發(fā)布時(shí)間：2017-06-01 12:20

  本文關(guān)鍵詞：一株弧菌拮抗菌的鑒定、抑菌特性及應(yīng)用效果的初步研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：近年來,伴隨著水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的迅速發(fā)展,各種養(yǎng)殖生物受到的病害威脅也越來越嚴(yán)重。病害的發(fā)生不僅帶來巨大的經(jīng)濟(jì)損失,也給環(huán)境帶來較大的影響。而為防治水產(chǎn)生物病害而濫用抗生素等化學(xué)藥物,則會(huì)對(duì)環(huán)境和人類產(chǎn)生嚴(yán)重的影響。益生菌作為抗生素的替代品,可以抑制病原菌,為養(yǎng)殖動(dòng)物提供營養(yǎng),提高養(yǎng)殖動(dòng)物的免疫力,改善水質(zhì)條件,修復(fù)微生態(tài)環(huán)境,因此益生菌的在水產(chǎn)養(yǎng)殖中使用日漸受到人們的重視。益生菌的作用機(jī)理之一是通過產(chǎn)生抑菌物質(zhì)來抑制病原菌的生長。因此,選擇具有較高抑菌活性的細(xì)菌作為潛在的益生菌進(jìn)行研究開發(fā)具有重要的實(shí)踐意義。本研究對(duì)從對(duì)蝦養(yǎng)殖環(huán)境中分離出一株對(duì)弧菌病原菌具有拮抗作用的菌株進(jìn)行了鑒定、產(chǎn)物性質(zhì)分析和應(yīng)用的初步研究,旨在為將其最終應(yīng)用于對(duì)蝦養(yǎng)殖實(shí)踐提供理論基礎(chǔ)。研究獲得的具體結(jié)果如下：1.一株弧菌拮抗菌的分類鑒定及其抑菌作用研究本研究從對(duì)蝦養(yǎng)殖池塘分離篩選出一株對(duì)病原菌有拮抗作用的菌株,編號(hào)為BL1。采用十字交叉法、點(diǎn)種法以及牛津杯法對(duì)其進(jìn)行了體外拮抗試驗(yàn),以確定其抑菌譜。研究結(jié)果顯示,菌株BL1對(duì)溶藻弧菌(Vibrio alginolyticu)、創(chuàng)傷弧菌(V. vulnificus)及副溶血弧菌(V. parahaemolyticus)具有明顯拮抗作用。根據(jù)細(xì)菌形態(tài)、生理生化特征和16S rDNA序列分析,初步鑒定該菌株為枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)。采用單因素分析法進(jìn)一步研究了菌株BL1的最佳培養(yǎng)條件,確定其在培養(yǎng)溫度28℃、初始pH7.0、接種量1%(V/V)、轉(zhuǎn)速190rpm/min的條件下生長狀況最好。2.菌株BL 1抑菌產(chǎn)物的初步分離與性質(zhì)分析本研究以優(yōu)化培養(yǎng)條件后的枯草芽孢桿菌BL1(Bacillus subtilis)發(fā)酵液為研究對(duì)象,以創(chuàng)傷弧菌(Vibrio vulnificus)為指示菌,采用牛津杯法作為檢測方法,對(duì)菌株BL1發(fā)酵液中起抑菌作用的抑菌活性物質(zhì)的性質(zhì)進(jìn)行了初步研究。培養(yǎng)時(shí)間對(duì)抑菌效果影響的實(shí)驗(yàn)顯示,培養(yǎng)24h后的菌液抑菌活性最好；采用過濾、飽和硫酸銨沉淀及超濾等方法對(duì)培養(yǎng)24h的菌株BL1的發(fā)酵液進(jìn)行初步分離純化處理,結(jié)果顯示枯草芽孢桿菌BL1發(fā)酵液中的抑菌物質(zhì)為胞外分泌型、非蛋白類、分子量大于10kDa的物質(zhì)；對(duì)經(jīng)過初步分離純化的抑菌物質(zhì)進(jìn)行穩(wěn)定性的研究,發(fā)現(xiàn)抑菌物質(zhì)對(duì)高溫(60-100℃)和pH(3.0-11.0)的耐受能力比較強(qiáng),對(duì)蛋白酶K不敏感�？梢钥闯�,菌株BL1所產(chǎn)生的抑菌物質(zhì)具有很好的抑菌作用及穩(wěn)定性,表明該菌株可能具有作為益生菌應(yīng)用于海水養(yǎng)殖的潛力。