發(fā)布時(shí)間：2023-04-22 08:44

　　果實(shí)香氣對(duì)蘋果的品質(zhì)性狀的影響是具有決定性的,果實(shí)良好的嗅感能夠增加其商品價(jià)值,從而獲得更大的商業(yè)價(jià)值。果實(shí)香氣的合成過程相對(duì)復(fù)雜,其中研究較為廣泛的是的脂氧合酶途徑,脂氧合酶基因作為該途徑的關(guān)鍵基因引起學(xué)者的重視,但具體的作用機(jī)理還不清楚。乙烯對(duì)果實(shí)的成熟進(jìn)程具促進(jìn)作用,被稱為果實(shí)成熟激素。在多數(shù)植物體內(nèi),乙烯的響應(yīng)因子ERFs位于乙烯響應(yīng)途徑的下游,將乙烯信號(hào)傳遞至下游基因,完成乙烯參與果實(shí)成熟的轉(zhuǎn)導(dǎo)。不僅如此,乙烯通過PpERF1,PpERF2等調(diào)控LOX基因的表達(dá)來參與果實(shí)香氣物質(zhì)合成過程,但蘋果中ERF家族具體參與香氣合成的作用機(jī)理還不明確。另外,關(guān)于MADS蛋白的研究從未停止,尤其是在調(diào)控乙烯信號(hào)的轉(zhuǎn)導(dǎo)、參與果實(shí)成熟以及香氣合成等方面。因此,為深入探究上述基因家族的功能,本研究以‘長富2’作試材,通過定量進(jìn)行基因篩選,克隆MdLOX1a、MdMADS24及MdERF1B基因,對(duì)基因功能展開研究,結(jié)果如下:1.在蘋果盛花105d后每15d左右取樣,測定香氣物質(zhì)的相對(duì)含量及乙烯釋放速率;通過實(shí)時(shí)的熒光定量對(duì)LOX途徑的結(jié)構(gòu)基因,MADS及ERF家族基因表達(dá)篩選。結(jié)果表明,隨著果...

【文章頁數(shù)】：72 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
符號(hào)說明
中文摘要
英文摘要
1 前言
    1.1 國內(nèi)蘋果產(chǎn)業(yè)發(fā)展現(xiàn)狀及趨勢
        1.1.1 國內(nèi)蘋果產(chǎn)業(yè)發(fā)展現(xiàn)狀
        1.1.2 國內(nèi)蘋果產(chǎn)業(yè)的發(fā)展趨勢
    1.2 果實(shí)香氣物質(zhì)研究進(jìn)展
        1.2.1 果實(shí)香氣合成途徑
        1.2.2 香氣合成的脂氧合酶途徑關(guān)鍵基因
    1.3 MADS-box家族研究進(jìn)展
        1.3.1 MADS-box家族的結(jié)構(gòu)與分類
        1.3.2 MADS-box蛋白功能的研究
    1.4 ERF家族研究進(jìn)展
        1.4.1 ERF基因結(jié)構(gòu)與分類
        1.4.2 ERF基因功能的研究
    1.5 研究的內(nèi)容與意義
        1.5.1 研究內(nèi)容
        1.5.2 研究的意義
2 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 菌株
        2.1.3 載體
        2.1.4 酶類、抗體、抗生素等試劑與藥品
        2.1.5 引物
        2.1.6 培養(yǎng)基配方
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 基因組DNA的提取
        2.2.2 總RNA的提取
        2.2.3 反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)
        2.2.4 熒光定量qRT-PCR
        2.2.5 基因的克隆
        2.2.6 PCR產(chǎn)物膠回收
        2.2.7 連接中間載體
        2.2.8 大腸桿菌感受態(tài)(DH5α)的轉(zhuǎn)化
        2.2.9 菌落PCR驗(yàn)證與測序
        2.2.10 質(zhì)粒的提取
        2.2.11 載體和質(zhì)粒雙酶切
        2.2.12 連接表達(dá)載體載體
        2.2.13 表達(dá)載體構(gòu)建
        2.2.14 農(nóng)桿菌感受態(tài)的轉(zhuǎn)化
        2.2.15 蘋果‘王林’愈傷組織的轉(zhuǎn)基因?qū)嶒?yàn)
        2.2.16 酵母雙/單雜實(shí)驗(yàn)
        2.2.17 雙分子熒光素互補(bǔ)實(shí)驗(yàn)
        2.2.18 蛋白實(shí)驗(yàn)涉及方法
        2.2.19 染色質(zhì)免疫共沉淀(ChIP)實(shí)驗(yàn)
        2.2.20 目的質(zhì)粒大提
        2.2.21 LUC實(shí)驗(yàn)
        2.2.22 果實(shí)香氣揮發(fā)性成分相對(duì)含量測定
        2.2.23 果實(shí)乙烯釋放速率測定
3 結(jié)果與分析
    3.1 ERF、MADS轉(zhuǎn)錄因子及LOX基因在蘋果成熟過程的表達(dá)差異及篩選
        3.1.1 富士蘋果乙烯釋放速率及果實(shí)香氣測定
        3.1.2 相關(guān)基因的篩選
    3.2 MdLOX1a與 MdMADS24 基因的進(jìn)化樹及生物信息學(xué)等相關(guān)分析
        3.2.1 MdLOX1a進(jìn)化樹及生物信息學(xué)分析
        3.2.2 MdMADS24 進(jìn)化樹及生物信息學(xué)分析
    3.3 MdLOX1a基因的亞細(xì)胞定位及功能驗(yàn)證
        3.3.1 MdLOX1a基因的亞細(xì)胞定位
        3.3.2 MdLOX1a基因的功能驗(yàn)證
        3.3.3 MdLOX1a啟動(dòng)子克隆及元件分析
    3.4 MdMADS24 基因克隆及功能的鑒定
        3.4.1 MdMADS24 促進(jìn)香氣物質(zhì)合成
        3.4.2 MdMADS24 可與下游香氣物質(zhì)合成結(jié)構(gòu)基因啟動(dòng)子結(jié)合
    3.5 MdERF1B基因的克隆和功能鑒定及挖掘
        3.5.1 MdERF1B共轉(zhuǎn)OEMADS24 的試材
        3.5.2 MdERF1B與 MdMADS24 互作形成異源蛋白復(fù)合物促進(jìn)香氣物質(zhì)合成
        3.5.3 LUC實(shí)驗(yàn)檢測MdERF1B與MdMADS24 復(fù)合物對(duì)下游基因啟動(dòng)子影響
4 討論
    4.1 MdLOX1a基因促進(jìn)香氣揮發(fā)性物質(zhì)的合成
    4.2 MdMADS24 促進(jìn)MdLOX1a轉(zhuǎn)錄調(diào)控香氣物質(zhì)的合成
    4.3 MdERF1B與 MdMADS24 蛋白間互作聯(lián)合促進(jìn)香氣物質(zhì)的合成
5 結(jié)論
6 參考文獻(xiàn)
7 附錄
8 致謝
9 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文



本文編號(hào)：3797307