先天免疫是生物體在發(fā)育的長期過程中建立起來的一系列天然保護能力,它提供了一種可以迅速阻礙病毒感染和傳播的屏障。環(huán)指蛋白11(RNF11)為RING-finger (Really Interesting New Gene)家族成員之一,屬于E3泛素連接酶家族成員,在人的抗病毒通路中發(fā)揮著重要的作用,RNF11是否也在雞的免疫抗病毒過程發(fā)揮相同的作用,參與炎癥反應的調(diào)節(jié),目前還沒有相關(guān)報道。本試驗首先通過克隆雞RNF11基因CDS區(qū),并進行序列分析和蛋白相關(guān)特性的預測；其次對1日齡SPF雞腹腔注射禽白血病病毒(ALV-J),利用定量PCR技術(shù)檢測RNF11以及干擾素IFN-a和IFN-β基因在14、21、28和35日齡雞法氏囊、脾臟和胸腺中的表達；最后,通過構(gòu)建RNF11基因的過表達載體和干擾載體并轉(zhuǎn)染到雞成纖維細胞,分析轉(zhuǎn)染后的24和28小時(hps),RNF11對IFN-β基因表達的影響,進一步驗證RNF11在雞抗病毒通路上的作用,進一步檢測炎性因子IL2和IL10基因的表達,初步探討RNF11對炎癥反應的影響。試驗結(jié)果如下：1)通過分析克隆所得雞RNF11基因的CDS區(qū)序列,得到了一...

【文章頁數(shù)】：73 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
常用詞語縮寫
1. 文獻綜述
    1.1 先天免疫抗病毒信號通路
    1.2 RNF11基因
        1.2.1 人的RNF11基因
        1.2.2 RNF11在組織上的表達
    1.3 RNF11的功能
        1.3.1 RNF11與Ets1綁定激活轉(zhuǎn)錄
        1.3.2 RNF11在泛素化調(diào)節(jié)中起重要作用
        1.3.3 RNF11調(diào)節(jié)TGF1信號通路
        1.3.4 RNF11負反饋調(diào)節(jié)EGFR信號通路
        1.3.5 RNF11提高DNA損傷以及增強信號反應
    1.4 RNF11在抗病毒通路上的負調(diào)節(jié)作用
    1.5 本試驗的目的意義及主要研究內(nèi)容
2. 材料與方法
    2.1 克隆試驗
        2.1.1 克隆試驗材料
        2.1.2 主要試劑與儀器
        2.1.3 主要配制試劑
        2.1.4 試驗方法
        2.1.5 序列分析
    2.2 機體攻毒試驗材料與方法
        2.2.1 機體攻毒試驗材料
        2.2.2 主要試劑與儀器
        2.2.3 試驗方法
        2.2.4 統(tǒng)計分析
    2.3 細胞水平試驗
        2.3.1 細胞試驗材料
        2.3.2 主要試劑與儀器
        2.3.3 試驗方法
3. 結(jié)果與分析
    3.1 克隆試驗
        3.1.1 目的片段的測序
        3.1.2 雞RNF11基因CDS的堿基分析
        3.1.3 雞RNF11基因CDS區(qū)序列的比對結(jié)果
        3.1.4 雞RNF11基因CDS密碼子及氨基酸組成分析
        3.1.5 蛋白質(zhì)磷酸化位點的預測
        3.1.6 RNF11蛋白疏水性分析
        3.1.7 雞RNF11蛋白質(zhì)信號肽分析
        3.1.8 雞RNF11蛋白質(zhì)跨膜螺旋特征分析
        3.1.9 蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)的預測
        3.1.10 雞RNF11蛋白質(zhì)保守結(jié)構(gòu)域預測
        3.1.11 雞RNF11蛋白質(zhì)亞細胞定位預測
    3.2 J亞群禽白血病病毒攻毒
        3.2.1 ALV-J攻毒后病毒在雞免疫組織中的復制情況
        3.2.2 ALV-J感染機體后法氏囊中RNF11基因和干擾素基因的表達
        3.2.3 ALV-J感染機體后脾臟RNF11基因和干擾素基因的表達
        3.2.4 ALV-J感染機體后胸腺RNF11基因和干擾素基因的表達
        3.2.5 ALV-J感染機體后RNF11基因和干擾素基因的表達曲線
    3.3 細胞試驗
        3.3.1 RNF11基因的過表達
        3.3.2 RNF11基因的干擾
4. 討論
    4.1 雞RNF11基因的克隆
    4.2 ALV-J對不同時期免疫組織中RNF11和IFN-α/β基因表達量的影響
    4.3 RNF11抑制抗病毒通路
    4.4 RNF11基因?qū)ρ装Y反應的影響
5 結(jié)論
參考文獻
致謝
攻讀碩士期間發(fā)表論文情況



本文編號：3884987