本文關(guān)鍵詞：超營養(yǎng)劑量硒對肉雞硒蛋白基因及胰島素信號相關(guān)基因表達(dá)的影響

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【摘要】：硒在維持胰腺正常功能方面發(fā)揮著重要作用,胰腺是雞硒缺乏最敏感的器官,缺硒可嚴(yán)重影響胰腺生長及功能,如引起胰腺變性、壞死、萎縮和纖維化,但超營養(yǎng)劑量的硒對雞胰腺的生長及分泌功能的影響尚不清楚。胰島素主要由胰腺分泌,而硒被認(rèn)為具有胰島素樣作用,硒可能通過對胰島素作用的靶組織中胰島素代謝產(chǎn)生影響而發(fā)揮其胰島素樣作用。硒在生物機(jī)體內(nèi)主要通過硒蛋白發(fā)揮作用,超營養(yǎng)劑量硒對雛雞胰島素代謝相關(guān)組織中硒蛋白基因及胰島素信號相關(guān)基因表達(dá)的影響還不清楚,本實驗旨在探究超營養(yǎng)硒對雛雞生長性能、抗氧化參數(shù)、硒蛋白基因表達(dá)、胰島素代謝相關(guān)指標(biāo)及基因表達(dá)影響,初步探明超營養(yǎng)劑量硒添加條件下雛雞重要代謝組織胰腺、肌肉和肝臟中硒蛋白基因與胰島素信號相關(guān)基因表達(dá)發(fā)生了怎樣的變化,從而為進(jìn)一步研究這些差異表達(dá)的硒蛋白基因與胰島素代謝可能存在的關(guān)系奠定基礎(chǔ)。研究可望為探明硒在胰島素功能維持及胰島素代謝中發(fā)揮的生物學(xué)機(jī)制提供線索。本實驗選用160只一日齡健康科寶肉雞,隨機(jī)分成2個處理組(n=80),每個處理組4個重復(fù),每個重復(fù)20只雞。分別飼喂對照日糧(Se,0.3 mg/kg)和高硒日糧(Se,3.0 mg/kg),本實驗采用玉米-大豆型日糧,經(jīng)過加工處理得到基礎(chǔ)日糧。試驗期6周,期間觀察雛雞生長情況,測定其生長性能,分別在2、4、6周時,每個處理選4只雞宰殺,采集血樣和組織樣(肝臟、胰腺和肌肉),用于測定硒含量、抗氧化指標(biāo)、胰島素相關(guān)指標(biāo)、組織中硒蛋白基因及胰島素信號相關(guān)基因RT-qPCR檢測。實驗結(jié)果如下：1.生長性能及生理生化指標(biāo)測定結(jié)果高硒攝入顯著降低了肉雞的生長性能,肉雞4周、6周及全期肉雞的日增重(Average day gain, ADG)和日采食量(Average day feed intake, ADFI)顯著下降(P0.05),但各階段及全期料肉比(Feed conversation rate, FCR)未受影響(P0.05)。超營養(yǎng)硒日糧極顯著增加了肉雞各個生長階段血清和肝臟中的硒含量(P0.01),且肝臟中硒沉積高于血。與正常硒添加組相比,高硒日糧組第4周血清谷胱甘肽過氧化物酶(Glutathione peroxidase, GSH-PX)活性提高了37%(P0.01),丙二醛(Malondialdehyde, MDA)降低了35%(P0.05)。高硒提高了雛雞4周肝臟中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)活性及MDA的含量(P0.05),而總抗氧化能力(Total antioxidant capacity, T-AOC)降低了8%(P0.05)。在肌肉組織中高硒日糧分別提高了2、4、6周肌肉中GSH-PX活性達(dá)1.8,2.2和2.8倍(P0.01),同時也提高了2周肌肉SOD活性(P0.05)；2周胰腺中GSH-PX、T-AOC和MDA均顯著性增加(P0.05)。高硒顯著提高胰腺第2周和第4周SOD活性,在第4周時,較對照組提高2.7倍(P0.05)。