本文關(guān)鍵詞：滇補(bǔ)、旱冬瓜葉片提取物對(duì)云南切梢小蠹卵黃原蛋白及其受體基因轉(zhuǎn)錄的影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：云南切梢小蠹Tomicus yunnanensis是為害多種松樹(shù)的次期性蛀干害蟲(chóng),其寄主中又以云南松受害最為嚴(yán)重。經(jīng)過(guò)前期的研究發(fā)現(xiàn)滇樸、旱冬瓜葉片提取物能夠干擾云南切梢小蠹產(chǎn)卵。因此,本研究選擇了與昆蟲(chóng)產(chǎn)卵密切相關(guān)的卵黃原蛋白及其受體基因進(jìn)行研究,并且探索滇樸、旱冬瓜葉片提取物對(duì)云南切梢小蠹卵黃原蛋白及其受體基因在轉(zhuǎn)錄水平上的影響,這有利于進(jìn)一步闡明非寄主氣味影響云南切梢小蠹產(chǎn)卵的分子機(jī)制。為了能更方便快速獲得云南切梢小蠹的卵黃原蛋白及其受體基因序列,對(duì)云南切梢小蠹進(jìn)行了轉(zhuǎn)錄組測(cè)序。測(cè)序共獲得了28837383條clean reads,經(jīng)拼接得到了47408條unigenes。這些unigenes有17023條在Nr數(shù)據(jù)庫(kù)里得到注釋(E-value10-5)�；跇�(gòu)建的轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)庫(kù),共鑒定獲得卵黃原蛋白及其受體基因序列各4條。依據(jù)轉(zhuǎn)錄組鑒定獲得的片段序列以及卵黃原蛋白及其受體基因的保守結(jié)構(gòu)序列設(shè)計(jì)引物,克隆獲得了云南切梢小蠹卵黃原蛋白及其受體基因片段,長(zhǎng)度分別為570 bp和162 bp。多序列比對(duì)分析發(fā)現(xiàn),云南切梢小蠹卵黃原蛋白基因與黑山大小蠹Dendroctonus ponderosae、白松脂象甲Pissodes strobi及棉鈴象甲蟲(chóng)Anthonomus grandis卵黃原蛋白基因在氨基酸水平上相似性分別高達(dá)76%、61%、60%。云南切梢小蠹卵黃原蛋白受體基因與黑山大小蠹、赤擬谷盜Tribolium castaneum卵黃原蛋白受體基因在氨基酸水平上相似性分別為88%和47%。卵黃原蛋白和卵黃原蛋白受體系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)結(jié)果均顯示云南切梢小蠹與鞘翅目昆蟲(chóng)聚在一起。實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)果顯示,云南切梢小蠹卵黃原蛋白基因在雌蟲(chóng)的頭、胸、翅、卵巢和其余殘?bào)w中均有表達(dá),而卵黃原蛋白受體基因則在雌蟲(chóng)卵巢組織特異性表達(dá)。卵黃原蛋白和卵黃原蛋白受體在不同發(fā)育時(shí)期的表達(dá)具有一致性,均在蛹期及成熟的雌蟲(chóng)中轉(zhuǎn)錄水平較高,在其他時(shí)期的轉(zhuǎn)錄水平相對(duì)較低或極其微弱。滇樸、旱冬瓜葉片提取物干擾實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),滇樸葉片提取物干擾云南切梢小蠹后其卵黃原蛋白基因的轉(zhuǎn)錄水平與對(duì)照組相比均下降;而卵黃原蛋白受體基因的轉(zhuǎn)錄水平與對(duì)照相比沒(méi)有明顯的變化規(guī)律。旱冬瓜葉提取物干擾20 d和40 d后,云南切梢小蠹卵黃原蛋白和卵黃原蛋白受體基因的轉(zhuǎn)錄水平與對(duì)照相比均有所下降,但是,干擾60 d后卵黃原蛋白和卵黃原蛋白受體基因的轉(zhuǎn)錄水平卻都高于對(duì)照組,尤其是卵黃原蛋白基因。綜上所述,本文為進(jìn)一步闡明非寄主氣味影響云南切梢小蠹產(chǎn)卵的分子機(jī)制提供了基礎(chǔ)資料,有利于找到云南切梢小蠹更加有效的防治方法。
【關(guān)鍵詞】：云南切梢小蠹 非寄主氣味 卵黃原蛋白及其受體 轉(zhuǎn)錄組 實(shí)時(shí)熒光定量PCR
【學(xué)位授予單位】：西南林業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：S763.38
【目錄】：

