本文關(guān)鍵詞：一株抑制稻瘟菌的解淀粉芽孢桿菌的分離與次生代謝產(chǎn)物成分分析

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【摘要】：稻瘟病是影響水稻產(chǎn)量最為嚴(yán)重的病害之一,目前以篩選具有抗性的水稻品種和化學(xué)防治手段相結(jié)合的方法來預(yù)防和治療,隨著人們生活水平的提高,稻瘟病的耐藥性的增強(qiáng)以及抗性品種相關(guān)抗性的降低,利用天然產(chǎn)物或生物農(nóng)藥等防控手段的需求越來越大。1.本研究從抑菌試驗(yàn)中分離到的一株能夠抑制稻瘟病生長(zhǎng)的芽孢桿菌菌株。通過對(duì)其次生代謝產(chǎn)物進(jìn)行分離和純化,找到了數(shù)種具有生物活性的天然產(chǎn)物,并測(cè)定了其中一種活性物質(zhì)的分子量。希望能夠從其中篩選出具有良好生物活性,成本低廉的新次生代謝產(chǎn)物。2.試驗(yàn)中分離到5株對(duì)稻瘟病有抑制效果的菌株中,選擇了效果最好的一株菌株進(jìn)行研究,并暫命名為Rdx5。經(jīng)形態(tài)學(xué)觀察、淀粉水解酶觀察和基于16SrDNA的系統(tǒng)進(jìn)化樹分析,確認(rèn)該菌株為解淀粉芽孢桿菌(Bacillus amyloliquefa ciens)。3.試驗(yàn)選用Landy液體培養(yǎng)基對(duì)Rdx5進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng),發(fā)酵液具有良好的抑制效果,說明活性成分存在于溶液中。同時(shí),我們也做了抗生素敏感性試驗(yàn),Rdx5表現(xiàn)出對(duì)多種抗生素敏感。4.Rdx5的次生代謝產(chǎn)物中,具有多種對(duì)稻瘟病有抑制作用的生物活性物質(zhì)。液相萃取后在氯仿層、甲醇層、水層均有活性。氯仿／丙酮分配和高效液相色譜分析發(fā)現(xiàn),僅在氯仿萃取層中至少含有三種生物活性物質(zhì)。抑制稻瘟病的次生代謝產(chǎn)物具有良好的熱穩(wěn)定性和紫外線穩(wěn)定性,酸堿穩(wěn)定性較差。利用液相萃取、高效液相色譜技術(shù),試驗(yàn)在數(shù)種具有抑菌活性的次生代謝產(chǎn)物中選擇了一種進(jìn)行了分離純化,并最終得到了該生物活性物質(zhì),質(zhì)譜分析表明,活性物質(zhì)的分子量為586.2759。
【關(guān)鍵詞】：解淀粉芽孢桿菌 稻瘟病 次生代謝產(chǎn)物 生物活性物質(zhì)
【學(xué)位授予單位】：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：S435.111.41;S476.1
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-9
• 第一章 文獻(xiàn)綜述9-21
• 1 水稻概況9
• 2 稻瘟病概述9-19
• 2.1 稻瘟病的發(fā)生原因10-13
• 2.1.1 病原菌和孢子的存在10
• 2.1.2 水稻與稻瘟病病菌的互作10-11
• 2.1.3 病原菌的遺傳多樣性11-12
• 2.1.4 稻瘟病的變異12
• 2.1.5 適于稻瘟病發(fā)病的環(huán)境12-13
• 2.1.6 水稻抗稻瘟病品種與品系的差異13
• 2.2 稻瘟病的防治13-19
• 2.2.1 加強(qiáng)栽培管理13-14
• 2.2.2 篩選水稻抗性品種14
• 2.2.3 轉(zhuǎn)基因抗性水稻的研究14-15
• 2.2.4 化學(xué)防治15-16
• 2.2.5 生物防治16-19
• 2.2.5.1 植物源農(nóng)藥17
• 2.2.5.2 真菌17-18
• 2.2.5.3 放線菌18
• 2.2.5.4 病毒18
• 2.2.5.5 細(xì)菌18-19
• 3 芽孢桿菌概述19-20
• 3.1 解淀粉芽孢桿菌概述19-20
• 3.2 解淀粉芽孢桿菌研究進(jìn)展20
• 4 本研究的目的和意義20-21
• 第二章 稻瘟病菌拮抗菌的分離及鑒定21-45
• 1 引言21-22
• 2 材料與方法22-32
• 2.1 材料22
• 2.2 主要培養(yǎng)基22
• 2.3 主要試劑22-23
• 2.4 主要設(shè)備23
• 2.5 方法23-32
• 2.5.1 細(xì)菌的分離23
• 2.5.2 拮抗菌的篩選23-24
• 2.5.3 拮抗菌對(duì)稻瘟病菌的拮抗效果觀察24
• 2.5.4 拮抗菌濾菌發(fā)酵液對(duì)稻瘟病菌的拮抗效果觀察24
• 2.5.5 拮抗菌形態(tài)特征觀察24-26
• 2.5.5.0 拮抗菌單菌落形態(tài)觀察24
• 2.5.5.1 拮抗菌革蘭氏染色鑒定24-25
• 2.5.5.2 拮抗菌掃描電子顯微鏡形態(tài)觀察25
• 2.5.5.3 拮抗菌淀粉水解酶活性的觀察25-26
• 2.5.6 拮抗菌濾菌發(fā)酵液抑制效果的測(cè)定26
• 2.5.7 拮抗菌發(fā)酵液抑制效果的測(cè)定26-27
• 2.5.8 拮抗菌分子生物學(xué)鑒定27-30
• 2.5.8.1 基因組DNA的獲得27
• 2.5.8.2 感受態(tài)細(xì)胞的制作27-28
• 2.5.8.3 16SrDNA的獲得28-29
• 2.5.8.4 系統(tǒng)進(jìn)化樹的構(gòu)建29-30
• 2.5.9 抗生素敏感試驗(yàn)30-32
• 2.5.9.1 藥敏紙片選用30-31
• 2.5.9.2 抗生素敏感試驗(yàn)步驟31
• 2.5.9.3 拮抗菌藥物敏感性評(píng)估31-32
• 3 結(jié)果與分析32-45
• 3.1 拮抗菌篩選32-33
• 3.2 拮抗菌Rdx5濾菌發(fā)酵液抑制效果觀察33
• 3.3 拮抗菌單菌落形態(tài)觀察33-34
• 3.4 拮抗菌光學(xué)顯微鏡觀察34-37
• 3.4.1 光學(xué)顯微鏡活菌觀察34-35
• 3.4.2 光學(xué)顯微鏡革蘭氏染色觀察35-36
• 3.4.3 拮抗菌掃描電子顯微鏡觀察36-37
• 3.5 淀粉水解酶活性觀察37
• 3.6 拮抗菌Rdx5濾菌發(fā)酵液抑菌效果的測(cè)定37-39
• 3.7 拮抗菌Rdx5活菌抑制效果的測(cè)定39-40
• 3.8 拮抗菌Rdx5分子生物學(xué)鑒定40-44
• 3.8.1 總DNA的獲得40
• 3.8.2 16SrDNA的獲得40-41
• 3.8.3 16SrDNA測(cè)序結(jié)果41-43
• 3.8.4 拮抗菌Rdx5的16SrDNA鑒定結(jié)果43-44
• 3.9 拮抗菌Rdx5藥物敏感性試驗(yàn)44-45
• 第三章 稻瘟病菌拮抗菌Rdx5次生代謝產(chǎn)物的分離及純化45-54
• 1 材料與方法45-49
• 1.1 材料45
• 1.2 主要培養(yǎng)基45
• 1.3 主要試劑45
• 1.4 主要儀器45-46
• 1.5 方法46-49
• 1.5.1 次生代謝產(chǎn)物的穩(wěn)定性46-47
• 1.5.1.1 次生代謝產(chǎn)物的熱穩(wěn)定性46
• 1.5.1.2 次生代謝產(chǎn)物的強(qiáng)酸堿穩(wěn)定性46
• 1.5.1.3 次生代謝產(chǎn)物的紫外線照射穩(wěn)定性46-47
• 1.5.2 次生代謝產(chǎn)物的極性鑒定47
• 1.5.3 氯仿層可溶次生代謝產(chǎn)物的氯仿提取干物質(zhì)的丙酮溶解鑒定47-48
• 1.5.4 HPLC的分離及檢測(cè)48
• 1.5.5 HPLC的分離物的收集48-49
• 1.5.6 HPLC的分離物的純化49
• 2 結(jié)果與分析49-54
• 2.1 次生代謝產(chǎn)物的穩(wěn)定性49-51
• 2.1.1 次生代謝產(chǎn)物的熱穩(wěn)定性49-50
• 2.1.2 次生代謝產(chǎn)物的強(qiáng)酸堿穩(wěn)定性50
• 2.1.3 次生代謝產(chǎn)物的紫外線穩(wěn)定性50-51
• 2.2 拮抗菌Rdx5次生代謝產(chǎn)物的極性鑒定51
• 2.3 氯仿層可溶次生代謝產(chǎn)物的氯仿提取干物質(zhì)的丙酮溶解鑒定51
• 2.4 HPLC次生代謝產(chǎn)物的分離51-52
• 2.5 HPLC次生代謝產(chǎn)物的活性鑒定52-53
• 2.6 HPLC的分離物的純化53-54
• 第四章 稻瘟病菌拮抗菌Rdx5次生代謝產(chǎn)物的鑒定54-57
• 1 引言54-55
• 2 材料與方法55-56
• 2.1 材料55
• 2.2 主要試劑55
• 2.3 主要儀器55
• 2.4 方法55-56
• 3 結(jié)果56-57
• 討論57-60
• 展望及不足之處60-62
• 引用文獻(xiàn)62-65
• 致謝65-66

