本文關(guān)鍵詞：滇補、旱冬瓜葉片提取物對云南切梢小蠹卵黃原蛋白及其受體基因轉(zhuǎn)錄的影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：云南切梢小蠹Tomicus yunnanensis是為害多種松樹的次期性蛀干害蟲,其寄主中又以云南松受害最為嚴(yán)重。經(jīng)過前期的研究發(fā)現(xiàn)滇樸、旱冬瓜葉片提取物能夠干擾云南切梢小蠹產(chǎn)卵。因此,本研究選擇了與昆蟲產(chǎn)卵密切相關(guān)的卵黃原蛋白及其受體基因進行研究,并且探索滇樸、旱冬瓜葉片提取物對云南切梢小蠹卵黃原蛋白及其受體基因在轉(zhuǎn)錄水平上的影響,這有利于進一步闡明非寄主氣味影響云南切梢小蠹產(chǎn)卵的分子機制。為了能更方便快速獲得云南切梢小蠹的卵黃原蛋白及其受體基因序列,對云南切梢小蠹進行了轉(zhuǎn)錄組測序。測序共獲得了28837383條clean reads,經(jīng)拼接得到了47408條unigenes。這些unigenes有17023條在Nr數(shù)據(jù)庫里得到注釋(E-value10-5)�；跇�(gòu)建的轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)庫,共鑒定獲得卵黃原蛋白及其受體基因序列各4條。依據(jù)轉(zhuǎn)錄組鑒定獲得的片段序列以及卵黃原蛋白及其受體基因的保守結(jié)構(gòu)序列設(shè)計引物,克隆獲得了云南切梢小蠹卵黃原蛋白及其受體基因片段,長度分別為570 bp和162 bp。多序列比對分析發(fā)現(xiàn),云南切梢小蠹卵黃原蛋白基因與黑山大小蠹Dendroctonus ponderosae、白松脂象甲Pissodes strobi及棉鈴象甲蟲Anthonomus grandis卵黃原蛋白基因在氨基酸水平上相似性分別高達76%、61%、60%。云南切梢小蠹卵黃原蛋白受體基因與黑山大小蠹、赤擬谷盜Tribolium castaneum卵黃原蛋白受體基因在氨基酸水平上相似性分別為88%和47%。卵黃原蛋白和卵黃原蛋白受體系統(tǒng)發(fā)育樹結(jié)果均顯示云南切梢小蠹與鞘翅目昆蟲聚在一起。實時熒光定量PCR結(jié)果顯示,云南切梢小蠹卵黃原蛋白基因在雌蟲的頭、胸、翅、卵巢和其余殘體中均有表達,而卵黃原蛋白受體基因則在雌蟲卵巢組織特異性表達。卵黃原蛋白和卵黃原蛋白受體在不同發(fā)育時期的表達具有一致性,均在蛹期及成熟的雌蟲中轉(zhuǎn)錄水平較高,在其他時期的轉(zhuǎn)錄水平相對較低或極其微弱。滇樸、旱冬瓜葉片提取物干擾實驗發(fā)現(xiàn),滇樸葉片提取物干擾云南切梢小蠹后其卵黃原蛋白基因的轉(zhuǎn)錄水平與對照組相比均下降;而卵黃原蛋白受體基因的轉(zhuǎn)錄水平與對照相比沒有明顯的變化規(guī)律。旱冬瓜葉提取物干擾20 d和40 d后,云南切梢小蠹卵黃原蛋白和卵黃原蛋白受體基因的轉(zhuǎn)錄水平與對照相比均有所下降,但是,干擾60 d后卵黃原蛋白和卵黃原蛋白受體基因的轉(zhuǎn)錄水平卻都高于對照組,尤其是卵黃原蛋白基因。綜上所述,本文為進一步闡明非寄主氣味影響云南切梢小蠹產(chǎn)卵的分子機制提供了基礎(chǔ)資料,有利于找到云南切梢小蠹更加有效的防治方法。
【關(guān)鍵詞】：云南切梢小蠹 非寄主氣味 卵黃原蛋白及其受體 轉(zhuǎn)錄組 實時熒光定量PCR