3.潑灑和投喂拮抗菌BL1對(duì)凡納濱對(duì)蝦生長和水體弧菌數(shù)量的影響本研究對(duì)潛在益生菌BL1進(jìn)行了菌株安全性檢驗(yàn)后,以潑灑和投喂兩種方式將菌株BL1應(yīng)用于凡納濱對(duì)蝦(Litopenaeus vannamei)養(yǎng)殖中,以期了解其對(duì)凡納濱對(duì)蝦生長及水體中弧菌數(shù)量的影響。兩種方式均設(shè)置3個(gè)不同的濃度梯度,其中,投喂組添加量分別為107、109和1011cfu/kg(以活菌量計(jì)),潑灑組添加量分別為106、108和1010cfu/m3,以投喂基礎(chǔ)飼料組為對(duì)照組,潑灑周期為5天,實(shí)驗(yàn)共持續(xù)42天。實(shí)驗(yàn)過程中任選1個(gè)潑灑周期按潑灑后12h以及1、2、3、4和5d定時(shí)采樣測定水體弧菌數(shù)量。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)測量對(duì)蝦的生長情況,餌料利用率及存活率。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：(1)生長方面,在兩種施用方式下,除了潑灑組106cfu/m3,其他處理組中菌株BL1均能顯著促進(jìn)對(duì)蝦生長,提高對(duì)蝦的特定生長率(SGR)和餌料利用率(FER)。其中,投喂組以109cfu/m3為最適濃度,潑灑組中108和1010cfu/m3兩個(gè)濃度均能顯著提高SGR,但是兩組之間對(duì)SGR的影響差異不顯著(P0.05)。(2)實(shí)驗(yàn)期間投喂組不同濃度的三個(gè)處理組均能有效降低弧菌數(shù)量,效果持續(xù)并且三組之間的作用規(guī)律相似；潑灑處理組在試驗(yàn)期間水體的弧菌數(shù)量均低于對(duì)照組,水體弧菌數(shù)量隨潑灑濃度的提高而降低,以潑灑濃度為1010cfu/m3的實(shí)驗(yàn)組弧菌數(shù)量最低水平。但研究也發(fā)現(xiàn),潑灑組弧菌數(shù)量在3-5d時(shí)會(huì)呈現(xiàn)一定反彈趨勢。
【關(guān)鍵詞】：益生菌 枯草芽孢桿菌 抑菌物質(zhì) 特定生長率 弧菌數(shù)量
【學(xué)位授予單位】：中國海洋大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：S968.22;S917.1
【目錄】：

• 摘要5-7
• Abstract7-12
• 1. 綜述12-28
• 1.1 引言12-13
• 1.2 益生菌的定義13
• 1.3 益生菌的篩選13-15
• 1.3.1 益生菌的篩選原則及過程13-14
• 1.3.2 益生菌的篩選方法14-15
• 1.4 益生菌的作用機(jī)理15-17
• 1.4.1 競爭性排斥病原菌15-16
• 1.4.2 提供營養(yǎng)物質(zhì),促進(jìn)養(yǎng)殖動(dòng)物生長16
• 1.4.3 刺激免疫系統(tǒng)反應(yīng),提高免疫力16-17
• 1.4.4 改善水質(zhì)條件,修復(fù)生態(tài)環(huán)境17
• 1.4.5 抗病毒作用17
• 1.5. 具有抑菌活性的益生菌17-21
• 1.5.1 常見的益生菌種類17-19
• 1.5.2 芽孢桿菌屬19-21
• 1.6 益生菌在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的應(yīng)用21-23
• 1.6.1 益生菌的施用技術(shù)和劑量21-22
• 1.6.2 益生菌在水產(chǎn)養(yǎng)殖應(yīng)用中存在的問題22-23
• 1.7 本實(shí)驗(yàn)的研究目的及意義23-24
• 參考文獻(xiàn)24-28
• 2 一株拮抗細(xì)菌的分類鑒定及其抑菌作用的研究28-46
