番茄作為重要的蔬菜作物,易受到環(huán)境(低溫、光照、土壤pH值以及土壤本身鉀含量低)及本身發(fā)育時(shí)期(發(fā)育中后期)等影響,在生長(zhǎng)發(fā)育過程中出現(xiàn)缺鉀癥狀而影響番茄的品質(zhì)與產(chǎn)量。課題組前期通過小RNA的測(cè)序發(fā)現(xiàn)在耐低鉀型番茄品系JZ34和鉀敏感型品系JZ18中miR319b表達(dá)水平呈現(xiàn)極差異顯著。miRNA作為生物體內(nèi)源性非編碼的小分子RNA,通過特異識(shí)別靶mRNA對(duì)其發(fā)生切割或抑制,進(jìn)而在轉(zhuǎn)錄水平上負(fù)調(diào)控基因表達(dá)。已有研究表明miR319可以靶向TCP轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控植物的生長(zhǎng)發(fā)育。本課題組經(jīng)前期轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)研究發(fā)現(xiàn)miR319在植物響應(yīng)低鉀脅迫�；诖�,本研究一方面以RLM-5’RACE鑒定SlmiR319b靶基因斷裂位點(diǎn),進(jìn)而使用酵母單雜交及EMSA方法確立SlmiR319b調(diào)控的靶基因SlTCP10介導(dǎo)的響應(yīng)低鉀脅迫的分子路徑;另一方面構(gòu)建miR319b過表達(dá)番茄轉(zhuǎn)基因材料,測(cè)定了低鉀條件下轉(zhuǎn)基因株系根系形態(tài)、鉀離子含量、ROS含量及茉莉酸含量。以上研究結(jié)果為深入解析miRNA應(yīng)答低鉀脅迫的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑及番茄的抗逆栽培和品質(zhì)提升提供理論指導(dǎo)。主要研究結(jié)果如下:1.明確了植物中miR319家族成...

【文章頁數(shù)】：57 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 前言
    1.1 miRNA的發(fā)現(xiàn)和功能
        1.1.1 miRNA的發(fā)現(xiàn)
        1.1.2 miRNA的產(chǎn)生及作用機(jī)制
        1.1.3 miRNA及靶基因的研究方法
    1.2 植物miR319 的簡(jiǎn)介
        1.2.1 植物miR319 的發(fā)現(xiàn)
        1.2.2 miR319 參與調(diào)控葉片發(fā)育
        1.2.3 miR319 參與花發(fā)育調(diào)控
        1.2.4 miR319 響應(yīng)非生物脅迫的研究
        1.2.5 miR319 響應(yīng)生物脅迫的研究
    1.3 植物響應(yīng)低鉀脅迫的研究進(jìn)展
        1.3.1 植物中鉀的含量和功能
        1.3.2 低鉀脅迫對(duì)植物生長(zhǎng)發(fā)育的影響
        1.3.3 植物對(duì)低鉀脅迫的響應(yīng)
    1.4 本研究的目的與意義
2 材料與方法
    2.1 試驗(yàn)材料
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 載體與菌株
        2.1.3 試劑
        2.1.4 植物組織培養(yǎng)培養(yǎng)基
        2.1.5 營(yíng)養(yǎng)液配方
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 啟動(dòng)子分析
        2.2.2 DNA提取
        2.2.3 質(zhì)粒提取
        2.2.4 總RNA提取及mRNA純化
        2.2.5 c DNA第一鏈的合成
        2.2.6 RLM-5’RACE擴(kuò)增
        2.2.7 c DNA合成
        2.2.8 miRNA莖環(huán)法反轉(zhuǎn)錄
        2.2.9 實(shí)時(shí)定量PCR分析
        2.2.10 載體構(gòu)建
        2.2.11 酵母感受態(tài)制備及轉(zhuǎn)化
        2.2.12 轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌
        2.2.13 凝膠遷移試驗(yàn)(EMSA)
        2.2.14 遺傳轉(zhuǎn)化(葉盤法)
        2.2.15 番茄低鉀脅迫處理
        2.2.16 根系觀察和分析
        2.2.17 鉀離子含量測(cè)定
        2.2.18 ROS含量測(cè)定
        2.2.19 茉莉酸含量測(cè)定
3 結(jié)果與分析
    3.1 植物miR319 家族成員分布與進(jìn)化分析
    3.2 SlmiRNA319b靶基因篩選及作用位點(diǎn)的鑒定
        3.2.1 SlmiRNA319b靶基因篩選
        3.2.2 RLM-5'RACE擴(kuò)增5'末端產(chǎn)物分析
        3.2.3 SlmiR319b切割位點(diǎn)序列分析
    3.3 TCP10與JA2 啟動(dòng)子結(jié)合實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證
        3.3.1 酵母單雜檢測(cè)TCP10與JA2 啟動(dòng)子的結(jié)合
        3.3.2 凝膠遷移試驗(yàn)檢測(cè)TCP10與JA2 啟動(dòng)子的結(jié)合
    3.4 過表達(dá)SlmiRNA319b轉(zhuǎn)基因植株的獲得
        3.4.1 構(gòu)建過表達(dá)miR319b表達(dá)載體
        3.4.2 過表達(dá)miR319b番茄遺傳轉(zhuǎn)化體系的建立
        3.4.3 過表達(dá)miR319b基因番茄轉(zhuǎn)基因陽性植株的鑒定
        3.4.4 過表達(dá)miR319b番茄轉(zhuǎn)基因陽性植株表達(dá)量分析
    3.5 過表達(dá)miR319b降低番茄的耐低鉀性
        3.5.1 過表達(dá)miR319b番茄轉(zhuǎn)基因株系低鉀脅迫處理根系表型觀察
        3.5.2 過表達(dá)miR319b番茄轉(zhuǎn)基因株系低鉀脅迫處理鉀離子濃度分析
        3.5.3 過表達(dá)miR319b番茄轉(zhuǎn)基因株系低鉀脅迫ROS含量分析
        3.5.4 過表達(dá)miR319b番茄轉(zhuǎn)基因株系T1 代茉莉酸含量分析
4 討論
5 結(jié)論與展望
    5.1 結(jié)論
    5.2 展望
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝



本文編號(hào)：3806592