本文關(guān)鍵詞：南瓜種質(zhì)資源遺傳多樣性SRAP和ISSR分析

  更多相關(guān)文章： 南瓜 SRAP ISSR 分子標(biāo)記 遺傳多樣性

【摘要】：南瓜具有豐富的營養(yǎng)價值、保健功能和加工價值,培育優(yōu)質(zhì)的南瓜品種越來越受到育種家的重視。利用分子標(biāo)記技術(shù)對南瓜種質(zhì)資源進(jìn)行遺傳多樣性和親緣關(guān)系分析,對于輔助南瓜育種十分重要。本論文利用SRAP和ISSR兩種分子標(biāo)記技術(shù),分析85份南瓜種質(zhì)資源遺傳多樣性,構(gòu)建遺傳聚類圖,鑒定種質(zhì)資源間的親緣遠(yuǎn)近,同時對南瓜的田間性狀進(jìn)行調(diào)查,為種質(zhì)資源鑒定、分類、雜交育種工作提供理論依據(jù)。主要結(jié)果如下：1南瓜SRAP反應(yīng)體系的建立以‘密本’南瓜為篩選體系材料,通過單因素試驗對南瓜SRAP擴(kuò)增體系中的Mg2+、dNTP、Taq酶、引物、DNA和擴(kuò)增程序中的退火溫度與循環(huán)次數(shù)進(jìn)行優(yōu)化。結(jié)果確立南瓜最佳20μL SRAP體系為：0.20mmol/L dNTP,1.50U Taq酶,80ng DNA,0.16μmol/L的單條引物,1.50mmol/LMg2+,2μL lOxBuffer;最優(yōu)反應(yīng)程序為：94℃預(yù)變性5min；接著94℃1min,35℃ 1min,72℃ 1min,5個循環(huán)；然后94℃ 1min,52℃1min,72℃ 1min,35個循環(huán)；最后72℃延伸10min。2南瓜種質(zhì)資源遺傳多樣性SRAP分析從100對SRAP引物中挑出17對引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增,獲得總條帶200條,差異帶187條,13條條帶為所有南瓜共有,多態(tài)性比例為93.50%。通過Ntsys2.10e軟件計算出85份南瓜種質(zhì)資源遺傳相似系數(shù)為0.4500-0.9850。通過聚類,將收集的南瓜種質(zhì)資源分為美洲南瓜、中國南瓜、印度南瓜三類,親緣關(guān)系較近的是中國南瓜與美洲南瓜,兩類南瓜與印度南瓜的親緣關(guān)系均比較遠(yuǎn)。3南瓜ISSR反應(yīng)體系的建立以‘密本’南瓜為篩選體系材料,采用單因素試驗,對ISSR反應(yīng)體系的Mg2+、 dNTP、Taq酶、引物和DNA等5個因素進(jìn)行優(yōu)化。結(jié)果表明：南瓜25μiL ISSR最佳反應(yīng)體系包括：2.50μL lOxBuffer,2.00mmol/L Mg2+,0.30mmol/L dNTP, 1.00UTaq酶,0.48μmol/L引物,75ng DNA。在此基礎(chǔ)上,對篩選出的12條ISSR引物的退火溫度進(jìn)行優(yōu)化,確定每條引物的最佳退火溫度。4南瓜種質(zhì)資源遺傳多樣性ISSR分析從100條ISSR引物中篩選出12條引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增,獲得總條帶125條,差異帶115條,10條條帶為所有南瓜共有,多態(tài)性比例為92.00%。通過Ntsys2.10e軟件計算出85份南瓜種質(zhì)資源的遺傳相似系數(shù)為0.3840-1.0000。通過聚類,將收集的南瓜種質(zhì)資源分為美洲南瓜、中國南瓜、印度南瓜三類,親緣關(guān)系較近的是中國南瓜與美洲南瓜,兩類南瓜與印度南瓜的親緣關(guān)系均比較遠(yuǎn)。5南瓜田間性狀調(diào)查結(jié)果田間性狀調(diào)查結(jié)果為：子葉長3.40cm-7.30cm;子葉寬2.15cm-4.38cm;子葉長寬比1.30-2.30；瓜重在0.41kg-8.60kg;瓜外橫徑8.60cm-26.40cm；瓜內(nèi)橫徑4.70cm-19.80cm;果實厚度1.85cm.3.48cm;瓜縱徑5.20cm-51.20cm:生長勢有強(qiáng)和中等兩種；主蔓橫切面形狀有圓形和五棱形兩種；葉面白斑有多、中等、少量之分；葉形上有心臟形、心臟五角、近三角、近圓形、掌狀五角、掌狀六種；生長習(xí)性有矮生和蔓生兩種；嫩瓜皮色上有淺綠、深綠、淺黃、綠色、橙紅、黃色六種；老瓜皮色上有橙黃、黃、棕黃、橙紅、深綠、墨綠、黃褐七種；老瓜肉色有橙黃、金黃、淺黃、黃、白五種；瓜面特征上有光滑、多溝、瘤突、皺縮、多棱五個特征；瓜形上有長頸圓筒、橢圓、梨形、扁圓、近圓、長筒六種；瓜面蠟粉上有多、少、無之分。
【關(guān)鍵詞】：南瓜 SRAP ISSR 分子標(biāo)記 遺傳多樣性
【學(xué)位授予單位】：福建農(nóng)林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：S642.1
【目錄】：

