本文關(guān)鍵詞：抗疫霉放線菌株的分離篩選與抗菌活性成分的初步研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：近些年來,通過利用拮抗微生物進(jìn)行生物防治已經(jīng)逐步成為植物病害防治研究的一大趨勢。放線菌是一類產(chǎn)生拮抗活性物質(zhì)最多的微生物,在植物病害防治中有著巨大應(yīng)用潛力以及廣闊的前景。為了改進(jìn)和提高生物防治對疫霉屬致病菌的效果,找出高效的生防拮抗菌株,本論文從湖南瀏陽煙田土壤中篩選獲得一株拮抗放線菌L24,并以其為研究對象系統(tǒng)地研究了其對疫霉屬致病菌的抗菌活性。主要研究結(jié)果如下：1.放線菌的分離篩選：從湖南瀏陽煙田采集的土樣中,通過稀釋分離法得到放線菌。經(jīng)過平板對峙法和發(fā)酵濾液體外抑菌試驗,得到一個針對疫霉屬致病菌拮抗效果良好的放線菌株L24,其發(fā)酵液經(jīng)5倍稀釋后對疫霉屬病菌效果良好,例如對黃瓜疫霉病菌,辣椒疫霉病菌,煙草黑脛病菌和馬鈴薯晚疫病菌的菌絲的抑制率分別達(dá)到97.3%,86.5%,95.4%和100%。2.放線菌L24菌株鑒定：通過形態(tài)特征,培養(yǎng)特征,生理生化特性的觀察及16S rDNA測序初步將其鑒定為濕鏈霉菌(Streptomyces humidus)。3.放線菌L24菌株發(fā)酵培養(yǎng)基的優(yōu)化：以高氏培養(yǎng)基為基礎(chǔ),對其中的碳源種類,氮源種類及碳氮比采取單因素變化優(yōu)化。優(yōu)化后配方為：大米為40g/L,酵母粉為1.35g/L,K2HPO4為0.5 g/L,NaCl為0.5 g/L,KNO3為1 g/L,MgSO4·7H2O為0.5 g/L, FeSO4為0.01g/L。4.分別測定了不同溫度處理,不同pH環(huán)境以及不同時長紫外照射對放線菌L24菌株發(fā)酵液穩(wěn)定性的影響。試驗結(jié)果表明：L24菌株發(fā)酵液在高溫,酸性條件和紫外光下拮抗效果穩(wěn)定,在堿性條件下拮抗效果不穩(wěn)定。5.拮抗物質(zhì)的分離,收集：收集L24菌株菌體,通過超聲波破壁,甲醇浸取方法,發(fā)現(xiàn)拮抗物質(zhì)主要在菌體內(nèi)。收集放線菌株L24拮抗粗提濃縮液體400mL。6.抑菌活性物質(zhì)萃取劑的選擇：選取四種極性由低到高的有機(jī)試劑：石油醚,氯仿,乙酸乙酯,正丁醇,分別萃取L24菌株發(fā)酵液,進(jìn)行平板抑菌試驗。試驗結(jié)果表明：用高極性溶劑正丁醇萃取的發(fā)酵液粗提物抑制黃瓜疫霉病菌效果最明顯,推測L24發(fā)酵液中抑菌活性成分極性大。7.L24菌株防治黃瓜疫病生物學(xué)測試：采用菌絲塊無傷法分別對離體黃瓜果實及活體黃瓜苗進(jìn)行接種,測定L24菌株分泌的拮抗物質(zhì)對黃瓜疫霉病的防治效果。試驗結(jié)果表明：在離體果實接種試驗中,該菌分泌產(chǎn)生拮抗物質(zhì)的粗提物稀釋液對黃瓜疫霉病菌的侵入及病情發(fā)展有較好的抑制作用,實驗組的發(fā)病率僅為37.5%；在活體盆栽接種試驗中,用稀釋2倍的發(fā)酵液灌根處理對黃瓜疫霉病的防治效果較好,發(fā)病率僅有22.2%。8.放線菌L24菌株對疫霉屬致病菌作用機(jī)理的初步研究：光學(xué)顯微鏡觀察用發(fā)酵液處理后的黃瓜疫霉病菌的菌體形態(tài)變化,結(jié)果表明處理過的菌絲與對照比較有明顯不同,存在菌絲溢縮斷裂畸形的現(xiàn)象。
【關(guān)鍵詞】：放線菌 疫霉屬致病菌 抑菌活性物質(zhì) 生物防治
【學(xué)位授予單位】：湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：S476
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-11
• 第一章 前言11-19
