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大菱鲆白花斑體色形成生理機(jī)制的初步研究

發(fā)布時間:2017-09-27 09:10

  本文關(guān)鍵詞:大菱鲆白花斑體色形成生理機(jī)制的初步研究


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【摘要】:本文以山東省良種工程選育的子三代大菱鲆為研究對象,在對大菱鲆的選擇育種過程中發(fā)現(xiàn)其中一種家系的魚體表有眼側(cè)有明顯的白色花斑,較一般灰黑色大菱鲆顯得絢麗好看,擬對其進(jìn)行選育推廣。但是,這種白色花斑體色的大菱鲆體表顏色并不穩(wěn)定,受到應(yīng)激后表面白色斑紋會迅速散去變黑。因此本文通過對大菱鲆皮膚色素細(xì)胞的形態(tài)學(xué)和組織學(xué)的觀察:體色調(diào)控激素,黑色素聚集激素和兒茶酚胺水平的測定;皮膚組織和腦組織中黑色素聚集激素受體mch-r和黑素皮質(zhì)受體mclr的表達(dá)來對這種大菱鲆白花斑體色形成的原因和機(jī)理進(jìn)行初步探究,為大菱鲆體色的研究提供參考和依據(jù),幫助選育出更優(yōu)異的大菱鲆養(yǎng)殖品種。主要的研究內(nèi)容如下:1.取兩種體色大菱鲆有眼側(cè)背部和體側(cè)部皮膚制作臨時裝片和石蠟切片,通過光學(xué)顯微鏡對皮膚表面色素細(xì)胞和皮膚組織結(jié)構(gòu)進(jìn)行觀察。結(jié)果顯示大菱鲆皮膚內(nèi)色素細(xì)胞主要以黑色素細(xì)胞、黃色素細(xì)胞和虹彩色素細(xì)胞為主。其中黑色素細(xì)胞數(shù)量明顯比其它兩種色素細(xì)胞多。黑色素細(xì)胞有兩種形態(tài):一種整個細(xì)胞小且為球狀,沒有星狀分枝或不明顯:另一種形態(tài)細(xì)胞個體普遍較大且突出分枝多而明顯,整個細(xì)胞呈現(xiàn)為雪花狀。黑色素細(xì)胞和黃色素細(xì)胞分布于虹彩色素細(xì)胞之上。白花斑體色大菱鲆皮膚中黃色素細(xì)胞數(shù)量較低于正常體色大菱鲆,黑色素細(xì)胞數(shù)量則明顯低于正常體色大菱鲆,且色素細(xì)胞內(nèi)色素顆粒的聚集程度明顯高于正常體色。但對石蠟組織切片的觀察發(fā)現(xiàn),兩種體色的大菱鲆在色素細(xì)胞層的顏色和厚度上并無明顯差異,所以推測造成兩種體色大菱鲆顏色差異的主要原因可能是黑色素細(xì)胞內(nèi)色素顆粒的聚集或黑色素細(xì)胞內(nèi)黑色素含量較少。2.通過酶聯(lián)免疫測定法對誘導(dǎo)大菱鲆皮膚黑色素聚集的兩種主要激素的含量進(jìn)行測定。黑色素聚集激素(MCH)是一種肽類神經(jīng)遞質(zhì),白花斑體色大菱鲆中MCH平均含量為46.9pg/ml,正常體色大菱鲆MCH的平均含量為44.0pg/ml。通過分析發(fā)現(xiàn),兩種體色大菱鲆中MCH含量的差異不顯著。兒茶酚胺(CA)類物質(zhì)也會誘導(dǎo)鲆鰈魚類黑色素細(xì)胞的聚集。白花斑體色大菱鲆中CA平均含量為318.35ng/ml,正常體色大菱鲆CA的平均含量為244.65ng/ml。兩種體色大菱鲆中CA的含量差異顯著。由此推斷,大菱鲆白色花斑的形成可能是由于兒茶酚胺類物質(zhì)通過腎上腺素受體和α 2-腎上腺素能受體引起黑色素顆粒的聚集或減弱cAMP-PKA的信號導(dǎo)致黑色素細(xì)胞凋亡,進(jìn)而使魚體體色出現(xiàn)白花斑紋。3.通過實(shí)時定量PCR技術(shù)對兩種體色大菱鲆中影響黑色素聚集的調(diào)控基因黑色素聚集激素受體基因(MCHR)和黑色素合成通路中的關(guān)鍵基因黑素皮質(zhì)素受體基因(MC1R)在兩種體色大菱鲆皮膚和腦中的表達(dá)進(jìn)行了檢測。結(jié)果表明黑色素聚集激素1型受體基因(MCHR1)基因在白花斑體色大菱鲆的皮膚中表達(dá)量顯著高于正常體色,而黑色素聚集激素2型受體基因(MCHR2)基因在兩種體色皮膚中的表達(dá)水平不存在明顯差異。而魚體循環(huán)系統(tǒng)中MCH的含量無明顯差異,因此推測MCHR1影響了黑色素細(xì)胞的聚集,從而引起白花斑體色的形成。白花斑體色大菱鲆皮膚中的MC1R基因表達(dá)卻意外的高于正常體色,這表明白花斑體色大菱鲆皮膚中黑色素合成通路中的開關(guān)基因正常的同時也表明魚類體色變異的所受的調(diào)控因子很多差異較為復(fù)雜,需要進(jìn)一步研究。