• 縮略詞表8-9
• 摘要9-11
• Abstract11-14
• 第一章 前言14-22
• 1 遺傳多樣性研究14-18
• 1.1 遺傳多樣性的概念14
• 1.2 遺傳多樣性的研究方法14-17
• 1.2.1 形態(tài)學(xué)標(biāo)記14-15
• 1.2.2 細(xì)胞學(xué)標(biāo)記15
• 1.2.3 生化標(biāo)記15
• 1.2.4 DNA分子標(biāo)記15-17
• 1.3 遺傳多樣性研究的意義17-18
• 2 南瓜遺傳多樣性的研究現(xiàn)狀18-21
• 2.1 南瓜形態(tài)標(biāo)記18
• 2.2 南瓜細(xì)胞學(xué)標(biāo)記18
• 2.3 南瓜同工酶標(biāo)記18-19
• 2.4 南瓜分子標(biāo)記19-21
• 3 研究的目的與意義21
• 4 研究內(nèi)容21-22
• 第二章 南瓜種質(zhì)資源遺傳多樣性SRAP分析22-40
• 第一節(jié) 南瓜SRAP反應(yīng)體系的建立22-32
• 1 材料與方法22-25
• 1.1 材料22-24
• 1.1.1 實驗材料22-23
• 1.1.2 實驗儀器23
• 1.1.3 實驗試劑23-24
• 1.2 方法24-25
• 1.2.1 南瓜DNA提取方法24
• 1.2.2 SRAP初始擴(kuò)增條件及擴(kuò)增程序24
• 1.2.3 南瓜SRAP-PCR擴(kuò)增反應(yīng)體系及程序優(yōu)化24-25
• 2 結(jié)果與分析25-30
• 2.1 基因組DNA的檢測結(jié)果25-26
• 2.2 Mg~(2+)對SRAP-PCR擴(kuò)增的影響26
• 2.3 dNTP對SRAP-PCR擴(kuò)增的影響26-27
• 2.4 Taq酶對SRAP-PCR擴(kuò)增的影響27
• 2.5 引物濃度對SRAP-PCR擴(kuò)增的影響27-28
• 2.6 模板DNA對SRAP-PCR擴(kuò)增的影響28
• 2.7 退火溫度對SRAP-PCR擴(kuò)增的影響28-29
• 2.8 循環(huán)次數(shù)對SRAP-PCR擴(kuò)增的影響29
• 2.9 南瓜SRAP-PCR擴(kuò)增體系及擴(kuò)增程序的確立29-30
• 3 討論30-32
• 第二節(jié) 南瓜種質(zhì)資源遺傳多樣性SRAP分析32-40
• 1 材料與方法32
• 1.1 材料32
• 1.1.1 實驗材料32
• 1.1.2 實驗儀器32
• 1.1.3 實驗試劑32
• 1.2 方法32
• 1.2.1 PCR反應(yīng)及電泳32
• 1.2.2 SRAP引物的篩選32
• 1.2.3 數(shù)據(jù)處理與分析32
• 2 結(jié)果與分析32-38
• 2.1 引物篩選32-33
• 2.2 17引物對85個南瓜品種的SRAP擴(kuò)增結(jié)果33-35
• 2.3 SRAP聚類結(jié)果分析35-38
• 3 討論38-40
• 第三章 南瓜種質(zhì)資源遺傳多樣性ISSR分析40-54
• 第一節(jié) 南瓜ISSR反應(yīng)體系的建立40-47
• 1 材料與方法40-41
• 1.1 材料40
• 1.1.1 實驗材料40
• 1.1.2 實驗儀器40
• 1.1.3 試劑40
• 1.2 方法40-41
• 1.2.1 ISSR原初擴(kuò)增條件及PCR擴(kuò)增程序40
• 1.2.2 南瓜ISSR擴(kuò)增反應(yīng)體系的優(yōu)化40
• 1.2.3 退火溫度的優(yōu)化40-41
• 2 結(jié)果與分析41-45
• 2.1 Mg~(2+)濃度對ISSR擴(kuò)增的影響41
• 2.2 dNTP濃度對ISSR擴(kuò)增的影響41-42
• 2.3 Taq酶濃度對ISSR擴(kuò)增的影響42
• 2.4 引物濃度對ISSR擴(kuò)增的影響42
• 2.5 DNA用量對ISSR擴(kuò)增的影響42-43
• 2.6 退火溫度對ISSR擴(kuò)增的影響43-44
• 2.7 南瓜ISSR-PCR擴(kuò)增體系及擴(kuò)增程序的確立44-45
• 3 討論45-47
• 第二節(jié) 南瓜種質(zhì)資源遺傳多樣性ISSR分析47-54
• 1 材料與方法47
• 1.1 材料47
• 1.1.1 實驗材料47
• 1.1.2 實驗儀器47
• 1.1.3 實驗試劑47
• 1.2 方法47
• 1.2.1 PCR反應(yīng)及電泳47
• 1.2.2 ISSR引物的篩選47
• 1.2.3 數(shù)據(jù)處理與分析47
• 2 結(jié)果與分析47-53
• 2.1 引物的篩選47-48
• 2.2 引物對85個南瓜品種的ISSR擴(kuò)增結(jié)果48-50
• 2.3 ISSR聚類結(jié)果分析50-53
• 3 討論53-54
• 第四章 南瓜田間性狀調(diào)查54-63
• 1 材料與方法54
• 1.1 材料54
• 1.1.1 實驗材料54
• 1.1.2 主要儀器設(shè)備54
• 1.2 方法54
• 2 結(jié)果與分析54-55
• 3 討論55-63
• 第五章 小結(jié)63-65
• 參考文獻(xiàn)65-70
• 研究生期間發(fā)表相關(guān)論文情況70-71
• 附錄171-74
• 附錄274-77
• 附錄377-86
• 附錄486-98
• 致謝98