• 摘要5-6
• ABSTRACT6-10
• 1 前言10-22
• 1.1 云南切梢小蠹研究概況10
• 1.2 昆蟲(chóng)卵黃原蛋白及其受體的研究進(jìn)展10-17
• 1.2.1 卵黃原蛋白及其基因10-14
• 1.2.2 卵黃原蛋白受體及其基因14-17
• 1.3 非寄主氣味對(duì)昆蟲(chóng)的影響17-20
• 1.3.1 植物揮發(fā)性物質(zhì)對(duì)昆蟲(chóng)行為的影響17-20
• 1.4 研究的目的和意義20-22
• 2 材料與方法22-30
• 2.1 試驗(yàn)材料22-23
• 2.1.1 昆蟲(chóng)樣品采集22
• 2.1.2 主要的儀器設(shè)備22-23
• 2.2 云南切梢小蠹轉(zhuǎn)錄組分析23-26
• 2.2.1 總RNA的提取和質(zhì)量檢測(cè)23
• 2.2.2 cDNA文庫(kù)的構(gòu)建和轉(zhuǎn)錄組測(cè)序流程23-24
• 2.2.3 轉(zhuǎn)錄本拼接24-25
• 2.2.4 基因功能的注釋25-26
• 2.3 云南切梢小蠹卵黃原蛋白及其受體基因片段的克隆和表達(dá)模式分析26-28
• 2.3.1 總RNA提取26
• 2.3.2 3'-RACE cDNA合成26
• 2.3.3 卵黃原蛋白基因片段的克隆26-27
• 2.3.4 卵黃原蛋白受體基因片段的克隆27
• 2.3.5 序列分析27
• 2.3.6 熒光定量PCR27-28
• 2.4 滇樸、旱冬瓜葉片提取物對(duì)云南切梢小蠹卵黃原蛋白及其受體基因轉(zhuǎn)錄的影響28-30
• 2.4.1 滇樸、旱冬瓜植物葉片的采集及處理28-29
• 2.4.2 滇樸、旱冬瓜葉片提取物對(duì)云南切梢小蠹干擾實(shí)驗(yàn)29
• 2.4.3 熒光定量PCR29-30
• 3 結(jié)果與分析30-52
• 3.1 云南切梢小蠹轉(zhuǎn)錄組分析30-39
• 3.1.1 總RNA的檢測(cè)30
• 3.1.2 原始數(shù)據(jù)以及序列拼接30-32
• 3.1.3 轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)分析32-39
• 3.1.3.1 基因功能注釋32-35
• 3.1.3.2 GO分類(lèi)35-37
• 3.1.3.3 KOG分類(lèi)37-38
• 3.1.3.4 KEGG分類(lèi)38-39
• 3.2 云南切梢小蠹卵黃原蛋白及其受體基因片段的克隆及表達(dá)模式分析39-49
• 3.2.1 卵黃原蛋白基因片段的克隆及序列分析39-43
• 3.2.2 卵黃原蛋白受體基因片段的克隆及序列分析43-46
• 3.2.3 卵黃原蛋白及其受體基因在不同組織及各發(fā)育階段的表達(dá)46-49
• 3.3 滇樸、旱冬瓜葉片提取物對(duì)云南切梢小蠹卵黃原蛋白及其受體基因轉(zhuǎn)錄的影響49-52
• 4 結(jié)論及討論52-56
• 4.1 云南切梢小蠹轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)的分析52
• 4.2 云南切梢小蠹卵黃原蛋白基因片段的克隆及序列分析52-54
• 4.3 滇樸、旱冬瓜葉片提取物對(duì)云南切梢小蠹卵黃原蛋白及受體基因轉(zhuǎn)錄的影響54-56
• 參考文獻(xiàn)56-66
• 個(gè)人簡(jiǎn)介66-67
• 導(dǎo)師簡(jiǎn)介67-68
• 致謝68

