發(fā)布時間：2017-06-11 08:10

  本文關(guān)鍵詞：白藜蘆醇對偽狂犬病毒致繁殖障礙作用效果研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：偽狂犬病毒(Pseudorabies virus, PrV)可以感染多種動物,在畜禽生產(chǎn)中,豬是最主要的易感動物,對母豬可造成嚴重的繁殖障礙。目前對于偽狂犬病的防治一般采用接種疫苗或藥物治療,然而這些預(yù)防和治療手段難免對動物產(chǎn)生應(yīng)激或耐藥性,且接種疫苗存在一定的風險性。因此,尋找安全、無應(yīng)激、無殘留的飼料添加劑對于該病的預(yù)防有著重要意義。白藜蘆醇是一種天然植物提取物,研究表明白藜蘆醇具有抗氧化、抗炎癥、抗病毒等作用,可有效增強機體抗病能力,預(yù)防疾病的發(fā)生,但對偽狂犬病是否有一定的預(yù)防作用還未見報道。本研究首先通過體外細胞實驗,探究白藜蘆醇三種處理方法(預(yù)處理、感染后處理及藥物病毒直接作用)對偽狂犬病毒的作用效果；隨后結(jié)合體內(nèi)動物實驗,通過建立PrV致小鼠繁殖障礙模型,探索不同劑量的白藜蘆醇處理對PrV引起的小鼠繁殖障礙的預(yù)防效果。具體結(jié)果如下：1.體外細胞實驗：本研究中,通過MTS法檢測細胞相對活力以及相對熒光定量PCR法檢測不同方法處理后細胞中相對病毒核酸量來初步確定白藜蘆醇抗偽狂犬病毒的作用。研究結(jié)果表明：①白藜蘆醇或PrV單獨處理對細胞的作用：50 μM的白藜蘆醇單獨處理,在一定時間內(nèi)可提高細胞的活力；PrV感染細胞后可影響細胞的活力,病毒核酸含量隨著時間的增加而上升。②白藜蘆醇三種不同的處理方式抗PrV的效果：i.白藜蘆醇預(yù)處理細胞后感染病毒,結(jié)果顯示,50 μM的白藜蘆醇可以在48 h內(nèi)提高感染PrV細胞的活力；50 u M的RES能在24h內(nèi)抑制病毒核酸的水平,而RES作用更長時間則對病毒的抑制作用消失。ii.PrV感染細胞后再用白藜蘆醇處理,結(jié)果顯示,白藜蘆醇處理感染病毒的細胞,在36 h內(nèi)其細胞的相對活力高于空白對照組和PrV對照組,而在48 h時,細胞相對活力高于PrV對照組而低于空白對照組；白藜蘆醇處理病毒感染后的細胞,其核酸水平在24 h得到抑制,隨后抑制作用消失。iii.將病毒和白藜蘆醇預(yù)先混合孵育1 h后再感染細胞,結(jié)果顯示：36 h內(nèi)其處理的細胞活力高于空白對照組和PrV對照組,而在48 h時,其處理的細胞相對活力高于PrV對照組而低于空白對照組,同時伴隨病毒核酸水平高于PrV對照組。2.體內(nèi)動物實驗：用三個不同濃度的白藜蘆醇預(yù)先處理小鼠,建立妊娠后感染PrV研究其抗PrV致小鼠繁殖障礙的影響。結(jié)果顯示：在PrV致小鼠繁殖障礙模型中,妊娠母鼠表現(xiàn)為流產(chǎn)、死胎、產(chǎn)仔數(shù)降低等現(xiàn)象,但對于病原的檢測只在感染小鼠的腦組織中檢測到了微弱的信號,在其組織勻漿液感染的細胞中以及其他組織中均未檢測到；用不同劑量的白藜蘆醇處理可在一定程度上預(yù)防由PrV所致的繁殖障礙,其中劑量為50 mg/kg · d所獲得的預(yù)防效果較好；白藜蘆醇可以提高感染母鼠新生鼠的日增重,還可以延長大劑量PrV攻毒母鼠的平均死亡時間；對于病毒感染的小鼠血清中孕酮的檢測,雖然中劑量白藜蘆醇能較明顯的提高兩者的水平,但均無顯著性差異。綜上所述：白藜蘆醇在體外對抗PrV有一定的效果；體內(nèi)動物實驗顯示PrV可以引起懷孕母鼠較明顯的繁殖障礙,且一定劑量的白藜蘆醇對由PrV造成的繁殖障礙有一定的防治作用。以上結(jié)果可為開發(fā)白藜蘆醇作為一種功能性飼料添加劑產(chǎn)品提供理論依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：白藜蘆醇 偽狂犬病毒 小鼠 繁殖障礙
【學(xué)位授予單位】：湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：S853.7
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-11
• 第一章 文獻綜述11-23
• 1 偽狂犬病與母豬繁殖障礙綜合征11-17
• 1.1 偽狂犬病毒的簡介11-13
• 1.2 偽狂犬病毒的致病機理13-15
