腸炎沙門(mén)氏菌(Salmonella enteritidis,SE)是一類泛嗜性沙門(mén)氏菌,其不僅是危害養(yǎng)禽業(yè)發(fā)展最為嚴(yán)重的病原之一,而且經(jīng)常以污染的家禽產(chǎn)品為載體危害人類健康。由fliC基因編碼的鞭毛蛋白是沙門(mén)氏菌重要的保護(hù)性抗原之一,可引起機(jī)體強(qiáng)烈的免疫應(yīng)答反應(yīng)。研究Fli C蛋白的優(yōu)勢(shì)抗原區(qū)對(duì)沙門(mén)氏菌新型疫苗的研發(fā),進(jìn)而減少人類食源性腸炎沙門(mén)氏菌的感染具有重要意義。本研究利用DNaseⅠ將SE的fliC基因隨機(jī)酶切成100-500 bp的DNA小片段,將這些片段插入到酵母表面展示載體pCTCON-2中,并將其轉(zhuǎn)入大腸桿菌中構(gòu)建酵母隨機(jī)展示文庫(kù)pCTCON-fliC-Lib,其庫(kù)容量大小約為2.7×105。通過(guò)基因測(cè)序確定文庫(kù)p CTCON-fliC-Lib的隨機(jī)性和插入片段的大小,結(jié)果顯示隨機(jī)挑取的50個(gè)克隆中的所有片段插入方向都是隨機(jī)的,這些片段的大小在100-500 bp范圍內(nèi),其分布能夠覆蓋整個(gè)fliC基因。將酵母展示文庫(kù)pCTCON-fliC-Lib電擊轉(zhuǎn)入釀酒酵母EBY-100菌株中誘導(dǎo)表達(dá)。用SM6陽(yáng)性血清染誘導(dǎo)表達(dá)的FliC文庫(kù)p CTCON-fliC-Lib,通過(guò)流式細(xì)...

【文章頁(yè)數(shù)】：66 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖1-1酵母細(xì)胞壁的結(jié)構(gòu)模式圖(Shibasakietal.,2009)

圍有一層約200nm厚的細(xì)胞壁，由位于質(zhì)膜外的β-葡聚糖和甘有兩層，內(nèi)層是由β-1,3葡聚糖和β-1,6葡聚糖構(gòu)成骨架層(Man3b)。外層是由甘露糖蛋白組成的纖維狀結(jié)構(gòu)，決定著酵母細(xì)onlanthen,1977)。內(nèi)層和外層通過(guò)共價(jià)鍵相連(圖1-1)。

圖1-2酵母表面展示原理及其過(guò)程的示意圖(Geraetal.,2013;Zuoetal.,2011)

圖1-2酵母表面展示原理及其過(guò)程的示意圖(Geraetal.,2013;Zuoetal.,2011)Fig.1-2Theschematicofyeastsurfacedisplayprincipleandprocess(Geraetal.....

圖1-3酵母表面展示技術(shù)及其應(yīng)用的示意圖(KondoandUeda,2004)

檢測(cè)與篩選測(cè)是臨床診斷疾病的重要途徑，抗原在酵母表面的成功展示是抗體檢測(cè)與篩圖1-3酵母表面展示技術(shù)及其應(yīng)用的示意圖(KondoandUeda,2004).1-3Yeastcellsurfaceengineeringanditsapplicationt....

圖2-1fliC基因全長(zhǎng)的PCR擴(kuò)增結(jié)果

并以其為模板，以fliC-F，1%瓊脂糖凝膠電泳分析。符(圖2-1)。M12

本文編號(hào)：4030949