肝片吸蟲病是由肝片吸蟲(Fascioloa hepatica,F.hepatica)寄生于人和家畜肝臟、膽管,引起肝炎、膽管炎以及全身性營養(yǎng)障礙的一種新興人畜共患寄生蟲病。該病嚴(yán)重影響了全球畜牧業(yè)的發(fā)展,也造成了極其嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問題,吸引了全世界的廣泛關(guān)注。為了豐富和拓展肝片吸蟲病的診斷靶點,突破肝片吸蟲病原學(xué)診斷方法的局限性,研究更加經(jīng)濟、快速、特異、敏感的肝片吸蟲感染病的診斷方法,本研究通過肝片吸蟲噬菌體展示cDNA文庫的篩選、肝片吸蟲特異性抗原分子的生物信息學(xué)分析、相應(yīng)抗原基因的克隆、重組質(zhì)粒的構(gòu)建以及重組蛋白的誘導(dǎo)表達與Western Blot鑒定分析等研究方法和技術(shù)對肝片吸蟲病的診斷候選抗原進行了篩選和制備。結(jié)果如下:(1)通過對肝片吸蟲噬菌體展示cDNA文庫的篩選和分析,成功獲得了38條肝片吸蟲基因,包括24條為已明確的肝片吸蟲蛋白基因,14條為肝片吸蟲假定蛋白基因。并從中篩選了5個肝片吸蟲特異性抗原基因作為肝片吸蟲病診斷候選抗原用于后續(xù)探索研究:組織蛋白酶L(Cathepsin L,Cat)、假定蛋白D915₀00758、假定蛋白D915_...

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【學(xué)位級別】：碩士

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摘要
Abstract
第1章 文獻綜述
    1.1 肝片吸蟲及肝片吸蟲病概述
        1.1.1 肝片吸蟲
        1.1.2 肝片吸蟲病的流行性
        1.1.3 肝片吸蟲病臨床癥狀體征
        1.1.4 肝片吸蟲病的防治
    1.2 肝片吸蟲檢測方法
        1.2.1 病原學(xué)檢測
        1.2.2 分子生物學(xué)檢測
        1.2.3 免疫學(xué)檢測
        1.2.4 其它檢查方法
    1.3 肝片吸蟲病診斷抗原研究進展
        1.3.1 組織蛋白酶家族(CAT)
        1.3.2 天冬氨酰內(nèi)肽酶(LEG)
        1.3.3 谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶(GST)
        1.3.4 脂肪酸結(jié)合蛋白(FABP)
        1.3.5 鞘脂激活蛋白樣蛋白家族(SAP)
    1.4 本研究目的及意義
第2章 肝片吸蟲診斷候選抗原的篩選
    2.1 材料與方法
        2.1.1 肝片吸蟲噬菌體cDNA展示文庫和陽性血清
        2.1.2 主要試劑及耗材
        2.1.3 引物
        2.1.4 噬菌體展示及免疫篩選用相關(guān)試劑的配制
        2.1.5 陽性噬菌體初篩
        2.1.6 陽性噬菌體的復(fù)篩
        2.1.7 診斷候選抗原的篩選
    2.2 結(jié)果
        2.2.1 陽性噬菌體初篩
        2.2.2 陽性噬菌體復(fù)篩
        2.2.3 陽性克隆的鑒定與分析
        2.2.4 候選抗原的篩選
    2.3 討論
第3章 候選抗原蛋白分子的生物信息學(xué)分析
    3.1 材料與方法
        3.1.1 材料
        3.1.2 生物信息學(xué)分析
    3.2 結(jié)果
        3.2.1 肝片吸蟲組織蛋白酶L
        3.2.2 假定蛋白D915₀00758
        3.2.3 假定蛋白D915₀01617
        3.2.4 假定蛋白D915₀05900
        3.2.5 假定蛋白D915₀10969
    3.3 討論
第4章 候選抗原基因的克隆以及重組質(zhì)粒的構(gòu)建
    4.1 材料和方法
        4.1.1 主要試劑及耗材
        4.1.2 相關(guān)培養(yǎng)基和試劑的配制
        4.1.3 肝片吸蟲抗原基因特異性引物的設(shè)計與合成
        4.1.4 特異性抗原基因的克隆
        4.1.5 重組克隆質(zhì)粒的構(gòu)建
        4.1.6 重組表達質(zhì)粒的構(gòu)建
    4.2 結(jié)果
        4.2.1 肝片吸蟲組織蛋白酶L
        4.2.2 假定蛋白D915₀00758
        4.2.3 假定蛋白D915₀01617
        4.2.4 假定蛋白D915₀05900
        4.2.5 假定蛋白D915₀10969
    4.3 討論
第5章 候選抗原的誘導(dǎo)表達及鑒定
    5.1 材料及方法
        5.1.1 儀器與試劑材料
        5.1.2 相關(guān)試劑的配制
        5.1.3 重組蛋白的誘導(dǎo)表達
        5.1.4 SDS-PAGE檢測重組蛋白表達
        5.1.5 包涵體蛋白的純化
        5.1.6 Western-Blot分析
    5.2 結(jié)果
        5.2.1 融合蛋白pET-Cat L的表達與鑒定
        5.2.2 融合蛋白pET-000758 的表達與鑒定
        5.2.3 融合蛋白pET-001617 的表達與鑒定
        5.2.4 融合蛋白pET-005900 的表達與鑒定
        5.2.5 融合蛋白pET-010969 的表達與鑒定
    5.3 討論
第六章 結(jié)論與展望
    6.1 結(jié)論
    6.2 展望
參考文獻
附錄一 :中英文縮略詞對照表
附錄二 :作者簡介
致謝



本文編號：3765627