本文關(guān)鍵詞：白藜蘆醇對(duì)偽狂犬病毒致繁殖障礙作用效果研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：偽狂犬病毒(Pseudorabies virus, PrV)可以感染多種動(dòng)物,在畜禽生產(chǎn)中,豬是最主要的易感動(dòng)物,對(duì)母豬可造成嚴(yán)重的繁殖障礙。目前對(duì)于偽狂犬病的防治一般采用接種疫苗或藥物治療,然而這些預(yù)防和治療手段難免對(duì)動(dòng)物產(chǎn)生應(yīng)激或耐藥性,且接種疫苗存在一定的風(fēng)險(xiǎn)性。因此,尋找安全、無(wú)應(yīng)激、無(wú)殘留的飼料添加劑對(duì)于該病的預(yù)防有著重要意義。白藜蘆醇是一種天然植物提取物,研究表明白藜蘆醇具有抗氧化、抗炎癥、抗病毒等作用,可有效增強(qiáng)機(jī)體抗病能力,預(yù)防疾病的發(fā)生,但對(duì)偽狂犬病是否有一定的預(yù)防作用還未見(jiàn)報(bào)道。本研究首先通過(guò)體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn),探究白藜蘆醇三種處理方法(預(yù)處理、感染后處理及藥物病毒直接作用)對(duì)偽狂犬病毒的作用效果；隨后結(jié)合體內(nèi)動(dòng)物實(shí)驗(yàn),通過(guò)建立PrV致小鼠繁殖障礙模型,探索不同劑量的白藜蘆醇處理對(duì)PrV引起的小鼠繁殖障礙的預(yù)防效果。具體結(jié)果如下：1.體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)：本研究中,通過(guò)MTS法檢測(cè)細(xì)胞相對(duì)活力以及相對(duì)熒光定量PCR法檢測(cè)不同方法處理后細(xì)胞中相對(duì)病毒核酸量來(lái)初步確定白藜蘆醇抗偽狂犬病毒的作用。研究結(jié)果表明：①白藜蘆醇或PrV單獨(dú)處理對(duì)細(xì)胞的作用：50 μM的白藜蘆醇單獨(dú)處理,在一定時(shí)間內(nèi)可提高細(xì)胞的活力；PrV感染細(xì)胞后可影響細(xì)胞的活力,病毒核酸含量隨著時(shí)間的增加而上升。②白藜蘆醇三種不同的處理方式抗PrV的效果：i.白藜蘆醇預(yù)處理細(xì)胞后感染病毒,結(jié)果顯示,50 μM的白藜蘆醇可以在48 h內(nèi)提高感染PrV細(xì)胞的活力；50 u M的RES能在24h內(nèi)抑制病毒核酸的水平,而RES作用更長(zhǎng)時(shí)間則對(duì)病毒的抑制作用消失。ii.PrV感染細(xì)胞后再用白藜蘆醇處理,結(jié)果顯示,白藜蘆醇處理感染病毒的細(xì)胞,在36 h內(nèi)其細(xì)胞的相對(duì)活力高于空白對(duì)照組和PrV對(duì)照組,而在48 h時(shí),細(xì)胞相對(duì)活力高于PrV對(duì)照組而低于空白對(duì)照組；白藜蘆醇處理病毒感染后的細(xì)胞,其核酸水平在24 h得到抑制,隨后抑制作用消失。iii.將病毒和白藜蘆醇預(yù)先混合孵育1 h后再感染細(xì)胞,結(jié)果顯示：36 h內(nèi)其處理的細(xì)胞活力高于空白對(duì)照組和PrV對(duì)照組,而在48 h時(shí),其處理的細(xì)胞相對(duì)活力高于PrV對(duì)照組而低于空白對(duì)照組,同時(shí)伴隨病毒核酸水平高于PrV對(duì)照組。2.體內(nèi)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)：用三個(gè)不同濃度的白藜蘆醇預(yù)先處理小鼠,建立妊娠后感染PrV研究其抗PrV致小鼠繁殖障礙的影響。結(jié)果顯示：在PrV致小鼠繁殖障礙模型中,妊娠母鼠表現(xiàn)為流產(chǎn)、死胎、產(chǎn)仔數(shù)降低等現(xiàn)象,但對(duì)于病原的檢測(cè)只在感染小鼠的腦組織中檢測(cè)到了微弱的信號(hào),在其組織勻漿液感染的細(xì)胞中以及其他組織中均未檢測(cè)到；用不同劑量的白藜蘆醇處理可在一定程度上預(yù)防由PrV所致的繁殖障礙,其中劑量為50 mg/kg · d所獲得的預(yù)防效果較好；白藜蘆醇可以提高感染母鼠新生鼠的日增重,還可以延長(zhǎng)大劑量PrV攻毒母鼠的平均死亡時(shí)間；對(duì)于病毒感染的小鼠血清中孕酮的檢測(cè),雖然中劑量白藜蘆醇能較明顯的提高兩者的水平,但均無(wú)顯著性差異。綜上所述：白藜蘆醇在體外對(duì)抗PrV有一定的效果；體內(nèi)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)顯示PrV可以引起懷孕母鼠較明顯的繁殖障礙,且一定劑量的白藜蘆醇對(duì)由PrV造成的繁殖障礙有一定的防治作用。以上結(jié)果可為開(kāi)發(fā)白藜蘆醇作為一種功能性飼料添加劑產(chǎn)品提供理論依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：白藜蘆醇 偽狂犬病毒 小鼠 繁殖障礙
【學(xué)位授予單位】：湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：S853.7
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-11
• 第一章 文獻(xiàn)綜述11-23
• 1 偽狂犬病與母豬繁殖障礙綜合征11-17