【關(guān)鍵詞】:大菱鲆 體色 兒茶酚胺 黑色素聚集激素 黑色素聚集激素受體
【學(xué)位授予單位】:中國海洋大學(xué)
【學(xué)位級別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2015
【分類號】:S917.4
【目錄】:
  • 摘要5-7
  • Abstract7-12
  • 前言12-13
  • 第一章 文獻(xiàn)綜述13-22
  • 1 魚體顏色的形成及體色調(diào)控機(jī)理13-21
  • 1.1 魚類皮膚中的色素細(xì)胞13-14
  • 1.2 黑色素的合成14-15
  • 1.3 魚體顏色的變化15-18
  • 1.4 魚體顏色變異的分子機(jī)理18-21
  • 2 研究的目的和意義21-22
  • 第二章 兩種體色大菱鲆色素細(xì)胞的顯微結(jié)構(gòu)觀察22-29
  • 1 材料和方法22-23
  • 1.1 實(shí)驗(yàn)用魚22-23
  • 1.2 大菱鲆色素細(xì)胞的觀察和計(jì)數(shù)23
  • 1.3 大菱鲆皮膚的組織切片23
  • 2 結(jié)果23-27
  • 2.1 兩種體色大菱鲆的色素細(xì)胞觀察結(jié)果23-24
  • 2.2 兩種體色大菱鲆的色素細(xì)胞形態(tài)分布和數(shù)量差異24-25
  • 2.3 兩種體色大菱鲆皮膚石蠟切片25-27
  • 3 討論與分析27-29
  • 3.1 大菱鲆皮膚組織特點(diǎn)27-28
  • 3.2 大菱鲆體色差異的主要原因28-29
  • 第三章 對影響大菱鲆體色調(diào)控的主要激素含量的測定29-35
  • 1 實(shí)驗(yàn)材料和方法29-30
  • 1.1 實(shí)驗(yàn)材料29
  • 1.2 檢測原理29
  • 1.3 檢測步驟29-30
  • 2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果30-33
  • 3 討論與分析33-35
  • 第四章 黑色素聚集激素受體(MCHR)和黑素皮質(zhì)激素受體1(MC1R)的基因表達(dá)35-46
  • 1 材料和方法35-39
  • 1.1 皮膚與腦組織分子樣品的采集35
  • 1.2 皮膚與腦cDNA的合成35-37
  • 1.3 皮膚MCH與腦MCHR的實(shí)時定量PCR(qRT-PCR)表達(dá)37-38
  • 1.4 數(shù)據(jù)分析38-39
  • 2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果39-43
  • 2.1 各對引物的擴(kuò)增效率39-41
  • 2.2 皮膚與腦中黑色素凝集激素的實(shí)時定量PCR表達(dá)41-42
  • 2.3 皮膚與腦中黑色素凝集激素受體的實(shí)時定量PCR表達(dá)42-43
  • 3 討論與分析43-46
  • 參考文獻(xiàn)46-56
  • 致謝56-57
  • 個人簡歷57

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本文編號:928812

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