本文關(guān)鍵詞：白馬山金線蓮組培快繁關(guān)鍵技術(shù)研究及其藥用成分比較，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：花葉開唇蘭(Anoectochilus roxburghii (Wall.)Lindl.)即民間俗稱的金線蓮,同時(shí)擁有藥用、食補(bǔ)和觀賞三大價(jià)值。其來源地豐富,在我國境內(nèi)包括福建、廣西、臺灣等東南沿海至西南9個(gè)省份均有分布。金線蓮對生長環(huán)境的要求嚴(yán)苛,種子萌芽率低,生長緩慢,生產(chǎn)上多采用組培技術(shù)進(jìn)行繁殖。本試驗(yàn)以福建寧德白馬山的野生金線蓮為主要研究對象,對其工廠化的組培、人工種植技術(shù)進(jìn)行優(yōu)化研究,對其不同代數(shù)的組培苗和福建省內(nèi)不同產(chǎn)地的野生苗進(jìn)行ISSR遺傳穩(wěn)定性和多樣性分析,最后比較了它們之間多糖和總黃酮含量的區(qū)別。主要的研究內(nèi)容如下：1福建白馬山野生金線蓮與其它產(chǎn)地野生金線蓮的區(qū)別本試驗(yàn)通過對福建寧德白馬山與省內(nèi)、外其它產(chǎn)地野生金線蓮?fù)庠谛螒B(tài)、ISSR遺傳多樣性和多糖、總黃酮含量的比較,明確了它們之間的區(qū)別性。(1)通過將福建寧德白馬山與省內(nèi)南平、三明、龍巖、泉州,省外廣西、廣東、貴州野生金線蓮相比較,發(fā)現(xiàn)產(chǎn)自寧德白馬山的金線蓮葉片寬大更似心形,葉脈紅艷稀疏,葉緣較平滑,屬于中等大小。(2)提取了福建寧德白馬山,省內(nèi)南平、三明、龍巖、泉州,省外廣西、廣東、貴州野生金線蓮的多糖和總黃酮,結(jié)果顯示：福建野生金線蓮多糖含量高于廣東、廣西和貴州野生樣本,其中寧德白馬山金線蓮的多糖含量為最高,泉州野生樣本與之相近,省外廣西野生樣本的含量為最低；而總黃酮含量上,寧德白馬山與三明野生金線蓮無顯著性差別并列第二,龍巖和廣東樣本的含量則并列第一(3)對白馬山和省內(nèi)南平、三明、龍巖、泉州等4個(gè)主產(chǎn)區(qū)的野生金線蓮樣本進(jìn)行了DNA的提取,在優(yōu)選出的11條通用引物的基礎(chǔ)上經(jīng)過ISSR-PCR擴(kuò)增程序反應(yīng)后,其總共擴(kuò)增出了100條譜帶,而多態(tài)性條帶達(dá)到了72條,占總體的72%；以寧德白馬山野生金線蓮為比較標(biāo)準(zhǔn),計(jì)算福建省內(nèi)其它產(chǎn)地的野生樣本變異率,可發(fā)現(xiàn)泉州野生金線蓮為50.00%,龍巖野生金線蓮為62.50%,三明野生金線蓮為58.33%,南平野生金線蓮為60.42%；根據(jù)聚類分析的結(jié)果,福建省內(nèi)不同產(chǎn)地的野生樣本遺傳相似系數(shù)介于0.58-0.92之間,遺傳距離較大,可見福建省內(nèi)各地區(qū)的野生金線蓮存在著豐富的多樣性。2福建白馬山金線蓮組織培養(yǎng)工廠化育苗的主要技術(shù)研究本試驗(yàn)通過將福建白馬山金線蓮作為主要的研究對象,探究了無菌體系的建立,不同的處理對金線蓮莖段增殖的影響,不同的培養(yǎng)基對金線蓮芽苗生根的作用,不同的添加物組合對金線蓮壯苗培養(yǎng)的效果,最后比較了六種LED不同的光質(zhì)對金線蓮組培苗生長的影響。(1)通過比較金線蓮不同的取材部位在0.1%升汞溶液中不同的浸泡時(shí)間,研究最佳的滅菌組合。結(jié)果為金線蓮的頂部莖段最適合作為建立無菌體系的部位,同時(shí)采用9 min的消毒時(shí)間效果最佳,其存活率為76.67%,污染率為21.67%。(2)增殖階段通過不同濃度的MS培養(yǎng)基、6-BA和NAA,配以不同的莖段位置設(shè)計(jì)了一個(gè)四因素、三水平的正交試驗(yàn)。