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料29-31
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)菌株29
• 2.1.2 培養(yǎng)基與試劑29-31
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法31-33
• 2.2.1. 菌株BL1抑菌譜的測定31-32
• 2.2.2 菌株BL1的分類鑒定32-33
• 2.2.3 生長曲線測定33
• 2.2.4 單因素法優(yōu)化菌株的培養(yǎng)條件33
• 2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果33-41
• 2.3.1 菌株BL1的抑菌譜33-34
• 2.3.2 菌株BL1的分類鑒定34-37
• 2.3.3 菌株BL1的生長曲線37-38
• 2.3.4 單因素法優(yōu)化培養(yǎng)條件38-41
• 2.4 討論41-44
• 2.4.1 具有抑菌作用的微生物41-42
• 2.4.2 菌株BL1的分類地位42
• 2.4.3 枯草芽孢桿菌的培養(yǎng)條件優(yōu)化42-44
• 參考文獻(xiàn)44-46
• 3 菌株BL1抑菌產(chǎn)物的初步分離與性質(zhì)分析46-58
• 3.1 實(shí)驗(yàn)材料47-48
• 3.1.1 實(shí)驗(yàn)菌株47
• 3.1.2 培養(yǎng)基及試劑47-48
• 3.2 實(shí)驗(yàn)方法48-50
• 3.2.1 培養(yǎng)時(shí)間對(duì)菌株BL1抑菌活性的影響48
• 3.2.2 抑菌物質(zhì)的初步分離純化及鑒定48-49
• 3.2.3 溫度、pH和蛋白酶K對(duì)抑菌物質(zhì)的影響49-50
• 3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果50-54
• 3.3.1 培養(yǎng)時(shí)間對(duì)菌株BL1抑菌活性的影響50
• 3.3.2 抑菌物質(zhì)的初步分離純化及鑒定50-52
• 3.3.3 抑菌物質(zhì)的部分特性分析52-54
• 3.4 討論54-56
• 3.4.1 菌株BL1產(chǎn)生的抑菌活性物質(zhì)的分離純化及鑒定54-55
• 3.4.2 抑菌活性物質(zhì)的部分特性研究55-56
• 參考文獻(xiàn)56-58
• 4 潑灑和投喂?jié)撛谝嫔鶥L1對(duì)凡納濱對(duì)蝦生長和水體弧菌數(shù)量變化的影響58-69
• 4.1 實(shí)驗(yàn)材料與實(shí)驗(yàn)方法59-61
• 4.1.1 實(shí)驗(yàn)材料59-60
• 4.1.2 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)及日常管理60-61
• 4.1.3 水體弧菌數(shù)量的測定61
• 4.1.4 對(duì)蝦生長指標(biāo)的測定61
• 4.2 數(shù)據(jù)處理與分析61
• 4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果61-65
• 4.3.1 菌株安全性檢驗(yàn)結(jié)果61-62
• 4.3.2 菌株BL1對(duì)水體弧菌變化的影響62-63
• 4.3.3 施用菌株BL1后對(duì)凡納濱對(duì)蝦生長指標(biāo)的影響63-65
• 4.4 討論65-67
• 4.4.1 枯草芽孢桿菌對(duì)水體弧菌數(shù)量變化的影響65
• 4.4.2 枯草芽孢桿菌對(duì)凡納濱對(duì)蝦生長的影響65-67
• 參考文獻(xiàn)67-69
• 5. 附錄69-71
• 6. 致謝71
• 7. 個(gè)人簡歷71
• 8. 論文發(fā)表情況71

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本文編號(hào)：412603