 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)被激活[22]，為了進(jìn)一步從根本上找到 XFM 的作用的途徑以及作用位點(diǎn)，本實(shí)驗(yàn)從與麻醉、增值有著密切聯(lián)系的 m TOR 通路中的重要下游因子 4Ebp1 進(jìn)行研究。4Ebp1 廣泛存在于背部神經(jīng)元的膠質(zhì)細(xì)胞中，在周圍細(xì)胞發(fā)炎的同時(shí)，其可以大量增值各種活化因子，可以促進(jìn)疼痛敏感。在大鼠注射 XFM 及頡頏劑后，通過(guò)從基因以及蛋白兩個(gè)水平對(duì) 4Ebp1 的表達(dá)水平進(jìn)行研究，為研究XFM 及頡頏劑的麻醉以及催醒機(jī)制奠定了基礎(chǔ)。
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結(jié)論 

（1）小型豬復(fù)合麻醉劑麻醉作用與大鼠腦內(nèi)的大腦、海馬、丘腦、小腦、腦干中的 4Ebp1 m RNA 及其蛋白、p-4Ebp1 蛋白的相對(duì)表達(dá)量有關(guān)，4Ebp1 因子可能是 XFM 在大鼠大腦中參與麻醉作用的表達(dá)位點(diǎn)之一； 
（2）小型豬復(fù)合麻醉頡頏劑頡頏作用與大鼠腦內(nèi)的大腦、海馬、丘腦、小腦、腦干中的4Ebp1  m RNA 及其蛋白、p-4Ebp1 蛋白的相對(duì)表達(dá)量有關(guān)，4Ebp1 因子可能是小型豬復(fù)合麻醉頡頏劑在大鼠大腦中參與催醒作用的表達(dá)位點(diǎn)之一； 
（3）小型豬復(fù)合麻醉頡頏劑并不能完全逆轉(zhuǎn) XFM 對(duì) 4Ebp1 的 m RNA、蛋白、磷酸化蛋白的影響，說(shuō)明還有其他相關(guān)的通路或者受體參與著麻醉與催醒的作用，提示全麻機(jī)理研究的復(fù)雜性和多位點(diǎn)性。  
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參考文獻(xiàn)(略)

本文編號(hào)：186206