• 1.1 偽狂犬病毒的簡(jiǎn)介11-13
• 1.2 偽狂犬病毒的致病機(jī)理13-15
• 1.3 偽狂犬病的流行病學(xué)調(diào)查15-16
• 1.4 偽狂犬病毒引起的母豬繁殖障礙綜合征16
• 1.5 總結(jié)16-17
• 2 白藜蘆醇17-21
• 2.1 白藜蘆醇的理化性質(zhì)及提取方法17-18
• 2.2 白藜蘆醇國(guó)內(nèi)外研究現(xiàn)狀18-21
• 2.2.1 白藜蘆醇的心血管保護(hù)作用18
• 2.2.2 白藜蘆醇的抗氧化作用18
• 2.2.3 白藜蘆醇的抗炎作用18-19
• 2.2.4 白藜蘆醇的抗癌作用19
• 2.2.5 白藜蘆醇的神經(jīng)系統(tǒng)保護(hù)作用19-20
• 2.2.6 白藜蘆醇的免疫調(diào)節(jié)作用20
• 2.2.7 白藜蘆醇的抗病毒作用20
• 2.2.8 藜蘆醇其他生物活性作用20-21
• 3 本研究的目的與意義21-22
• 4 本研究的技術(shù)路線(xiàn)22-23
• 4.1 白藜蘆醇對(duì)偽狂犬病毒的體外作用效果研究技術(shù)路線(xiàn)圖22
• 4.2 白藜蘆醇對(duì)偽狂犬病毒引起的繁殖障礙作用效果研究技術(shù)路線(xiàn)圖22-23
• 第二章 白藜蘆醇對(duì)偽狂犬病毒的體外作用效果研究23-39
• 1 材料23-24
• 1.1 主要試劑23
• 1.2 主要儀器23-24
• 1.3 細(xì)胞與病毒24
• 2 方法24-28
• 2.1 偽狂犬病毒液的制備24-26
• 2.1.1 偽狂犬病毒的繁殖24
• 2.1.2 偽狂犬病毒的鑒定24-25
• 2.1.3 偽狂犬病毒滴度的測(cè)定25-26
• 2.2 白藜蘆醇對(duì)細(xì)胞的毒性試驗(yàn)26
• 2.3 白藜蘆醇體外抗PrV病毒的作用效果26-28
• 2.3.1 白藜蘆醇對(duì)PrV感染的預(yù)處理作用26-27
• 2.3.2 白藜蘆醇處理PrV病毒感染后的作用27-28
• 2.3.3 白藜蘆醇和PrV病毒的直接作用28
• 3 結(jié)果28-36
• 3.1 偽狂犬病毒的繁殖與鑒定28-30
• 3.2 所繁殖病毒的滴度測(cè)定30
• 3.3 白藜蘆醇對(duì)PK-15細(xì)胞毒性的測(cè)定30-32
• 3.4 白藜蘆醇對(duì)病毒PrV的作用效果32-36
• 3.4.1 白藜蘆醇對(duì)PrV感染的預(yù)處理作用32-33
• 3.4.2 白藜蘆醇處PrV病毒感染后的作用33-35
• 3.4.3 白藜蘆醇對(duì)PrV的直接作用35-36
• 4 討論36-37
• 5 小結(jié)37-39
• 第三章 白藜蘆醇對(duì)偽狂犬病毒引起的繁殖障礙作用效果研究39-56
• 1 材料39-40
• 1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物39
• 1.2 偽狂犬病毒39
• 1.3 主要試劑39
• 1.4 主要儀器39-40
• 2 方法40-45
• 2.1 溶液的配制40-41
• 2.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組及處理41-42
• 2.2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組41
• 2.2.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物處理41
• 2.2.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物攻毒造模41-42
• 2.2.4 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物數(shù)據(jù)的收集42
• 2.3 孕酮的測(cè)定42
• 2.4 組織勻漿液的制備42-43
• 2.4.1 組織勻漿液接種PK-15細(xì)胞42-43
• 2.4.2 組織DNA的提取及基因組DNA的定量43
• 2.5 懷孕母鼠胎盤(pán)形態(tài)病理學(xué)檢查43-45
• 2.5.1 組織的固定、脫水以及石蠟包埋43-44
• 2.5.2 蘇木素-伊紅(H&E)染色44-45
• 2.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析45
• 3 結(jié)果與分析45-53
• 3.1 白藜蘆醇對(duì)雌性小鼠體重增加的影響45-46
• 3.2 臟器指數(shù)46
• 3.3 白藜蘆醇對(duì)感染PrV母鼠的妊娠情況的影響46-49
• 3.3.1 母鼠的妊娠情況46-48
• 3.3.2 新生鼠日增重48-49
• 3.4 血清孕酮檢測(cè)結(jié)果49
• 3.5 母鼠死亡時(shí)間49-50
• 3.6 組織中PrV的分離及鑒定50-52
• 3.7 胎盤(pán)組織的病理變化52-53
• 4 討論53-55
• 5 小結(jié)55-56
• 第四章 結(jié)論和創(chuàng)新點(diǎn)56-57
• 1 結(jié)論56
• 2 創(chuàng)新點(diǎn)56
• 3 進(jìn)一步需要開(kāi)展的工作56-57
• 參考文獻(xiàn)57-64
• 致謝64-65
• 作者簡(jiǎn)介65

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