干擾素調(diào)節(jié)因子9(IRF9)是JAK-STAT信號傳導(dǎo)中的一個(gè)重要轉(zhuǎn)錄調(diào)控蛋白。本次研究首先克隆了青魚(black carp)的IRF9基因的編碼序列(coding sequence,CDS),同時(shí)對它的抗病毒功能進(jìn)行了初步地探究。bcIRF9基因的CDS序列由1287個(gè)脫氧核苷酸組成,可以翻譯成428個(gè)氨基酸;通過ExPASy軟件預(yù)測到bcIRF9的分子量和等電點(diǎn)分別為48.31 kDa和7.98。其次結(jié)構(gòu)預(yù)測了解到bcIRF9在結(jié)構(gòu)進(jìn)化中保守,主要由N端的DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域(位于1-120aa,DBD)、C端的IRF相關(guān)結(jié)構(gòu)域(位于216-428aa,IAD)和中間的連接結(jié)構(gòu)域(位于121-215aa,LD)構(gòu)成。實(shí)時(shí)定量PCR實(shí)驗(yàn)得到:bcIRF9在宿主的腎細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄成mRNA的數(shù)量會隨著LPS,poly(I:C)和草魚呼腸孤病毒(GCRV)的刺激而提高。免疫印跡實(shí)驗(yàn)表明:在HEK293T細(xì)胞和EPC細(xì)胞中,構(gòu)建的bcIRF9真核表達(dá)載體能成功表達(dá),而且其條帶大小約為54KDa。免疫熒光實(shí)驗(yàn)顯示:bcIRF9集中位于細(xì)胞核。我們通過構(gòu)建bcIRF9的結(jié)構(gòu)域缺失突變體來探究不同結(jié)構(gòu)域...

【文章頁數(shù)】：64 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖3-1：bcIRF9的序列比對

青魚IRF9基因的分子克隆及功能初探27第三章實(shí)驗(yàn)結(jié)果3.1bcIRF9的分子克隆和序列分析為了研究bcIRF9在宿主的抗病毒免疫的功能，本研究克隆了bcIRF9的編碼序列（CDS）。bcIRF9的CDS由1287個(gè)核苷酸組成，編碼428個(gè)氨基酸（NCBI登錄號：MH410168....

圖3-2：脊椎動物IRF家族的進(jìn)化樹

青魚IRF9基因的分子克隆及功能初探29續(xù)表3-1SpeciesFull-lengthsequenceSimilarityIdentityL.crocea58.846.6G.gallus46.233.5H.sapiens47.633.1M.mulatta47.133.6S.scr....

圖3-3.bcIRF9在不同刺激下的轉(zhuǎn)錄表達(dá)

碩士學(xué)位論文32圖3-3.bcIRF9在不同刺激下的轉(zhuǎn)錄表達(dá)。用指定濃度的poly（I︰C）或LPS處理細(xì)胞，或分別在指定的MOI下用GCRV感染細(xì)胞，并在刺激后指定的時(shí)間點(diǎn)收細(xì)胞來用于qPCR。Figure3-3.TranscriptionalexpressionofbcIRF....

圖3-4：Flag-bcIRF9蛋白的表達(dá)

碩士學(xué)位論文32圖3-3.bcIRF9在不同刺激下的轉(zhuǎn)錄表達(dá)。用指定濃度的poly（I︰C）或LPS處理細(xì)胞，或分別在指定的MOI下用GCRV感染細(xì)胞，并在刺激后指定的時(shí)間點(diǎn)收細(xì)胞來用于qPCR。Figure3-3.TranscriptionalexpressionofbcIRF....

本文編號：3900146