• 1.3 偽狂犬病的流行病學(xué)調(diào)查15-16
• 1.4 偽狂犬病毒引起的母豬繁殖障礙綜合征16
• 1.5 總結(jié)16-17
• 2 白藜蘆醇17-21
• 2.1 白藜蘆醇的理化性質(zhì)及提取方法17-18
• 2.2 白藜蘆醇國內(nèi)外研究現(xiàn)狀18-21
• 2.2.1 白藜蘆醇的心血管保護作用18
• 2.2.2 白藜蘆醇的抗氧化作用18
• 2.2.3 白藜蘆醇的抗炎作用18-19
• 2.2.4 白藜蘆醇的抗癌作用19
• 2.2.5 白藜蘆醇的神經(jīng)系統(tǒng)保護作用19-20
• 2.2.6 白藜蘆醇的免疫調(diào)節(jié)作用20
• 2.2.7 白藜蘆醇的抗病毒作用20
• 2.2.8 藜蘆醇其他生物活性作用20-21
• 3 本研究的目的與意義21-22
• 4 本研究的技術(shù)路線22-23
• 4.1 白藜蘆醇對偽狂犬病毒的體外作用效果研究技術(shù)路線圖22
• 4.2 白藜蘆醇對偽狂犬病毒引起的繁殖障礙作用效果研究技術(shù)路線圖22-23
• 第二章 白藜蘆醇對偽狂犬病毒的體外作用效果研究23-39
• 1 材料23-24
• 1.1 主要試劑23
• 1.2 主要儀器23-24
• 1.3 細胞與病毒24
• 2 方法24-28
• 2.1 偽狂犬病毒液的制備24-26
• 2.1.1 偽狂犬病毒的繁殖24
• 2.1.2 偽狂犬病毒的鑒定24-25
• 2.1.3 偽狂犬病毒滴度的測定25-26
• 2.2 白藜蘆醇對細胞的毒性試驗26
• 2.3 白藜蘆醇體外抗PrV病毒的作用效果26-28
• 2.3.1 白藜蘆醇對PrV感染的預(yù)處理作用26-27
• 2.3.2 白藜蘆醇處理PrV病毒感染后的作用27-28
• 2.3.3 白藜蘆醇和PrV病毒的直接作用28
• 3 結(jié)果28-36
• 3.1 偽狂犬病毒的繁殖與鑒定28-30
• 3.2 所繁殖病毒的滴度測定30
• 3.3 白藜蘆醇對PK-15細胞毒性的測定30-32
• 3.4 白藜蘆醇對病毒PrV的作用效果32-36
• 3.4.1 白藜蘆醇對PrV感染的預(yù)處理作用32-33
• 3.4.2 白藜蘆醇處PrV病毒感染后的作用33-35
• 3.4.3 白藜蘆醇對PrV的直接作用35-36
• 4 討論36-37
• 5 小結(jié)37-39
• 第三章 白藜蘆醇對偽狂犬病毒引起的繁殖障礙作用效果研究39-56
• 1 材料39-40
• 1.1 實驗動物39
• 1.2 偽狂犬病毒39
• 1.3 主要試劑39
• 1.4 主要儀器39-40
• 2 方法40-45
• 2.1 溶液的配制40-41
• 2.2 實驗動物分組及處理41-42
• 2.2.1 實驗動物分組41
• 2.2.2 實驗動物處理41
• 2.2.3 實驗動物攻毒造模41-42
• 2.2.4 實驗動物數(shù)據(jù)的收集42
• 2.3 孕酮的測定42
• 2.4 組織勻漿液的制備42-43
• 2.4.1 組織勻漿液接種PK-15細胞42-43
• 2.4.2 組織DNA的提取及基因組DNA的定量43
• 2.5 懷孕母鼠胎盤形態(tài)病理學(xué)檢查43-45
• 2.5.1 組織的固定、脫水以及石蠟包埋43-44
• 2.5.2 蘇木素-伊紅(H&E)染色44-45
• 2.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計學(xué)分析45
• 3 結(jié)果與分析45-53
• 3.1 白藜蘆醇對雌性小鼠體重增加的影響45-46
• 3.2 臟器指數(shù)46
• 3.3 白藜蘆醇對感染PrV母鼠的妊娠情況的影響46-49
• 3.3.1 母鼠的妊娠情況46-48
• 3.3.2 新生鼠日增重48-49
• 3.4 血清孕酮檢測結(jié)果49
• 3.5 母鼠死亡時間49-50
• 3.6 組織中PrV的分離及鑒定50-52
• 3.7 胎盤組織的病理變化52-53
• 4 討論53-55
• 5 小結(jié)55-56
• 第四章 結(jié)論和創(chuàng)新點56-57
• 1 結(jié)論56
• 2 創(chuàng)新點56
• 3 進一步需要開展的工作56-57
• 參考文獻57-64
• 致謝64-65
• 作者簡介65

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