試驗(yàn)結(jié)果表明,最佳的組合是以金線蓮中部莖段為增殖材料,其更優(yōu)于頂芽和基部,在1/2 MS+6-BA 2.4 mg/L+NAA0.1 mg/L+白糖25g/L的培養(yǎng)基上,增殖系數(shù)可達(dá)到4.02。(3)通過以1/2MS為基本培養(yǎng)基,采用四因素三水平的正交試驗(yàn),探究AC.IBA以及NAA對于金線蓮芽苗生根的影響。試驗(yàn)結(jié)果顯示,AC和IBA對金線蓮生根的影響顯著。篩選出金線蓮最佳的生根組合是1/2MS+AC 0.5 g/L+NAA 1.5 mg/L+IBA 1.5 mg/L+白糖30 g/L,其平均根數(shù)達(dá)到2.1條。(4)以白馬山金線蓮芽苗為材料,在優(yōu)選的生根培養(yǎng)基上比較白糖、香蕉泥、土豆泥、洋蔥泥和花寶1#這些添加物的組合對其壯苗的影響。經(jīng)過賦值評分法對數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì),發(fā)現(xiàn)香蕉泥的添加在金線蓮壯苗中起到主要的作用。即最適宜的壯苗培養(yǎng)基為1/2MS+NAA 1.5 mg/L+IBA 1.5 mg/L+AC 0.5 g/L+白糖20 g/L+香蕉泥60g/L+土豆泥60 g/L+洋蔥泥60 g/L+花寶1#2 g/L。(5)本試驗(yàn)在優(yōu)化的壯苗配方基礎(chǔ)上,使用單因素法旨在通過對比LED紅、黃、藍(lán)、綠、白、暖白光,并以日光燈為對照,研究不同的光源對金線蓮組培苗生長的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)LED暖白光的效果最佳,其中紅、黃、綠容易使植株出現(xiàn)徒長、細(xì)弱的現(xiàn)象,藍(lán)光對苗的生長有益能夠抑制拔高,而暖白和白光則能夠使植株粗壯,增大葉面積。3福建白馬山金線蓮組培苗人工移栽的試驗(yàn)研究選擇組培3個(gè)月左右,株高達(dá)到5-6 cm,有2-3條主根,4片以上葉片,生長健壯的植株為移栽對象。比較不同的種植基質(zhì),廣譜性殺菌劑的組合以及兩種緩釋肥的不同用量對人工移栽的影響。(1)在對比不同基質(zhì)配比的試驗(yàn)中,發(fā)現(xiàn)泥炭：珍珠巖：蛭石：松樹皮=2：1：1：1是最佳的移栽基質(zhì),成活率100%,長勢最優(yōu)。(2)在優(yōu)化的移栽基質(zhì)上,分別以不同倍數(shù)的多菌靈、百菌清、代森錳鋅、甲基托布津以及腐霉利兩兩配對,對移栽苗進(jìn)行輪換澆施,比較它們對金線蓮病害的防治。結(jié)果為以50%的多菌靈1000倍配以70%的甲基托布津1000倍輪換使用對病害的防治效果最佳,同時(shí)也促進(jìn)了植物的生長,增加產(chǎn)量。(3)按照好康多1號和奧綠601兩種緩釋肥不同的施用量對白馬山金線蓮移栽苗進(jìn)行施用,并與清水對照組比較。通過賦值評分法的處理,試驗(yàn)結(jié)果為在15寸種植盤移栽時(shí)施以好康多1號13g是最有利于金線蓮的增產(chǎn),其鮮重、粗度、高度增量比對照分別增加了145.16%、400%以及193%,葉大舒展、葉脈鮮紅且有兩片新葉。4福建白馬山金線蓮組培苗遺傳穩(wěn)定的ISSR分析本試驗(yàn)對福建白馬山金線蓮0代、3代、6代和9代的組培苗進(jìn)行了ISSR遺傳穩(wěn)定性的檢測分析。使用11條通用引物對不同代數(shù)的福建白馬山金線蓮組培苗的DNA進(jìn)行PCR的擴(kuò)增,結(jié)果顯示擴(kuò)增出的總條帶為96條,總的多態(tài)性帶數(shù)為30條,多態(tài)性達(dá)到31.25%。與初代相比3代、6代、9代的變異率分別為9.38%、10.42%、12.50%。0-9代的遺傳相似系數(shù)在0.813-0.990之間,遺傳相似性很大。