本文關(guān)鍵詞：兔各器官中TLRs表達(dá)譜以及脂多糖對母兔子宮中生殖激素受體表達(dá)的影響

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【摘要】：脂多糖(Lipopolysaccharide, LPS)作為革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁的主要成分,能引起與革蘭氏陰性菌感染相同的炎癥反應(yīng)。雌性動物的生殖道直接開口于外界環(huán)境中,因而更易引發(fā)感染,繼而引發(fā)一些列生殖紊亂,降低家畜繁殖力。下丘腦-垂體-卵巢調(diào)節(jié)軸構(gòu)成一個(gè)完整的神經(jīng)內(nèi)分泌生殖調(diào)節(jié)體系,其分泌的生殖激素對維持雌性動物正常的生殖機(jī)能具有重要的作用。已有研究表明了LPS對生殖激素的影響,而其生物學(xué)效應(yīng)與各自受體密切相關(guān),故本實(shí)驗(yàn)首先檢測Toll樣受體(Toll-like receptors, TLRs)在母兔呼吸、消化器官以及肝、脾、子宮等器官中的表達(dá)譜及表達(dá)水平,了解母兔各個(gè)器官的先天性免疫機(jī)制；同時(shí)用LPS處理母兔,模擬其在自然狀態(tài)下革蘭氏陰性菌感染,探究LPS引起的炎癥反應(yīng)狀態(tài)下,子宮中生殖激素受體：孕酮受體(Progesterone receptor, PR)、孕酮受體膜元件(Progesterone receptor membrane component, PGRMC)、促性腺激素釋放激素受體(Gonadotropin releasing hormone receptor, GnRHR)、促黃體生成素受體(Luteinizing hormone receptor, LHR)和雌激素受體p亞型(Estrogen Receptor beta-subunit, ER-β)的表達(dá)水平,揭示LPS對生殖激素受體的影響,為闡明LPS引起的生殖機(jī)能紊亂奠定理論基礎(chǔ)。36只5-6月齡生理健康間情期的雌性新西蘭白兔。4只(n=4)不做任何處理,作為Oh,16只LPS組耳緣靜脈注射LPS (0.5mg/Kg, n=16),16只對照組注射相應(yīng)體積生理鹽水(n=16),分別于注射后1.5、3、6和12h(n=4)宰殺。Oh未處理(n=4)采集肺、氣管、小腸、胃、肝、脾、子宮角、子宮體、子宮頸、卵巢、輸卵管和下丘腦等組織,用于TLRs表達(dá)譜檢測和表達(dá)水平檢測；LPS組和對照組收集子宮角、子宮體和子宮頸組織,用于生殖激素受體的熒光定量PCR檢測和免疫組化檢測。結(jié)果分析表明：(1)以肝為參照,TLR2在氣管中表達(dá)量高,在肺、小腸、胃、脾、卵巢和下丘腦表達(dá)量低(P0.05)；TLR3在小腸和輸卵管中表達(dá)量高,在胃和下丘腦中表達(dá)量低(P0.05)；TLR4在肺中表達(dá)量高,在氣管、小腸、脾、肝、卵巢、下丘腦和輸卵管中表達(dá)量低(P0.05)；TLR5在肺、氣管和胃中表達(dá)量高,在脾中表達(dá)量低(P0.05)；TLR6在肺,子宮角和子宮體表達(dá)量高,在脾和下丘腦表達(dá)量低(P0.05)；TLR8在肺和脾中表達(dá)量高,在小腸、胃、子宮角、子宮體、子宮頸、卵巢和輸卵管中表達(dá)量低(P0.05)；TLR10在氣管和脾的表達(dá)量高,在小腸、胃、子宮角、子宮體、子宮頸、卵巢、下丘腦和輸卵管中表達(dá)量低(P0.05)。(2)LPS能顯著下調(diào)PR在子宮角、子宮體和子宮頸中的mRNA水平(P0.05)：對子宮角、子宮體和子宮頸上皮細(xì)胞中PR蛋白表達(dá)無影響。LPS可顯著下調(diào)子宮體和子宮頸中PGRMC mRNA水平的表達(dá)量(P0.05);抑制子宮頸上皮細(xì)胞中PGRMC蛋白表達(dá)(P0.05)。LPS能顯著下調(diào)GnRHR在子宮角、子宮體和子宮頸中的mRNA水平表達(dá)量(P0.05),改變其原有表達(dá)模式；對子宮角、子宮體和子宮頸上皮細(xì)胞中GnRHR蛋白表達(dá)無顯著差異(P0.05)。LPS能顯著下調(diào)LHR在子宮角、子宮體和子宮頸中的mRNA水平表達(dá)量(P0.05)；改變LHR蛋白在子宮角、子宮體和子宮頸上皮細(xì)胞中的表達(dá)模式。LPS能改變ER-β在子宮角、子宮體和子宮頸中的mRNA水平表達(dá)模式(P0.05)；上調(diào)子宮角上皮細(xì)胞中ER-β蛋白表達(dá)量(P0.05)。結(jié)論：雌兔的肺、氣管、腸、胃、肝、脾、子宮角、子宮體、子宮頸、卵巢、輸卵管和下丘腦有豐富的TLRs表達(dá)。LPS對子宮中PR、GnRHR和LHR的轉(zhuǎn)錄水平以及蛋白水平的表達(dá)有影響,對PGRMC和ER-β的轉(zhuǎn)錄水平表達(dá)有影響,可能與LPS誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)引起的生殖機(jī)能障礙有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：脂多糖(LPS) TLRs 表達(dá)譜 生殖激素受體 子宮
【學(xué)位授予單位】：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：S829.1
【目錄】：