測定了血清中胰島素(Insulin)、血糖(Glucose)、甘油三酯(Triglyceride, TG)及膽固醇(Total cholesterol, TCH)含量,發(fā)現(xiàn)高硒日糧顯著增加了2周肉雞血清胰島素含量,顯著性降低了血糖水平(P0.05),隨著日齡增長,差異逐漸減小。高硒日糧還顯著增加了2周和4周血清TG含量(P0.05),和第6周血清TCH含量(P0.05)。2.硒蛋白基因定量檢測結(jié)果高硒日糧飼喂4周后上調(diào)了雛雞肝臟中2個硒蛋白基因(Seli和Selx)和胰腺中5個硒蛋白基因(GPx3, TR1, Dio3, Selm和Seli)表達(dá)；下調(diào)了肝臟中Diol和Selt,肌肉中Diol, Seli和Selp,以及胰腺中Sephs2 mRNA表達(dá)量。日糧添加高硒(3.0mg/kg)與對照組(0.3mg/kg)相比,上調(diào)了肝臟中7個硒蛋白基因(TR1, TR3, Selm, Seli, Sepxl, Sepnl and Sephs2),肌肉中有12個硒蛋白基因(GPx1, GPx2, TR1, TR3, Dio2, Selk, Selo, Selu, Seli, Sepnl, Selw,Sephs2)和胰腺中的Sephs2的表達(dá)；與此同時,也降低了硒蛋白基因mRNA表達(dá)水平。這些基因包括肌肉中3個硒蛋白基因(Diol, Selm, Selp),肝臟中4個硒蛋白基因(GPxl, Selu, Selk和Selw)和胰腺中使7個硒蛋白(Selm,GPx1,GPx3, GPx4, Dio3, Selk, Selp),隨著高硒飼喂日齡增加,受影響的硒蛋白基因數(shù)量增加。3.胰島素信號相關(guān)基因定量結(jié)果在4周齡時,與對照組比較,高硒日糧上調(diào)了肝臟中Hnf4A和Ucp；肌肉中Pdxl和胰腺中的Hnf4A和Irs1；下調(diào)了肌肉組織中的Irs1和slc2A;胰腺中的HnflA的表達(dá)。高硒日糧飼喂雛雞6周齡,與對照組相比,上調(diào)了肌肉組織中4個胰島素信號相關(guān)基因(Foxol, Hnf4A, Irs2和Pi3k),肝臟中3個胰島素信號相關(guān)基因(GCG,Hnf4A, Slc2A2)和胰腺中2個胰島素信號相關(guān)基因(Hnf4A和Irs2)的表達(dá)；與此同時,下調(diào)了肌肉組織中有3個胰島素信號相關(guān)基因(Aktl, GCG和Ir)和胰腺中有5個胰島素信號相關(guān)基因(Akt1, Foxo2, Ins, Pi3k和Ucp)的表達(dá)。高硒飼喂時間越長,受影響的基因越多。結(jié)論：超營養(yǎng)劑量硒日糧攝入降低了雛雞的生長性能,提高了雛雞血清和肝臟中硒的儲存。高硒對血液及組織中抗氧化酶活具有顯著的影響,同時增加了血清中胰島素、甘油三酯及膽固醇的含量并降低了血糖含量�；蚨糠治鼋Y(jié)果顯示高硒飼喂影響雛雞胰腺、肝臟和肌肉組織中硒蛋白基因表達(dá),并且隨飼喂周期增長,受影響的硒蛋白基因數(shù)量增多,與此同時高硒日糧顯著影響上述組織中胰島素信號相關(guān)基因的表達(dá),并且隨日糧高硒飼喂時間增長,受影響基因個數(shù)增加。上述研究結(jié)果表明,硒與胰島素功能維持存在緊密關(guān)系,硒可能是通過硒蛋白基因表達(dá)而發(fā)揮其類胰島素功能。
【關(guān)鍵詞】：肉雞 硒 硒蛋白 胰島素信號 基因表達(dá)
【學(xué)位授予單位】：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：S831.5
【目錄】：

• 摘要5-8
• Abstract8-11
• 縮寫符號說明11-15
• 1. 緒論15-25
• 1.1 引言15-16
• 1.2 文獻(xiàn)綜述16-22
• 1.2.1 硒在動物體內(nèi)的分布規(guī)律及存在形式16
