本文關(guān)鍵詞：Nlrp9b在小鼠早期胚胎發(fā)育中的表達、定位及功能

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【摘要】：實驗以小鼠卵母細胞和早期胚胎為研究對象,采用免疫組化、qRT-PCR、 Western blot、免疫熒光和RNA干擾等方法研究Nlrp9b在小鼠卵子發(fā)生和早期胚胎發(fā)育過程中的表達、定位和功能,利用多種生物信息學軟件對小鼠Nlrp9b基因編碼的氨基酸序列進行分析,并通過同源建模對翻譯的蛋白質(zhì)的三維結(jié)構(gòu)進行預(yù)測。結(jié)果如下：(1)利用RT-PCR和免疫印跡方法分析Nlrp9b在小鼠多個組織中的表達,結(jié)果表明Nlrp9b的轉(zhuǎn)錄物僅在小鼠的卵巢和小腸中存在,NLRP9B蛋白的表達被限制在不同卵泡的卵母細胞中而且隨著小鼠年齡的增加而下降。免疫熒光結(jié)合激光共聚焦顯微鏡的分析表明NLRP9B蛋白主要定位在附植前胚胎的胞質(zhì)中。(2)在GV期卵母細胞中沉默Nlrp9b并不影響小鼠卵母細胞的成熟率,將這些Nlrp9b沉默的成熟卵母細胞進行孤雌激活和體外培養(yǎng),結(jié)果顯示這些孤雌胚胎在體外能夠正常發(fā)育；同樣合子中沉默Nlrp9b后,NLRP9B蛋白顯著降低但胚胎發(fā)育沒有被阻滯,與對照組相比,沉默組的囊胚形成率也無差異,結(jié)果表明小鼠卵母細胞的成熟和早期胚胎發(fā)育不需要Nlrp9b的參與。(3)用生物信息學軟件分析表明Nlrp9b基因的進化與Nlrp9a和Nlrp9c的關(guān)系較遠,同時分析了NLRP9B蛋白的全長1003aa,等電點為7.82,分子質(zhì)量114802.16,極性氨基酸占41.3%,二級結(jié)構(gòu)的螺旋部分占將近一半49.05%,具有兩個核苷酸結(jié)構(gòu)域DAPIN和NACHT,7個亮氨酸重復(fù)結(jié)構(gòu),NLRP9B不含有信號肽位點。
【關(guān)鍵詞】：Nlrp9b RNA干擾 功能 生物信息學
【學位授予單位】：福建農(nóng)林大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：S814.6
【目錄】：

• 摘要7-8
• Abstract8-10
• 文獻綜述10-21
• 第一章 Nlrp基因家族研究進展10-14
• 1.1 Nlrp基因家族概述10-11
• 1.2 Nlrp基因家族與生殖特異性有關(guān)的基因11-12
• 1.3 Nlrp9基因的發(fā)現(xiàn)與結(jié)構(gòu)特征12
• 1.4 Nlrp9的研究現(xiàn)狀12-14
• 第二章 小鼠早期胚胎發(fā)育的研究進展14-21
• 2.1 小鼠早期胚胎發(fā)育特點的研究進展14-18
• 2.1.1 生殖細胞起源與生長14-15
• 2.1.2 合子的卵裂15
• 2.1.3 胚胎基因組的激活15-16
• 2.1.4 桑椹胚致密化16-17
• 2.1.5 囊胚的形成17-18
• 2.2 小鼠胚胎發(fā)育的影響因素研究進展18-21
• 2.2.1 母源效應(yīng)基因?qū)υ缙谂咛グl(fā)育的影響18-19
• 2.2.2 基因組印跡對早期胚胎發(fā)育的影響19
• 2.2.3 環(huán)境因素影響早期胚胎發(fā)育19-21
• 實驗研究21-43
• 第三章 Nlrp9b在小鼠早期胚胎上的表達與定位21-29
• 3.1 實驗材料與方法21-24
• 3.1.1 實驗材料21
• 3.1.2 實驗方法21-24
• 3.2 實驗結(jié)果24-27
• 3.2.1 Nlrp9b在小鼠不同組織中的表達24-25
• 3.2.2 NLRP9B蛋白在小鼠卵巢組織中的表達25
• 3.2.3 NLRP9B蛋白在小鼠附植前胚胎中的表達和定位25-27
• 3.3 討論27
• 3.4 小結(jié)27-29
• 第四章 Nlrp9b在小鼠早期胚胎發(fā)育中的功能29-37
• 4.1 材料與方法29-30
• 4.1.1 材料29
• 4.1.2 實驗方法29-30
• 4.2 結(jié)果30-35
• 4.2.1 沉默Nlrp9b對小鼠卵母細胞成熟的影響30-32
• 4.2.2 卵母細胞中Nlrp9b的沉默對孤雌激活后胚胎發(fā)育的影響32-33
• 4.2.3 合子中沉默Nlrp9b對附植前胚胎發(fā)育的影響33-35
• 4.3 討論35-36
• 4.4 小結(jié)36-37
• 第五章 生物信息學分析37-43
• 5.1 材料與方法37
• 5.1.1 材料37
• 5.1.2 方法37
• 5.2 結(jié)果與分析37-42
• 5.2.1 構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)生樹37-38
• 5.2.2 NLRP9B蛋白質(zhì)一級結(jié)構(gòu)組成分析38-39
• 5.2.3 二級結(jié)構(gòu)組成分析與三級結(jié)構(gòu)構(gòu)建39-41
• 5.2.4 NLRP9B蛋白信號肽分析41
• 5.2.5 NLRP9B的跨膜分析41-42
• 5.3 小結(jié)42-43
• 全文結(jié)論43-44
• 參考文獻44-50
• 縮略詞50-51

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