【學(xué)位授予單位】：西南林業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：S763.38
【目錄】：

• 摘要5-6
• ABSTRACT6-10
• 1 前言10-22
• 1.1 云南切梢小蠹研究概況10
• 1.2 昆蟲卵黃原蛋白及其受體的研究進展10-17
• 1.2.1 卵黃原蛋白及其基因10-14
• 1.2.2 卵黃原蛋白受體及其基因14-17
• 1.3 非寄主氣味對昆蟲的影響17-20
• 1.3.1 植物揮發(fā)性物質(zhì)對昆蟲行為的影響17-20
• 1.4 研究的目的和意義20-22
• 2 材料與方法22-30
• 2.1 試驗材料22-23
• 2.1.1 昆蟲樣品采集22
• 2.1.2 主要的儀器設(shè)備22-23
• 2.2 云南切梢小蠹轉(zhuǎn)錄組分析23-26
• 2.2.1 總RNA的提取和質(zhì)量檢測23
• 2.2.2 cDNA文庫的構(gòu)建和轉(zhuǎn)錄組測序流程23-24
• 2.2.3 轉(zhuǎn)錄本拼接24-25
• 2.2.4 基因功能的注釋25-26
• 2.3 云南切梢小蠹卵黃原蛋白及其受體基因片段的克隆和表達模式分析26-28
• 2.3.1 總RNA提取26
• 2.3.2 3'-RACE cDNA合成26
• 2.3.3 卵黃原蛋白基因片段的克隆26-27
• 2.3.4 卵黃原蛋白受體基因片段的克隆27
• 2.3.5 序列分析27
• 2.3.6 熒光定量PCR27-28
• 2.4 滇樸、旱冬瓜葉片提取物對云南切梢小蠹卵黃原蛋白及其受體基因轉(zhuǎn)錄的影響28-30
• 2.4.1 滇樸、旱冬瓜植物葉片的采集及處理28-29
• 2.4.2 滇樸、旱冬瓜葉片提取物對云南切梢小蠹干擾實驗29
• 2.4.3 熒光定量PCR29-30
• 3 結(jié)果與分析30-52
• 3.1 云南切梢小蠹轉(zhuǎn)錄組分析30-39
• 3.1.1 總RNA的檢測30
• 3.1.2 原始數(shù)據(jù)以及序列拼接30-32
• 3.1.3 轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)分析32-39
• 3.1.3.1 基因功能注釋32-35
• 3.1.3.2 GO分類35-37
• 3.1.3.3 KOG分類37-38
• 3.1.3.4 KEGG分類38-39
• 3.2 云南切梢小蠹卵黃原蛋白及其受體基因片段的克隆及表達模式分析39-49
• 3.2.1 卵黃原蛋白基因片段的克隆及序列分析39-43
• 3.2.2 卵黃原蛋白受體基因片段的克隆及序列分析43-46
• 3.2.3 卵黃原蛋白及其受體基因在不同組織及各發(fā)育階段的表達46-49
• 3.3 滇樸、旱冬瓜葉片提取物對云南切梢小蠹卵黃原蛋白及其受體基因轉(zhuǎn)錄的影響49-52
• 4 結(jié)論及討論52-56
• 4.1 云南切梢小蠹轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)的分析52
• 4.2 云南切梢小蠹卵黃原蛋白基因片段的克隆及序列分析52-54
• 4.3 滇樸、旱冬瓜葉片提取物對云南切梢小蠹卵黃原蛋白及受體基因轉(zhuǎn)錄的影響54-56
• 參考文獻56-66
• 個人簡介66-67
• 導(dǎo)師簡介67-68
• 致謝68

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本文編號：378060