雖然從第3代開始,隨著代數(shù)的上升變異率會逐步擴(kuò)大,組培苗發(fā)生了一定的變異,但變異率上升幅度并不大,其遺傳性狀依然較為穩(wěn)定,主要藥用成分含量與野生植株差別不大,可作為生產(chǎn)使用。5福建白馬山金線蓮與其它產(chǎn)地金線蓮組培苗藥用成分的測定與分析本試驗(yàn)以福建白馬山金線蓮組培苗和移栽苗為主,以省外其它產(chǎn)地的為比照,探究它們主要藥用成分中多糖和總黃酮含量的變化。(1)將福建寧德白馬山、廣西、江西和臺灣金線蓮培養(yǎng)3個(gè)月左右的瓶苗與其移栽2和3個(gè)月的大棚苗進(jìn)行多糖和總黃酮的提取比較。發(fā)現(xiàn)相較于其它樣本,白馬山金線蓮多糖含量較高,總黃酮含量為最高。而且在移栽初期各品種無論是多糖還是總黃酮含量都有所降低,但隨著種植時(shí)間的延長,它們都呈現(xiàn)出了上升的趨勢。(2)福建寧德白馬山金線蓮在經(jīng)過LED紅、黃、藍(lán)、綠、白、暖白光下培養(yǎng)90 d后,測定其與日光燈處理下苗的多糖、總黃酮含量的變化,發(fā)現(xiàn)LED中紅光最有益于多糖的積累,LED藍(lán)、綠光則最能促進(jìn)總黃酮含量的增加。
【關(guān)鍵詞】：白馬山金線蓮 組織培養(yǎng) 移栽 ISSR 多糖 總黃酮
【學(xué)位授予單位】：福建農(nóng)林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：S567.239
【目錄】：

• 縮寫詞10-12
• 摘要12-15
• Abstract15-20
• 第一章 前言20-35
• 1 金線蓮生物學(xué)特性及藥用成分概述20-23
• 1.1 金線蓮生物學(xué)特性21
• 1.2 金線蓮原植物的探討21-22
• 1.3 金線蓮化學(xué)成分和藥效作用的研究進(jìn)展22-23
• 2 金線蓮工廠化試管育苗技術(shù)的研究進(jìn)展23-31
• 2.1 金線蓮組織培養(yǎng)的研究進(jìn)展23-26
• 2.2 金線蓮組培苗移栽技術(shù)的研究進(jìn)展26-29
• 2.3 LED光源在植物培養(yǎng)中應(yīng)用的研究前景29-31
• 3 ISSR分子標(biāo)記技術(shù)的研究進(jìn)展31-32
• 3.1 ISSR分子標(biāo)記技術(shù)的原理31
• 3.2 ISSR分子標(biāo)記技術(shù)在植物中的應(yīng)用研究31-32
• 3.3 ISSR分子標(biāo)記技術(shù)應(yīng)用于金線蓮的研究進(jìn)展32
• 4 本試驗(yàn)的意義和主要內(nèi)容32-35
• 4.1 本試驗(yàn)的研究意義32-33
• 4.2 本試驗(yàn)的主要研究內(nèi)容33-35
• 第二章 福建白馬山野生金線蓮與其它產(chǎn)地野生金線蓮的比較分析35-53
• 第一節(jié) 福建白馬山和其它產(chǎn)地野生金線蓮多糖和總黃酮含量的差異35-46
• 1 材料與方法35-36
• 1.1 材料來源與處理35-36
• 1.2 儀器和藥品36
• 1.3 試驗(yàn)方法36
• 1.4 計(jì)算方法36
• 2 結(jié)果與分析36-45
• 2.1 福建白馬山和其它產(chǎn)地野生金線蓮的生物學(xué)特性觀察36-37
• 2.2 福建白馬山和其它產(chǎn)地野生金線蓮多糖含量的分析37-41
• 2.3 福建白馬山和其它產(chǎn)地野生金線蓮總黃酮含量的分析41-45
• 3 討論45-46
• 3.1 福建白馬山與其它產(chǎn)地野生金線蓮存在生物學(xué)特性的差異45
• 3.2 福建白馬山野生金線蓮的多糖含量較高45-46
• 3.3 福建白馬山野生金線蓮具有較高的總黃酮含量46
• 第二節(jié) 福建白馬山和省內(nèi)其它產(chǎn)地野生金線蓮ISSR遺傳多樣性的鑒定46-53
• 1 材料與方法46-48
