本文關(guān)鍵詞：基于ISSR標記的華石斛遺傳結(jié)構(gòu)分析，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：華石斛(Dendrobium sinense),海南特有種。在我國,僅分布于海南島海拔1000m以上的山地疏林中的樹干上。近年來由于人類活動逐漸活躍以及地理因素導(dǎo)致的生境片段化,華石斛的生境受到了較為嚴重的破壞,選擇合適的居群進行保護已經(jīng)迫在眉睫。隨著分子生物學(xué)的發(fā)展,分子標記技術(shù)因其較高的穩(wěn)定性、豐富的信息量及不同類群間廣泛的可比性等優(yōu)點,突破了形態(tài)學(xué)標記、細胞學(xué)標記等表達型標記的限制,為居群遺傳學(xué)的研究提供了優(yōu)良可靠的分子手段。在前人研究中并未有人專門針對華石斛進行過遺傳多樣性分析,本研究中通過分子標記的方法得到遺傳多樣性較高的居群,再根據(jù)各個居群的環(huán)境對不同居群的華石斛進行有針對性的進行保護工作。 本研究采用簡單重復(fù)序列區(qū)間(Inter-Simple Sequence Repeats, ISSR)一種分子標記技術(shù)研究位于海南島的霸王嶺、尖峰嶺、五指山、黎母山、鸚哥嶺、佳西保護區(qū)及吊羅山共計11個華石斛自然居群的遺傳多樣性水平及其遺傳結(jié)構(gòu),并且對不同因素下的華石斛進行分析,希望通過分子水平對華石斛自然居群的遺傳多樣性進行研究,從而對華石斛保育工作提出意見。主要研究結(jié)果如下： (1)使用改良CTAB、改良SDS和改良PEX三種DNA提取方法提取華石斛鮮樣中的基因組DNA,結(jié)果表明改良PEX法對華石斛鮮樣的提取效果最好,提取出的DNA純度最高、且滿足后續(xù)分子實驗要求。 (2)通過篩選從100條ISSR通用引物中選出10條擴增效果最好且條帶較多的引物對11個華石斛自然居群的樣本進行擴增。結(jié)果表明霸王嶺東五、霸王嶺石峰、五指山二峰、鸚哥嶺4個自然居群具有較高的遺傳多樣性,說明這4個居群具有很強的競爭力和生存力,當環(huán)境發(fā)生變化時能夠很快適應(yīng)并生存下來。而尖峰嶺黑嶺、尖峰嶺二峰、黎母山3個自然居群的遺傳多樣性較低,所以這3個居群的生存力和競爭力較弱,當環(huán)境發(fā)生改變時,這3個居群內(nèi)的個體更容易滅亡從而導(dǎo)致居群的衰退。 (3)將ISSR分子標記的結(jié)果使用AMOVA軟件進行分析顯示,華石斛11個自然居群的遺傳分化有84%發(fā)生在居群內(nèi)部,16%發(fā)生在居群間,得到的結(jié)果與Popgene分析得到的結(jié)果基本一致,使用Popgene分析華石斛11個自然居群的遺傳分化有80.52%發(fā)生在居群內(nèi)部,19.48%發(fā)生在居群間。因此得出結(jié)論,華石斛的遺傳分化主要發(fā)生在居群內(nèi)部,少部分遺傳分化發(fā)生在居群間。 (4)使用ISSR分子標記對華石斛11個自然居群進行研究,結(jié)果顯示華石斛11個居群的基因流為2.0336,大于1,結(jié)果表明：11個華石斛自然居群間存在基因流,且基因流能防止居群間產(chǎn)生隔離,防止居群間分化。 (5)用MEGA對ISSR分子標記的結(jié)果進行UPGMA聚類,結(jié)果顯示：尖峰黑嶺(JFHL)和尖峰二峰(JFEF)、黎母山(LM)和鸚哥嶺(YG)、五指山一峰(WZS1)和五指山二峰(WZS2)、霸王嶺東五(BWDW)和霸王嶺石峰(BWSF)分別聚類在一起,聚類結(jié)果與Popgene分析的遺傳距離結(jié)果一致。 (6)根據(jù)華石斛的附生高度、宿主、居群海拔3個因素分別對華石斛的遺傳多樣性進行分析,得到結(jié)果：附生在桃金娘科、杜鵑花科、山茶科3個科上的華石斛具有較高的遺傳多樣性；附生在宿主高度3-4m區(qū)間內(nèi)的華石斛具有最高的遺傳多樣性；海拔在1200～1400m范圍內(nèi)的華石斛居群具有較高的遺傳多樣性。 (7)對于華石斛的保育措施要著重保護華石斛居群的生境連續(xù)性,當由于自然災(zāi)害導(dǎo)致的生境片段化可以通過人為傳粉幫助華石斛產(chǎn)生有效基因流。對華石斛的保育工作最重要的在于保持華石斛各個居群間的基因流,有效的基因流能夠防止居群間遺傳分化。
【關(guān)鍵詞】：華石斛 分子標記 保育 遺傳結(jié)構(gòu)
【學(xué)位授予單位】：海南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：S567.239