• 1.2.2 硒蛋白16-19
• 1.2.3 日糧硒水平對動物硒蛋白基因表達(dá)的影響19-20
• 1.2.4 胰島素代謝及相關(guān)基因20-21
• 1.2.5 硒和胰島素代謝的關(guān)系21-22
• 1.3 存在的問題、研究目標(biāo)及內(nèi)容22-25
• 1.3.1 存在的問題22-23
• 1.3.2 研究目標(biāo)23
• 1.3.3 研究內(nèi)容23-24
• 1.3.4 技術(shù)路線24-25
• 2. 材料和方法25-33
• 2.1 主要試驗試劑與儀器25
• 2.1.1 主要試驗試劑25
• 2.1.2 主要試驗儀器25
• 2.2 試驗動物及設(shè)計25-33
• 2.2.1 日糧配方25-27
• 2.2.2 飼養(yǎng)管理27
• 2.2.3 樣品的采集及保存27
• 2.2.4 試驗研究的指標(biāo)測定27-32
• 2.2.5 數(shù)據(jù)處理32-33
• 3. 實驗結(jié)果33-46
• 3.1 高硒對雛雞生長性能的影響33
• 3.2 高硒日糧對血清及肝臟硒含量的影響33-34
• 3.3 高硒日糧對雛雞血清和組織抗氧化指標(biāo)的影響34-37
• 3.3.1 高硒日糧對血清抗氧化參數(shù)的影響34-35
• 3.3.2 高硒日糧對胰腺抗氧化參數(shù)的影響35-36
• 3.3.3 高硒日糧對肝臟抗氧化參數(shù)的影響36-37
• 3.3.4 高硒日糧對肌肉中抗氧化參數(shù)的影響37
• 3.4 高硒日糧對雛雞血清中胰島素相關(guān)指標(biāo)的影響37-39
• 3.4.1 高硒日糧對雛雞血清中葡萄糖及胰島素含量的影響37-38
• 3.4.2 高硒日糧對雛雞血清中甘油三酯(TCH)、膽固醇(TG)水平的影響38-39
• 3.5 高硒日糧對雛雞各組織硒蛋白基因表達(dá)的影響39-42
• 3.5.1 高硒日糧對4周齡雛雞各組織硒蛋白基因表達(dá)的影響39-40
• 3.5.2 高硒日糧對6周齡雛雞各組織硒蛋白基因表達(dá)的影響40-42
• 3.6 高硒日糧對雛雞各組織胰島素信號相關(guān)基因表達(dá)的影響42-46
• 3.6.1 高硒日糧對4周齡雛雞各組織胰島素信號相關(guān)基因表達(dá)的影響42-44
• 3.6.2 高硒日糧對6周齡雛雞各組織胰島素信號相關(guān)基因表達(dá)的影響44-46
• 4. 討論46-56
• 4.1 高硒日糧對雛雞生長性能的影響46
• 4.2 高硒日糧對血清及肝臟硒沉淀的影響46
• 4.3 高硒日糧對抗氧化參數(shù)的影響及與胰島素分泌的相關(guān)性46-47
• 4.3.1 高硒日糧對雛雞各組織抗氧化性能的影響46-47
• 4.3.2 抗氧化性能與胰腺中胰島素分泌的相關(guān)性47
• 4.4 高硒日糧對血糖、胰島素、TG和TCH的影響47-48
• 4.5 高硒日糧對組織胰島素信號相關(guān)基因的影響48-51
• 4.5.1 高硒日糧對肝臟和肌肉胰島素信號相關(guān)基因的影響48-50
• 4.5.2 高硒日糧對胰腺中胰島素信號相關(guān)基因的影響50-51
• 4.6 高硒日糧對硒蛋白基因的影響51-53
• 4.7 硒蛋白對胰島素代謝的影響53-56
• 4.7.1 GPx1對胰島素代謝的影響53-54
• 4.7.2 其他硒蛋白基因?qū)σ葝u素代謝的影響54-56
• 5. 結(jié)論和展望56-57
• 5.1 結(jié)論56
• 5.2 展望56-57
• 參考文獻(xiàn)57-68
• 致謝68

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本文編號：664129