先天免疫是生物體在發(fā)育的長(zhǎng)期過(guò)程中建立起來(lái)的一系列天然保護(hù)能力,它提供了一種可以迅速阻礙病毒感染和傳播的屏障。環(huán)指蛋白11(RNF11)為RING-finger (Really Interesting New Gene)家族成員之一,屬于E3泛素連接酶家族成員,在人的抗病毒通路中發(fā)揮著重要的作用,RNF11是否也在雞的免疫抗病毒過(guò)程發(fā)揮相同的作用,參與炎癥反應(yīng)的調(diào)節(jié),目前還沒(méi)有相關(guān)報(bào)道。本試驗(yàn)首先通過(guò)克隆雞RNF11基因CDS區(qū),并進(jìn)行序列分析和蛋白相關(guān)特性的預(yù)測(cè)；其次對(duì)1日齡SPF雞腹腔注射禽白血病病毒(ALV-J),利用定量PCR技術(shù)檢測(cè)RNF11以及干擾素IFN-a和IFN-β基因在14、21、28和35日齡雞法氏囊、脾臟和胸腺中的表達(dá)；最后,通過(guò)構(gòu)建RNF11基因的過(guò)表達(dá)載體和干擾載體并轉(zhuǎn)染到雞成纖維細(xì)胞,分析轉(zhuǎn)染后的24和28小時(shí)(hps),RNF11對(duì)IFN-β基因表達(dá)的影響,進(jìn)一步驗(yàn)證RNF11在雞抗病毒通路上的作用,進(jìn)一步檢測(cè)炎性因子IL2和IL10基因的表達(dá),初步探討RNF11對(duì)炎癥反應(yīng)的影響。試驗(yàn)結(jié)果如下：1)通過(guò)分析克隆所得雞RNF11基因的CDS區(qū)序列,得到了一...

【文章頁(yè)數(shù)】：73 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
常用詞語(yǔ)縮寫(xiě)
1. 文獻(xiàn)綜述
    1.1 先天免疫抗病毒信號(hào)通路
    1.2 RNF11基因
        1.2.1 人的RNF11基因
        1.2.2 RNF11在組織上的表達(dá)
    1.3 RNF11的功能
        1.3.1 RNF11與Ets1綁定激活轉(zhuǎn)錄
        1.3.2 RNF11在泛素化調(diào)節(jié)中起重要作用
        1.3.3 RNF11調(diào)節(jié)TGF1信號(hào)通路
        1.3.4 RNF11負(fù)反饋調(diào)節(jié)EGFR信號(hào)通路
        1.3.5 RNF11提高DNA損傷以及增強(qiáng)信號(hào)反應(yīng)
    1.4 RNF11在抗病毒通路上的負(fù)調(diào)節(jié)作用
    1.5 本試驗(yàn)的目的意義及主要研究?jī)?nèi)容
2. 材料與方法
    2.1 克隆試驗(yàn)
        2.1.1 克隆試驗(yàn)材料
        2.1.2 主要試劑與儀器
        2.1.3 主要配制試劑
        2.1.4 試驗(yàn)方法
        2.1.5 序列分析
    2.2 機(jī)體攻毒試驗(yàn)材料與方法
        2.2.1 機(jī)體攻毒試驗(yàn)材料
        2.2.2 主要試劑與儀器
        2.2.3 試驗(yàn)方法
        2.2.4 統(tǒng)計(jì)分析
    2.3 細(xì)胞水平試驗(yàn)
        2.3.1 細(xì)胞試驗(yàn)材料
        2.3.2 主要試劑與儀器
        2.3.3 試驗(yàn)方法
3. 結(jié)果與分析
    3.1 克隆試驗(yàn)
        3.1.1 目的片段的測(cè)序
        3.1.2 雞RNF11基因CDS的堿基分析
        3.1.3 雞RNF11基因CDS區(qū)序列的比對(duì)結(jié)果
        3.1.4 雞RNF11基因CDS密碼子及氨基酸組成分析
        3.1.5 蛋白質(zhì)磷酸化位點(diǎn)的預(yù)測(cè)
        3.1.6 RNF11蛋白疏水性分析
        3.1.7 雞RNF11蛋白質(zhì)信號(hào)肽分析
        3.1.8 雞RNF11蛋白質(zhì)跨膜螺旋特征分析
        3.1.9 蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)的預(yù)測(cè)
        3.1.10 雞RNF11蛋白質(zhì)保守結(jié)構(gòu)域預(yù)測(cè)
        3.1.11 雞RNF11蛋白質(zhì)亞細(xì)胞定位預(yù)測(cè)
    3.2 J亞群禽白血病病毒攻毒
        3.2.1 ALV-J攻毒后病毒在雞免疫組織中的復(fù)制情況
        3.2.2 ALV-J感染機(jī)體后法氏囊中RNF11基因和干擾素基因的表達(dá)
        3.2.3 ALV-J感染機(jī)體后脾臟RNF11基因和干擾素基因的表達(dá)
        3.2.4 ALV-J感染機(jī)體后胸腺RNF11基因和干擾素基因的表達(dá)
        3.2.5 ALV-J感染機(jī)體后RNF11基因和干擾素基因的表達(dá)曲線
    3.3 細(xì)胞試驗(yàn)
        3.3.1 RNF11基因的過(guò)表達(dá)
        3.3.2 RNF11基因的干擾
4. 討論
    4.1 雞RNF11基因的克隆
    4.2 ALV-J對(duì)不同時(shí)期免疫組織中RNF11和IFN-α/β基因表達(dá)量的影響
    4.3 RNF11抑制抗病毒通路
    4.4 RNF11基因?qū)ρ装Y反應(yīng)的影響
5 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀碩士期間發(fā)表論文情況



本文編號(hào)：3884987