• 1.1 材料46-47
• 1.2 儀器與藥品47
• 1.3 金線蓮DNA的提取47
• 1.4 ISSR-PCR擴(kuò)增反應(yīng)程序47
• 1.5 引物的選擇47-48
• 1.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)和計(jì)算方法48
• 2 結(jié)果與分析48-51
• 2.1 福建白馬山與省內(nèi)其它產(chǎn)地野生金線蓮DNA瓊脂糖凝膠電泳分析48-49
• 2.2 福建白馬山與省內(nèi)其它產(chǎn)地野生金線蓮DNA純度檢測49
• 2.3 福建白馬山與省內(nèi)其它產(chǎn)地野生金線蓮ISSR-PCR的擴(kuò)增反應(yīng)結(jié)果49-50
• 2.4 福建白馬山與省內(nèi)其它產(chǎn)地野生金線蓮的遺傳變異率統(tǒng)計(jì)50
• 2.5 福建白馬山與省內(nèi)其它產(chǎn)地野生金線蓮的聚類分析結(jié)果50-51
• 3 討論51-53
• 第三章 福建白馬山金線蓮組織培養(yǎng)工廠化育苗的關(guān)鍵技術(shù)研究53-86
• 第一節(jié) 福建白馬山金線蓮無菌體系的建立53-56
• 1 材料和方法53-54
• 1.1 材料53-54
• 1.2 試驗(yàn)方法54
• 1.3 基本培養(yǎng)條件54
• 1.4 統(tǒng)計(jì)方法54
• 2 結(jié)果與分析54-55
• 2.1 不同滅菌時(shí)間和取材位置對白馬山金線蓮?fù)庵搀w消毒效果的影響54-55
• 2.2 滅菌后的外植體萌芽和生長狀況55
• 3 討論55-56
• 第二節(jié) 福建白馬山金線蓮增殖條件的篩選56-63
• 1 材料和方法56-57
• 1.1 材料56
• 1.2 試驗(yàn)方法56-57
• 1.3 基本培養(yǎng)條件57
• 1.4 統(tǒng)計(jì)方法和數(shù)據(jù)分析57
• 2 結(jié)果與分析57-63
• 2.1 不同處理對白馬山金線蓮莖段增殖的影響和總體評價(jià)57-59
• 2.2 不同處理對白馬山金線蓮莖段增殖結(jié)果的顯著性分析59-63
• 3 討論63
• 3.1 白馬山金線蓮的中部莖段更有益于其增殖63
• 3.2 1/2MS培養(yǎng)基對白馬山金線蓮增殖起到重要的作用63
• 第三節(jié) 福建白馬山金線蓮的生根研究63-70
• 1 材料和方法64-65
• 1.1 材料64
• 1.2 試驗(yàn)方法64
• 1.3 基本培養(yǎng)條件64
• 1.4 統(tǒng)計(jì)方法和數(shù)據(jù)分析64-65
• 2 結(jié)果與分析65-69
• 2.1 不同培養(yǎng)基對白馬山金線蓮芽苗生根的影響和總體評價(jià)65-66
• 2.2 不同培養(yǎng)基對白馬山金線蓮芽苗生根結(jié)果的顯著性分析66-69
• 3 討論69-70
• 3.1 AC顯著促進(jìn)白馬山金線蓮的生根69
• 3.2 適宜濃度的IBA有助于白馬山金線蓮芽苗的生根69-70
• 第四節(jié) 不同添加物組合對福建白馬山金線蓮壯苗培養(yǎng)的影響70-79
• 1 材料和方法70-71
• 1.1 材料70
• 1.2 試驗(yàn)方法70
• 1.3 基本培養(yǎng)條件70-71
• 1.4 統(tǒng)計(jì)方法和數(shù)據(jù)分析71
• 2 結(jié)果與分析71-79
• 2.1 不同的添加物組合對白馬山金線蓮壯苗的影響和總體評價(jià)71-74
• 2.2 不同添加物組合對白馬山金線蓮壯苗結(jié)果的顯著性分析74-79
• 3 討論79
• 3.1 香蕉泥的添加在金線蓮壯苗過程中起到重要的作用79
• 3.2 花寶1#能夠有效的促進(jìn)和加快
  
  本文編號：407201
  suoshi