本文關(guān)鍵詞：Nlrp9b在小鼠早期胚胎發(fā)育中的表達(dá)、定位及功能

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【摘要】：實(shí)驗(yàn)以小鼠卵母細(xì)胞和早期胚胎為研究對(duì)象,采用免疫組化、qRT-PCR、 Western blot、免疫熒光和RNA干擾等方法研究Nlrp9b在小鼠卵子發(fā)生和早期胚胎發(fā)育過(guò)程中的表達(dá)、定位和功能,利用多種生物信息學(xué)軟件對(duì)小鼠Nlrp9b基因編碼的氨基酸序列進(jìn)行分析,并通過(guò)同源建模對(duì)翻譯的蛋白質(zhì)的三維結(jié)構(gòu)進(jìn)行預(yù)測(cè)。結(jié)果如下：(1)利用RT-PCR和免疫印跡方法分析Nlrp9b在小鼠多個(gè)組織中的表達(dá),結(jié)果表明Nlrp9b的轉(zhuǎn)錄物僅在小鼠的卵巢和小腸中存在,NLRP9B蛋白的表達(dá)被限制在不同卵泡的卵母細(xì)胞中而且隨著小鼠年齡的增加而下降。免疫熒光結(jié)合激光共聚焦顯微鏡的分析表明NLRP9B蛋白主要定位在附植前胚胎的胞質(zhì)中。(2)在GV期卵母細(xì)胞中沉默Nlrp9b并不影響小鼠卵母細(xì)胞的成熟率,將這些Nlrp9b沉默的成熟卵母細(xì)胞進(jìn)行孤雌激活和體外培養(yǎng),結(jié)果顯示這些孤雌胚胎在體外能夠正常發(fā)育；同樣合子中沉默Nlrp9b后,NLRP9B蛋白顯著降低但胚胎發(fā)育沒(méi)有被阻滯,與對(duì)照組相比,沉默組的囊胚形成率也無(wú)差異,結(jié)果表明小鼠卵母細(xì)胞的成熟和早期胚胎發(fā)育不需要Nlrp9b的參與。(3)用生物信息學(xué)軟件分析表明Nlrp9b基因的進(jìn)化與Nlrp9a和Nlrp9c的關(guān)系較遠(yuǎn),同時(shí)分析了NLRP9B蛋白的全長(zhǎng)1003aa,等電點(diǎn)為7.82,分子質(zhì)量114802.16,極性氨基酸占41.3%,二級(jí)結(jié)構(gòu)的螺旋部分占將近一半49.05%,具有兩個(gè)核苷酸結(jié)構(gòu)域DAPIN和NACHT,7個(gè)亮氨酸重復(fù)結(jié)構(gòu),NLRP9B不含有信號(hào)肽位點(diǎn)。
【關(guān)鍵詞】：Nlrp9b RNA干擾 功能 生物信息學(xué)
【學(xué)位授予單位】：福建農(nóng)林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：S814.6
【目錄】：

• 摘要7-8
• Abstract8-10
• 文獻(xiàn)綜述10-21
• 第一章 Nlrp基因家族研究進(jìn)展10-14
• 1.1 Nlrp基因家族概述10-11
• 1.2 Nlrp基因家族與生殖特異性有關(guān)的基因11-12
• 1.3 Nlrp9基因的發(fā)現(xiàn)與結(jié)構(gòu)特征12
• 1.4 Nlrp9的研究現(xiàn)狀12-14
• 第二章 小鼠早期胚胎發(fā)育的研究進(jìn)展14-21
• 2.1 小鼠早期胚胎發(fā)育特點(diǎn)的研究進(jìn)展14-18
• 2.1.1 生殖細(xì)胞起源與生長(zhǎng)14-15
• 2.1.2 合子的卵裂15
• 2.1.3 胚胎基因組的激活15-16
• 2.1.4 桑椹胚致密化16-17
• 2.1.5 囊胚的形成17-18
• 2.2 小鼠胚胎發(fā)育的影響因素研究進(jìn)展18-21
• 2.2.1 母源效應(yīng)基因?qū)υ缙谂咛グl(fā)育的影響18-19
• 2.2.2 基因組印跡對(duì)早期胚胎發(fā)育的影響19
• 2.2.3 環(huán)境因素影響早期胚胎發(fā)育19-21
• 實(shí)驗(yàn)研究21-43
• 第三章 Nlrp9b在小鼠早期胚胎上的表達(dá)與定位21-29
• 3.1 實(shí)驗(yàn)材料與方法21-24
• 3.1.1 實(shí)驗(yàn)材料21
• 3.1.2 實(shí)驗(yàn)方法21-24
• 3.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果24-27
• 3.2.1 Nlrp9b在小鼠不同組織中的表達(dá)24-25
• 3.2.2 NLRP9B蛋白在小鼠卵巢組織中的表達(dá)25
• 3.2.3 NLRP9B蛋白在小鼠附植前胚胎中的表達(dá)和定位25-27
• 3.3 討論27
• 3.4 小結(jié)27-29
• 第四章 Nlrp9b在小鼠早期胚胎發(fā)育中的功能29-37
• 4.1 材料與方法29-30
• 4.1.1 材料29
• 4.1.2 實(shí)驗(yàn)方法29-30
• 4.2 結(jié)果30-35
• 4.2.1 沉默Nlrp9b對(duì)小鼠卵母細(xì)胞成熟的影響30-32
• 4.2.2 卵母細(xì)胞中Nlrp9b的沉默對(duì)孤雌激活后胚胎發(fā)育的影響32-33
• 4.2.3 合子中沉默Nlrp9b對(duì)附植前胚胎發(fā)育的影響33-35
• 4.3 討論35-36
• 4.4 小結(jié)36-37
• 第五章 生物信息學(xué)分析37-43
• 5.1 材料與方法37
• 5.1.1 材料37
• 5.1.2 方法37
• 5.2 結(jié)果與分析37-42
• 5.2.1 構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)生樹(shù)37-38
• 5.2.2 NLRP9B蛋白質(zhì)一級(jí)結(jié)構(gòu)組成分析38-39
• 5.2.3 二級(jí)結(jié)構(gòu)組成分析與三級(jí)結(jié)構(gòu)構(gòu)建39-41
• 5.2.4 NLRP9B蛋白信號(hào)肽分析41
• 5.2.5 NLRP9B的跨膜分析41-42
• 5.3 小結(jié)42-43
• 全文結(jié)論43-44
• 參考文獻(xiàn)44-50
• 縮略詞50-51

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本文編號(hào)：804905