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-10
• 1 前言10-21
• 1.1 居群遺傳學(xué)簡史10-15
• 1.1.1 居群遺傳結(jié)構(gòu)12
• 1.1.2 居群遺傳多樣性12-13
• 1.1.3 中性理論13
• 1.1.4 基因流13-14
• 1.1.5 種群瓶頸14
• 1.1.6 遺傳漂變14-15
• 1.2 蘭科石斛屬植物遺傳多樣性研究15-17
• 1.2.1 分子標記的優(yōu)點15
• 1.2.2 常用的分子標記技術(shù)15-16
• 1.2.3 分子標記的選擇16-17
• 1.2.4 分子標記技術(shù)在蘭科石斛屬植物中的應(yīng)用17
• 1.3 遺傳多樣性在蘭科石斛屬植物保育中的應(yīng)用17-18
• 1.3.1 正確評估居群遺傳多樣性17-18
• 1.3.2 增加有效居群的大小18
• 1.3.3 蘭科石斛屬植物的保育18
• 1.4 論文立題依據(jù)18-19
• 1.5 研究內(nèi)容及技術(shù)路線19-21
• 1.5.1 研究背景及研究內(nèi)容19-20
• 1.5.2 技術(shù)路線20-21
• 2 材料與方法21-30
• 2.1 實驗材料21-24
• 2.1.1 植物材料21-23
• 2.1.2 主要儀器與試劑23-24
• 2.2 實驗方法24-30
• 2.2.1 華石斛DNA的提取24-25
• 2.2.2 不同華石斛部位DNA提取效果對比研究25-26
• 2.2.3 華石斛自然居群的ISSR-PCR分子標記研究26-30
• 3 結(jié)果與分析30-40
• 3.1 華石斛DNA提取結(jié)果與分析30-32
• 3.2 華石斛不同部位DNA提取結(jié)果與分析32-33
• 3.3 華石斛遺傳多樣性分析33-40
• 3.3.1 華石斛居群DNA提取33-35
• 3.3.2 華石斛居群的遺傳多樣性35-37
• 3.3.3 華石斛不同附生高度水平的遺傳多樣性37-38
• 3.3.4 華石斛在不同宿主上的遺傳多樣性38-39
• 3.3.5 華石斛居群不同海拔高度的遺傳多樣性39-40
• 4 討論與結(jié)論40-45
• 4.1 討論40-44
• 4.1.1 華石斛的DNA提取40
• 4.1.2 華石斛居群遺傳多樣性討論40-44
• 4.2 結(jié)論44-45
• 4.2.1 華石斛DNA的提取44
• 4.2.2 華石斛遺傳多樣性研究44-45
• 5 展望45-47
• 5.1 華石斛瀕危原因分析45
• 5.2 華石斛自然居群保護意見45-47
• 參考文獻47-52
• 附錄52-53
• 致謝53

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 周玉杰;楊福孫;宋希強;朱國鵬;胡美姣;;菌根真菌對華石斛幼苗生長及光合性能的影響[J];北方園藝;2009年12期

2 姜昊穎;楊福孫;宋希強;;華石斛原生境條件下人工播種的初步探討[J];熱帶林業(yè);2011年02期

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中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前8條

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3 鄭云柯;基于ISSR標記的華石斛遺傳結(jié)構(gòu)分析[D];海南大學(xué);2015年

4 周玉杰;海南特有種華石斛共生真菌篩選及生物學(xué)特性研究[D];海南大學(xué);2010年

5 陳秀娟;華石斛化學(xué)成分及其生物活性研究[D];海南大學(xué);2013年

6 姜昊穎;海南特有蘭科植物華石斛共生萌發(fā)技術(shù)研究[D];海南大學(xué);2011年

7 談逸;華石斛原地與異地播種萌發(fā)原球莖及內(nèi)生真菌的比較[D];海南大學(xué);2014年

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  本文關(guān)鍵詞：基于ISSR標記的華石斛遺傳結(jié)構(gòu)分析，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：421378