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1 邴欣,汝少?lài)?guó),Isoda Hiroko,姜明,王蔚,王詩(shī)紅;17β-雌二醇對(duì)雄性金魚(yú)卵黃原蛋白的誘導(dǎo)作用[J];水產(chǎn)學(xué)報(bào);2004年03期

2 李繼蓮;;蜜蜂卵黃原蛋白[J];中國(guó)蜂業(yè);2009年08期

3 陸明賢,滕秀銀,楊長(zhǎng)松,張義成,徐啟茂;柞蠶卵黃原蛋白的合成與轉(zhuǎn)運(yùn)[J];蠶業(yè)科學(xué);1990年04期

4 趙紅霞;張學(xué)鋒;林琦;羅岳雄;;蜜蜂卵黃原蛋白的研究進(jìn)展[J];廣東農(nóng)業(yè)科學(xué);2010年01期

5 嚴(yán)盈;彭露;萬(wàn)方浩;;昆蟲(chóng)卵黃原蛋白功能多效性:以蜜蜂為例[J];昆蟲(chóng)學(xué)報(bào);2010年03期

6 王磊;劉朝良;;絹絲昆蟲(chóng)卵黃原蛋白一級(jí)結(jié)構(gòu)的特性分析[J];蠶業(yè)科學(xué);2005年04期

7 龔和,翟啟慧,魏定義,張建中;七星瓢蟲(chóng)的卵黃發(fā)生:卵黃原蛋白的發(fā)生和取食代飼料的影響[J];昆蟲(chóng)學(xué)報(bào);1980年03期

8 翟啟慧,關(guān)雪辰,陳娥英,張建中;七星瓢蟲(chóng)的卵黃發(fā)生:脂肪體與卵巢中卵黃原蛋白的合成與分泌[J];昆蟲(chóng)學(xué)報(bào);1985年04期

9 張建中,翟啟慧;七星瓢蟲(chóng)的卵黃發(fā)生:保幼激素類(lèi)似物對(duì)卵黃原蛋白合成的調(diào)節(jié)[J];昆蟲(chóng)學(xué)報(bào);1985年02期

10 周榮瓊;馬光旭;周琪;周作勇;王芝英;羅洪林;夏慶友;;犬弓首蛔蟲(chóng)卵黃原蛋白基因的克隆及表達(dá)分析[J];中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào);2012年01期

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1 李繼蓮;黃家興;安建東;羅術(shù)東;吳杰;;紅光熊蜂卵黃原蛋白基因的cDNA全長(zhǎng)序列克隆和表達(dá)分析[A];國(guó)家蜂產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系蜜蜂育種與授粉功能研究室學(xué)術(shù)研討會(huì)暨中國(guó)養(yǎng)蜂學(xué)會(huì)蜜蜂育種專(zhuān)業(yè)委員會(huì)第四屆第一次會(huì)議暨中國(guó)養(yǎng)蜂學(xué)會(huì)蜜源與蜜蜂授粉專(zhuān)業(yè)委員會(huì)第五屆第一次會(huì)議論文匯編[C];2012年

2 劉朝良;尹志亮;邵引剛;李鋒;孫輝;錢(qián)岑;;幾種絹絲昆蟲(chóng)卵黃原蛋白cDNA序列的比較分析[A];現(xiàn)代農(nóng)業(yè)理論與實(shí)踐——安徽現(xiàn)代農(nóng)業(yè)博士科技論壇論文集[C];2007年

3 劉朝良;董勝?gòu)?王磊;朱保建;尹志亮;;昆蟲(chóng)卵黃原蛋白(Vg)分子生物學(xué)研究進(jìn)展[A];食品安全的理論與實(shí)踐——安徽食品安全博士科技論壇論文集[C];2005年

4 袁紅霞;徐旭;司馬楊虎;徐世清;;內(nèi)分泌干擾物4-壬基酚通過(guò)干擾卵黃原蛋白合成影響家蠶生殖發(fā)育(英文)[A];第十屆家（柞）蠶遺傳育種及良種繁育學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2013年

5 劉朝良;h鍍稚鋪

本文編號(hào)：378060