半滑舌鰨(Cynoglossus semilaevis)是我國極其重要的海洋養(yǎng)殖經(jīng)濟(jì)魚類,雌雄個體差異較大。R-spondin(Rspo)蛋白家族共有4位成員,Rspo1-4,為分泌性蛋白。Rspo蛋白家族成員含有相似度很高的保守結(jié)構(gòu)域：2個富含半胱氨酸的furin-like結(jié)構(gòu)功能域(furin-like cysteine rich domain,FU)和1個血小板反應(yīng)蛋白結(jié)構(gòu)域(thrombospondin-type 1 domain,TSP1)。已知所有的成員蛋白均能與Wnt信號通路相互作用,在脊椎動物發(fā)育過程中發(fā)揮著不同的功能。Rspo1基因作為一個卵巢決定和分化的最佳候選基因,在性別決定、皮膚分化和惡性腫瘤等方面都具有重要的功能。Rspo3基因能調(diào)控造血干細(xì)胞命運(yùn)、促進(jìn)血管生成、調(diào)控哺乳動物胎盤發(fā)育等等。本實(shí)驗(yàn)主要是通過同源克隆技術(shù)和RACE PCR技術(shù)(Rapid amplification of cDNA ends PCR)分離出半滑舌鰨Rspo1基因和Rspo3基因的cDNA全長,利用原位雜交和熒光定量PCR對其基因表達(dá)進(jìn)行了研究,結(jié)合所得到的結(jié)果通過生物信息學(xué)分析,對...

【文章頁數(shù)】：74 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 文獻(xiàn)綜述
    0 引言
    1 Rspo家族簡介
        1.1 Rspo1基因
        1.2 Rspo3基因
        1.3 Rspo家族其它基因
        1.4 Rspo家族與疾病
    2 WNT信號通路
        2.1 經(jīng)典WNT信號通路
        2.2 非經(jīng)典WNT信號通路
        2.3 Rspo與WNT信號通路
    3 魚類的性別決定
        3.1 遺傳決定型
        3.2 環(huán)境決定型
        3.3 溫度決定型
        3.4 行為決定型
    4 本研究的意義
第二章 半滑舌鰨Rspo1基因的克隆和表達(dá)分析
    1 材料與方法
        1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.2 本實(shí)驗(yàn)所用引物(表2-1)
        1.3 總RNA的提取、純化、檢測
        1.4 cDNA的合成
        1.5 半滑舌鰨Rspo1基因的克隆
        1.6 半滑舌鰨Rspo1基因的序列及蛋白結(jié)果預(yù)測分析
        1.7 半滑舌鰨Rspo1基因qRT-PCR分析
        1.8 原位雜交
        1.9 半滑舌鰨Rspo1-GFP載體構(gòu)建
        1.10 半滑舌鰨Rspo1基因?qū)nt通路的影響
    2 結(jié)果
        2.1 RNA的檢測
        2.2 半滑舌鰨Rspo1基因全長及序列分析
        2.3 半滑舌鰨Rspo1基因的表達(dá)分析
        2.4 半滑舌鰨Rspo1基因的組織切片原位雜交
        2.5 半滑舌鰨Rspo1-GFP融合質(zhì)粒在斑馬魚體內(nèi)的表達(dá)
        2.6 半滑舌鰨Rspo1基因?qū)nt通路的影響
    3 討論
第三章 半滑舌鰨Rspo3基因的克隆和表達(dá)分析
    1 材料與方法
    2 結(jié)果
        2.1 半滑舌鰨Rspo3基因全長及序列分析
        2.2 半滑舌鰨Rspo3基因成魚組織的表達(dá)分析
        2.3 半滑舌鰨Rspo3-GFP融合質(zhì)粒在斑馬魚體內(nèi)的表達(dá)
        2.4 半滑舌鰨Rspo3基因的細(xì)胞轉(zhuǎn)染
    3 討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
個人簡歷



本文編號：3878099