本文關(guān)鍵詞：孵化溫度對鴨胚基因組甲基化的時空影響及相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：孵化溫度作為禽類胚胎發(fā)育的重要外源環(huán)境因素之一,適當(dāng)改變能影響禽類胚胎及出殼后骨骼肌發(fā)育。我們猜測基因組表觀遺傳機(jī)制在其中起了重要作用,即孵化溫度改變可能影響鴨胚基因組甲基化程度,進(jìn)而影響基因表達(dá)水平,并最終導(dǎo)致鴨個體表型性狀的改變。因此,本研究擬擴(kuò)增鴨DNA甲基轉(zhuǎn)移酶(DNMTS)和甲基結(jié)合蛋白(MBPS)基因家族基因cDNA部分序列,設(shè)計特異性熒光定量引物,研究孵化溫度對甲基化相關(guān)基因表達(dá)的時空影響；在此基礎(chǔ)上,從骨骼肌發(fā)育相關(guān)基因中篩選部分表達(dá)水平受孵化溫度影響明顯的基因,分析其啟動子甲基化狀態(tài)及表觀修飾對基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控的可能影響,從表觀遺傳角度探討孵化溫度影響禽類胚胎發(fā)育及成年表型的可能機(jī)制。主要研究結(jié)果如下：(1)克隆獲得鴨DNMT1.DNMT3A,DNAMT3B,MBD3和MBD5基因cDNA部分序列,長度分別為507、481、443、387和525bp,與Genebank中原雞的相應(yīng)序列同源性達(dá)到91%～99%。(2)鴨胚腿肌、胸肌、心臟、肝臟和脾臟中均檢測到DNMMT1.DNMT3A,DNMMT3B,MBD3和MBD5基因不同程度的表達(dá),結(jié)果表明DNA甲基化參與組織形成,尤其在胸肌中高度表達(dá),說明DNA甲基化可能在胸肌形成過程中具有特殊的意義。此外,檢測到甲基化相關(guān)基因在脾臟中表達(dá)較高,表明DNA甲基化水平在細(xì)胞分裂旺盛的組織中相對較高。(3)孵化前期溫度處理對DNMT1,DNMT3A和DNMT3B基因表達(dá)有顯著影響(P0.05),說明DNA甲基化水平在胚胎發(fā)育前期呈明顯變化趨勢；在整個孵化期內(nèi),MBD3和MBD5在處理組和對照組中基因的表達(dá)模式一致,表明孵化溫度對甲基結(jié)合蛋白基因家族成員轉(zhuǎn)錄水平的影響一致。(4)孵化前期的溫度處理可顯著上調(diào)骨骼肌發(fā)育相關(guān)基因Pax3,Pax7,sixl, Akirin2,MyoD,MyoG,Mfy5,MCK和TNNCl的表達(dá)(P0.05),而隨著孵化時間的延長,溫度處理則顯著抑制Pax7,Six1,Akirin2,MyoD,MyoG和TNNCl基因的表達(dá)(P0.05),說明孵化溫度對骨骼肌發(fā)育相關(guān)基因表達(dá)調(diào)控的影響具有明顯階段性。(5)孵化前期和中期,處理組內(nèi)TNNCl基因啟動子CpG島甲基化水平顯著低于對照組(P0.05)；孵化前期,處理組內(nèi)Akirin2基因啟動子CpG島甲基化水平顯著低于對照組(P0.05),說明孵化前期溫度升高1℃,對基因啟動子CpG島的整體甲基化水平有抑制,但對基因表達(dá)水平有促進(jìn)作用。
【關(guān)鍵詞】：鴨 孵化溫度 DNA甲基化 骨骼肌發(fā)育 胚胎階段
【學(xué)位授予單位】：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：S834
【目錄】：

• 摘要5-7
• ABSTRACT7-9
• 常用詞語英文縮寫9-12
• 前言12
• 1 文獻(xiàn)綜述12-21
• 1.1 表觀遺傳機(jī)制12-15
• 1.1.1 DNA甲基化12-14
• 1.1.2 組蛋白修飾14
• 1.1.3 非編碼RNA調(diào)控14
• 1.1.4 染色質(zhì)重塑14-15
• 1.1.5 X染色體失活15
• 1.2 各類環(huán)境因素的表觀遺傳效應(yīng)15-18
• 1.2.1 溫度的表觀遺傳效應(yīng)15-16
• 1.2.2 營養(yǎng)供給的表觀遺傳效應(yīng)16-17
• 1.2.3 重金屬的表觀遺傳效應(yīng)17-18
• 1.2.4 其它環(huán)境因素的表觀遺傳效應(yīng)18
• 1.3 孵化溫度對禽類胚胎發(fā)育的影響研究18-20
• 1.3.1 對禽類基因組DNA甲基化的影響18-19
• 1.3.2 對禽類胚胎骨骼肌發(fā)育的影響19-20
• 1.3.3 對禽類胚胎其它方面的影響20
• 1.3.4 對禽類胚胎發(fā)育影響的可能機(jī)制20
• 1.4 本研究的目的意義20-21
• 2 材料與方法21-38
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料21-23
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)樣品21-22
• 2.1.2 藥品和試劑22-23
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法23-38
• 2.2.1 引物設(shè)計及合成23-26
• 2.2.2 RNA的提取及質(zhì)檢26
• 2.2.3 反轉(zhuǎn)錄26-27
• 2.2.4 DNMTS和MBD3&5克隆及測序27-30
• 2.2.5 鴨Akirin2和TNNC1基因啟動子擴(kuò)增30-32
• 2.2.6 qRT-PCR32-34
• 2.2.7 ELISA34
• 2.2.8 Sequenom MassArray系統(tǒng)甲基化檢測34-38
• 2.3 數(shù)據(jù)分析38
• 3 結(jié)果與分析38-50
• 3.1 鴨DNMTS和MBD3&5編碼區(qū)部分序列克隆與分析38-41
• 3.1.1 RNA提取結(jié)果38-39
• 3.1.2 PCR擴(kuò)增結(jié)果與序列同源性分析39-40
• 3.1.3 熒光定量引物RT-PCR及鑒定40-41
• 3.2 孵化溫度對DNA甲基化相關(guān)基因表達(dá)及酶活的影響41-46
• 3.2.1 孵化溫度對DNMTS和MBD3&5基因表達(dá)的影響41-43
• 3.2.2 孵化溫度對DNMTS酶活的影響43-46
• 3.3 孵化溫度對骨骼肌發(fā)育相關(guān)基因表達(dá)及啟動子甲基化的影響46-50
• 3.3.1 孵化溫度對骨骼肌發(fā)育相關(guān)基因表達(dá)的影響46-47
• 3.3.2 鴨TNNC1和Akirin2基因啟動子擴(kuò)增47-48
• 3.3.3 鴨TNNC1和Akirin2基因啟動子轉(zhuǎn)錄結(jié)合位點(diǎn)分析48
• 3.3.4 鴨TNNC1和Akirin2基因啟動子甲基化測序48-50
• 4 討論50-54
• 4.1 孵化溫度對鴨胚基因組甲基化影響存在組織差異性50-51
• 4.2 孵化溫度對鴨胚基因組甲基化影響存在組織差異性51-53
• 4.3 孵化溫度影響骨骼肌發(fā)育相關(guān)基因表達(dá)及可能的調(diào)控機(jī)制53-54
• 5 結(jié)論54-56
• 參考文獻(xiàn)56-62
• 致謝62-63
• 攻讀碩士研究生期間參與的科研項目和發(fā)表的論文63

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