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 嚴(yán)欽平,羅伏青,孫小武,匡華夫;優(yōu)質(zhì)南瓜新品種錦栗[J];中國蔬菜;2001年01期

2 逯志鵬;怎樣種好大板多籽南瓜[J];新農(nóng)業(yè);2001年03期

3 潘啟取,謝偉平,曹健松,王燕平;微型南瓜有機(jī)生態(tài)型無土栽培技術(shù)[J];中國蔬菜;2002年03期

4 聞祿,李成華;優(yōu)質(zhì)南瓜新品種——吉祥1號[J];農(nóng)村實用技術(shù);2002年12期

5 鄧少華 ,宋景梅,靳萬芹,劉玉純;南瓜新品種“甘南一號”栽培要點[J];現(xiàn)代農(nóng)業(yè);2002年04期

6 徐有海;怎樣種好觀賞玩偶南瓜[J];農(nóng)家參謀;2002年01期

7 郭文忠,秦墾,李丁仁,趙曉紅;西北地區(qū)發(fā)展南瓜的優(yōu)勢及建議[J];甘肅農(nóng)業(yè)科技;2003年04期

8 霍治軍;南瓜的栽培管理[J];吉林蔬菜;2003年04期

9 張紹文;發(fā)展優(yōu)質(zhì)南瓜大有前途[J];農(nóng)民科技培訓(xùn);2003年06期

10 林蘭清;南瓜的貯藏與加工[J];廣西熱帶農(nóng)業(yè);2004年03期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 劉宜生;林德佩;孫小武;王長林;;我國南瓜屬作物產(chǎn)業(yè)與科技發(fā)展的回顧和展望[A];中國園藝學(xué)會南瓜分會西南地區(qū)南瓜產(chǎn)業(yè)化發(fā)展研討會暨第三屆會員代表大會論文集[C];2009年

2 劉宜生;林德佩;孫小武;王長林;;我國南瓜屬作物產(chǎn)業(yè)與科技發(fā)展的回顧和展望[A];中國園藝學(xué)會南瓜分會學(xué)術(shù)研討會論文摘要集——紀(jì)念中國園藝學(xué)會南瓜分會成立十周年、祝賀第四屆國際瓜類作物學(xué)術(shù)大會在中國召開[C];2009年

3 蔡同一;李全宏;;深入研究南瓜功能,發(fā)展南瓜保健產(chǎn)業(yè)[A];南瓜營養(yǎng)、保健功能與產(chǎn)業(yè)發(fā)展研討會論文集[C];2004年

4 方琦;楊國慧;丁銘;李婷婷;張麗珍;彭潞波;蘇曉霞;張仲凱;;南瓜主要病毒病的細(xì)胞病理觀察[A];第十三屆全國電子顯微學(xué)會議論文集[C];2004年

5 安靜林;張兆國;;南瓜加工利用的研究進(jìn)展[A];2007年中國農(nóng)業(yè)工程學(xué)會學(xué)術(shù)年會論文摘要集[C];2007年

6 孟令君;李柱剛;韓俊巖;王s，

本文編號：724852