衣原體(Chlamydia spp)是一類(lèi)革蘭氏陰性、專(zhuān)性細(xì)胞內(nèi)寄生、具有獨(dú)特雙相發(fā)育周期、可感染人和動(dòng)物而引起多種傳染性疾病的原核微生物。目前已在感染動(dòng)物中發(fā)現(xiàn)流產(chǎn)衣原體、家畜衣原體、豬衣原體、鸚鵡熱衣原體和鼠衣原體等17個(gè)衣原體種類(lèi)。自上世紀(jì)70年代在青海牧場(chǎng)牛羊群中發(fā)現(xiàn)有綿羊因感染衣原體而引起流產(chǎn)以來(lái),目前已在國(guó)內(nèi)多個(gè)省(區(qū))先后有綿羊、山羊、豬和奶牛因感染衣原體引發(fā)流產(chǎn)疫病的報(bào)道。但此類(lèi)報(bào)道主要是畜群內(nèi)的血清流行病學(xué)調(diào)查和動(dòng)物病例的個(gè)案分析,缺乏區(qū)域性或全國(guó)范圍的分子流行病學(xué)調(diào)查研究,從而限制了對(duì)動(dòng)物感染衣原體的預(yù)防措施或方法的科學(xué)制定和有效實(shí)施。本研究采集羊群陰道、直腸拭子,流產(chǎn)胎兒等樣品、通過(guò)PCR基因擴(kuò)增及測(cè)序分析,衣原體分離培養(yǎng)等技術(shù)手段對(duì)我國(guó)西北地區(qū)綿羊群和陜西關(guān)中地區(qū)山羊群感染的衣原體病原遺傳多樣性進(jìn)行了調(diào)查研究。同時(shí),利用分子生物學(xué)技術(shù)通過(guò)構(gòu)建原核表達(dá)載體,在大腸桿菌中克隆表達(dá)了流產(chǎn)衣原體蛋白酶樣活性因子(chlamydial protease like activity factor,CPAF)的全長(zhǎng)編碼基因,誘導(dǎo)獲得其重組蛋白,為進(jìn)一步建立動(dòng)物感染流產(chǎn)衣原體的...

【文章頁(yè)數(shù)】：72 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.衣原體概述
    2.衣原體與人和動(dòng)物的健康
        2.1 沙眼衣原體
        2.2 鼠衣原體
        2.3 肺炎衣原體
        2.4 流產(chǎn)衣原體
        2.5 家畜衣原體
        2.6 鸚鵡熱衣原體
        2.7 豬衣原體
        2.8 貓衣原體
        2.9 豚鼠衣原體
        2.10 其他衣原體
    3.衣原體的檢測(cè)方法
        3.1 病原學(xué)檢測(cè)
        3.2 血清學(xué)檢測(cè)
        3.3 核酸檢測(cè)
    4.流產(chǎn)衣原體的分型研究
        4.1 基于ompA基因序列的分型
        4.2 MLVA分型
        4.3 MLST分型
    5.結(jié)語(yǔ)和展望
第二章 西北地區(qū)綿羊衣原體多樣性研究
    1.材料和方法
        1.1 試劑、菌種載體
        1.2 主要儀器
        1.3 主要溶液的配制
        1.4 樣品采集
        1.5 樣品DNA提取
        1.6 各衣原體種檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)品的制備
        1.7 計(jì)算質(zhì)粒拷貝數(shù)
        1.8 建立質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)曲線
        1.9 熒光定量PCR檢測(cè)衣原體的引物和探針
        1.10 PCR擴(kuò)增引物
        1.11 PCR反應(yīng)體系及反應(yīng)程序
        1.12 核酸電泳
        1.13 目的基因的回收測(cè)序
        1.14 系統(tǒng)發(fā)育分析
        1.15 MLVA分析
        1.16 MLST分析
        1.17 數(shù)據(jù)分析
    2.結(jié)果
        2.1 衣原體熒光定量PCR檢測(cè)方法
        2.2 西北地區(qū)綿羊樣品中衣原體的流行及分布情況
        2.3 流產(chǎn)衣原體和家畜衣原體的鑒定
        2.4 基于ompA序列的流產(chǎn)衣原體和家畜衣原體多樣性分析
        2.5 流產(chǎn)衣原體流行菌株MLVA和 MLST分析
    3.討論
第三章 陜西關(guān)中奶山羊衣原體多樣性研究
    1.材料和方法
        1.1 細(xì)胞株、菌種、主要試劑
        1.2 主要儀器
        1.3 樣品采集
        1.4 衣原體菌株的分離
        1.5 衣原體菌株的細(xì)胞培養(yǎng)
        1.6 免疫熒光染色
    2.結(jié)果
        2.1 奶山羊衣原體檢測(cè)
        2.2 奶山羊樣品中衣原體種的鑒定
        2.3 基于ompA序列的奶山羊衣原體流行株多樣性分析
        2.4 奶山羊流產(chǎn)衣原體流行菌株MLVA和 MLST分析
        2.5 奶山羊流產(chǎn)衣原體的分離培養(yǎng)
    3.討論
第四章 流產(chǎn)衣原體CPAF基因的克隆序列分析及原核表達(dá)
    1.材料和方法
        1.1 試驗(yàn)材料
        1.2 試驗(yàn)方法
    2.結(jié)果與分析
        2.1 PCR擴(kuò)增結(jié)果及重組原核表達(dá)載體的鑒定
        2.2 CPAF編碼基因的序列分析及蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)
        2.3 重組蛋白誘導(dǎo)表達(dá)條件的優(yōu)化
        2.4 重組蛋白的Western Blot分析
    3.討論
全文結(jié)論
創(chuàng)新點(diǎn)
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡(jiǎn)介
碩士期間已發(fā)表論文



本文編號(hào)：3743925