干擾素調(diào)節(jié)因子9(IRF9)是JAK-STAT信號傳導中的一個重要轉(zhuǎn)錄調(diào)控蛋白。本次研究首先克隆了青魚(black carp)的IRF9基因的編碼序列(coding sequence,CDS),同時對它的抗病毒功能進行了初步地探究。bcIRF9基因的CDS序列由1287個脫氧核苷酸組成,可以翻譯成428個氨基酸;通過ExPASy軟件預測到bcIRF9的分子量和等電點分別為48.31 kDa和7.98。其次結構預測了解到bcIRF9在結構進化中保守,主要由N端的DNA結合結構域(位于1-120aa,DBD)、C端的IRF相關結構域(位于216-428aa,IAD)和中間的連接結構域(位于121-215aa,LD)構成。實時定量PCR實驗得到:bcIRF9在宿主的腎細胞中轉(zhuǎn)錄成mRNA的數(shù)量會隨著LPS,poly(I:C)和草魚呼腸孤病毒(GCRV)的刺激而提高。免疫印跡實驗表明:在HEK293T細胞和EPC細胞中,構建的bcIRF9真核表達載體能成功表達,而且其條帶大小約為54KDa。免疫熒光實驗顯示:bcIRF9集中位于細胞核。我們通過構建bcIRF9的結構域缺失突變體來探究不同結構域...

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【學位級別】：碩士

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圖3-1：bcIRF9的序列比對

青魚IRF9基因的分子克隆及功能初探27第三章實驗結果3.1bcIRF9的分子克隆和序列分析為了研究bcIRF9在宿主的抗病毒免疫的功能，本研究克隆了bcIRF9的編碼序列（CDS）。bcIRF9的CDS由1287個核苷酸組成，編碼428個氨基酸（NCBI登錄號：MH410168....

圖3-2：脊椎動物IRF家族的進化樹

青魚IRF9基因的分子克隆及功能初探29續(xù)表3-1SpeciesFull-lengthsequenceSimilarityIdentityL.crocea58.846.6G.gallus46.233.5H.sapiens47.633.1M.mulatta47.133.6S.scr....

圖3-3.bcIRF9在不同刺激下的轉(zhuǎn)錄表達

碩士學位論文32圖3-3.bcIRF9在不同刺激下的轉(zhuǎn)錄表達。用指定濃度的poly（I︰C）或LPS處理細胞，或分別在指定的MOI下用GCRV感染細胞，并在刺激后指定的時間點收細胞來用于qPCR。Figure3-3.TranscriptionalexpressionofbcIRF....

圖3-4：Flag-bcIRF9蛋白的表達

碩士學位論文32圖3-3.bcIRF9在不同刺激下的轉(zhuǎn)錄表達。用指定濃度的poly（I︰C）或LPS處理細胞，或分別在指定的MOI下用GCRV感染細胞，并在刺激后指定的時間點收細胞來用于qPCR。Figure3-3.TranscriptionalexpressionofbcIRF....

本文編號：3900146