• 摘要8-10
• Abstract10-13
• 1. 文獻(xiàn)綜述13-20
• 1.1 脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)介導(dǎo)炎性反應(yīng)13
• 1.2 Toll樣受體家族(Toll-like receptors,TLRs)概述13-14
• 1.2.1 TLRs家族13-14
• 1.2.2 TLRs和其配體14
• 1.3 激素受體與繁殖機(jī)能14-18
• 1.3.1 下丘腦-垂體-卵巢調(diào)節(jié)軸14-15
• 1.3.2 調(diào)節(jié)軸中激素、激素受體的重要作用15-18
• 1.3.3 子宮上生殖激素受體的表達(dá)研究進(jìn)展18
• 1.4. 炎癥與生殖機(jī)能紊亂的關(guān)聯(lián)性18-19
• 1.5 本研究的目的和意義19-20
• 2. 材料與方法20-26
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料20-22
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)動物20
• 2.1.2 主要試劑20-21
• 2.1.3 主要溶液配制21
• 2.1.4 主要設(shè)備21-22
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法22-25
• 2.2.1 總RNA的提取22
• 2.2.2 cDNA的合成22-23
• 2.2.3 引物設(shè)計(jì)23-24
• 2.2.4 引物檢測24
• 2.2.5 熒光定量PCR24-25
• 2.2.6 免疫組織化學(xué)25
• 2.2.7 免疫組織化學(xué)圖像分析25
• 2.3 統(tǒng)計(jì)分析25-26
• 3. 結(jié)果與分析26-43
• 3.1 總RNA提取和常規(guī)PCR擴(kuò)增結(jié)果26-27
• 3.2 熒光定量PCR擴(kuò)增的特異性27-28
• 3.3 TLRs在雌兔各器官的表達(dá)譜28-31
• 3.4 LPS對子宮中生殖激素受體mRNA表達(dá)水平的影響31-37
• 3.4.1 LPS對子宮中PR mRNA表達(dá)水平的影響31-32
• 3.4.2 LPS對子宮中PGRMC mRNA表達(dá)水平的影響32-33
• 3.4.3 LPS對子宮中GnRHR mRNA表達(dá)水平的影響33-34
• 3.4.4 LPS對子宮中LHR mRNA表達(dá)水平的影響34-36
• 3.4.5 LPS對子宮中ER-β mRNA表達(dá)水平的影響36-37
• 3.5 子宮中生殖激素受體的定位37-38
• 3.6 LPS對子宮中生殖激素受體蛋白表達(dá)水平的影響38-43
• 3.6.1 LPS對子宮中PR蛋白表達(dá)水平的影響38-39
• 3.6.2 LPS對子宮中PGRMC蛋白表達(dá)水平的影響39-40
• 3.6.3 LPS對子宮中GnRHR蛋白表達(dá)水平的影響40-41
• 3.6.4 LPS對子宮中LHR蛋白表達(dá)水平的影響41-42
• 3.6.5 LPS對子宮中ER-β蛋白表達(dá)水平的影響42-43
• 4. 討論43-49
• 4.1 TLRs在雌兔下丘腦,生殖、呼吸、消化中的表達(dá)和影響43-45
• 4.2 LPS對PR和PGRMC表達(dá)的影響45-46
• 4.3 LPS對GnRHR表達(dá)影響46-47
• 4.4 LPS對LHR表達(dá)的影響47-48
• 4.5 LPS對ER-β表達(dá)的影響48-49
• 5. 結(jié)論49-50
• 參考文獻(xiàn)50-56
• 致謝56-57
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文和參加的學(xué)術(shù)會議57

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本文編號：531942