• 1.1 疫霉菌和疫病的研究進(jìn)展11-15
• 1.1.1 疫霉菌的分類地位11-12
• 1.1.2 疫霉菌的多樣性12-13
• 1.1.3 疫病的癥狀13-14
• 1.1.4 疫病現(xiàn)有防治措施14-15
• 1.2 放線菌生物防治研究進(jìn)展15-18
• 1.2.1 放線菌的分類研究進(jìn)展15-16
• 1.2.2 放線菌在生物防治植物病害中的拮抗機(jī)制16-17
• 1.2.3 放線菌生防應(yīng)用及其問題17-18
• 1.3 研究目的與意義18-19
• 第二章 放線菌的土壤分離篩選與拮抗菌株L24種類鑒定19-37
• 1 材料與方法19-27
• 1.1 土壤放線菌分離篩選19-22
• 1.2 放線菌株的鑒定22-27
• 2 實驗結(jié)果27-35
• 2.1 土壤放線菌分離篩選結(jié)果27-31
• 2.2 放線菌株的鑒定結(jié)果31-35
• 3 小結(jié)與討論35-37
• 3.1 土壤放線菌分離篩選35
• 3.2 放線菌株的鑒定35-37
• 第三章 L24菌株搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)基的優(yōu)化及拮抗活性成分基礎(chǔ)研究37-49
• 1 材料與方法37-41
• 1.1 L24菌株搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)基的優(yōu)化37-40
• 1.2 L24菌株拮抗活性成分基礎(chǔ)研究40-41
• 2 結(jié)果與分析41-47
• 2.1 L24菌株搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)基的優(yōu)化41-45
• 2.1.1 碳源,氮源對菌株L24產(chǎn)生活性物質(zhì)的影響41-42
• 2.1.2 碳氮比對菌株L24產(chǎn)生活性物質(zhì)的影響42-43
• 2.1.3 工業(yè)生產(chǎn)中發(fā)酵時間對菌株L24產(chǎn)生活性物質(zhì)的影響43
• 2.1.4 菌株L24代謝產(chǎn)物穩(wěn)定性測定結(jié)果43-45
• 2.2 L24菌株拮抗活性成分前期研究45-47
• 2.2.1 發(fā)酵液萃取劑的選擇45-47
• 2.2.2 放線菌株L24的拮抗活性物質(zhì)所產(chǎn)位置47
• 3 小結(jié)與討論47-49
• 3.1 L24菌株搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)基的優(yōu)化47-48
• 3.2 L24菌株拮抗活性成分前期研究48-49
• 第四章 L24菌株抗菌物質(zhì)防治黃瓜疫霉病的生物學(xué)測試及作用機(jī)理初步研究49-55
• 1 材料與方法49-51
• 1.1 材料49-50
• 1.2 方法50-51
• 1.2.1 菌株L24拮抗活性物質(zhì)的生物學(xué)測試50-51
• 1.2.2 活性物質(zhì)處理的黃瓜疫霉病菌菌絲的制備51
• 1.2.3 光學(xué)顯微鏡下活性物質(zhì)對黃瓜疫霉病菌菌絲作用的形態(tài)觀察51
• 2 結(jié)果與分析51-54
• 2.1 菌株L24拮抗活性物質(zhì)的生物學(xué)測試51-53
• 2.2 光學(xué)顯微鏡下活性物質(zhì)對疫霉病菌菌絲作用的形態(tài)觀察53-54
• 3 小結(jié)與討論54-55
• 第五章 全文總結(jié)、創(chuàng)新點與展望55-58
• 1 全文總結(jié)55-56
• 2 創(chuàng)新點56
• 3 展望56-58
• 參考文獻(xiàn)58-65
• 致謝65-66
• 附頁66

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