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3 曹海鵬;抗嗜水氣單胞菌解淀粉芽孢桿菌的抗菌機(jī)理研究及其微膠囊制劑的安全性評(píng)價(jià)[D];上海海洋大學(xué);2013年

4 宋博;解淀粉芽孢桿菌anti-CA菌株抗污損生物的研究[D];中國海洋大學(xué);2014年

5 楊慧林;基于全基因組測(cè)序和系統(tǒng)生物學(xué)分析的鳥苷工業(yè)生產(chǎn)菌分子育種研究[D];華南理工大學(xué);2012年

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1 曹晶晶;解淀粉芽孢桿菌對(duì)小麥黃花葉病的生物防治研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2015年

2 黃路;釀酒酵母在魚類中的益生效應(yīng)研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

3 朱弘元;解淀粉芽孢桿菌B15的有效抑菌成分的研究[D];新疆大學(xué);2015年

4 張金鳳;棉花內(nèi)生解淀粉芽孢桿菌41B-1R應(yīng)用研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

5 單哲;M-01解淀粉芽孢桿菌的分離純化鑒定及其生態(tài)培養(yǎng)生長(zhǎng)規(guī)律的研究[D];揚(yáng)州大學(xué);2015年

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7 徐洪;一株抑制稻瘟菌的解淀粉芽孢桿菌的分離與次生代謝產(chǎn)物成分分析[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

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9 李慧;解淀粉芽孢桿菌及其生物合成環(huán)脂肽抗生素條件研究[D];南京大學(xué);2012年

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