香蕉（Musa spp）是我國熱帶地區(qū)最大的水果品種,分類上屬芭蕉科（Musaceae）芭蕉屬（Musa L.）,是芭蕉屬下食用香蕉的總稱。華蕉（Cavendish, AAA）,又稱香牙蕉,是由尖葉蕉（M acuminata, AA）種內(nèi)自然雜交進化選育而來的三倍體品種。華蕉不像通過雜交育種方式培育出的品種那樣譜系清楚,因而華蕉類品種的名稱多有同一品種多個名稱的情況存在,給華蕉類品種的培育和生產(chǎn)開發(fā)造成了一定程度混亂和困擾。 近幾年來,RAPD （Random Amplified Polymorphic DNA）分子標(biāo)記技術(shù)已廣泛應(yīng)用于香蕉的分子育種和種間的多樣性分析,但RAPD標(biāo)記所具有重復(fù)性差、穩(wěn)定性低的缺點,使得IRAPD標(biāo)記的分析結(jié)果在一定程度上具有不確定性。因此,SCAR （sequence characterized amplified regions）分子標(biāo)記技術(shù)在RAPD標(biāo)記的基礎(chǔ)上發(fā)展起來,不僅克服了RAPD標(biāo)記的缺點,還具備RAPD標(biāo)記的優(yōu)點,并在水稻、茶樹等作物不同品種區(qū)分中進行了成功應(yīng)用,但未見有用于華蕉類品種區(qū)分和多樣性分析方面的研究報道。 本... 

【文章頁數(shù)】：57 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 前言
    1.1 香蕉的概況
        1.1.1 香蕉的生物學(xué)特性
        1.1.2 香蕉的起源
        1.1.3 我國香蕉種質(zhì)資源的分布
        1.1.4 香蕉的品種與分類
    1.2 分子標(biāo)記的簡介
    1.3 RAPD分子標(biāo)記技術(shù)的簡介與在香蕉種質(zhì)資源中的研究應(yīng)用
        1.3.1 RAPD技術(shù)的基本原理
        1.3.2 RAPD技術(shù)的特點
        1.3.3 RAPD標(biāo)記技術(shù)在香蕉中的應(yīng)用
    1.4 SCAR分子標(biāo)記技術(shù)的簡介與應(yīng)用
        1.4.1 SCAR技術(shù)的基本原理
        1.4.2 SCAR技術(shù)的特點
        1.4.3 RAPD-SCAR標(biāo)記技術(shù)在不同物種中的應(yīng)用
    1.5 本研究的選題背景與意義
2 實驗材料與方法
    2.1 供試品種
    2.2 主要的生化試劑
    2.3 主要實驗儀器及設(shè)備
    2.4 主要試劑的配制
        2.4.1 提取基因組DNA相關(guān)試劑的配制
        2.4.2 相關(guān)培養(yǎng)基的配制
    2.5 實驗方法
        2.5.1 基因組DNA的提取(2×CTAB法)
        2.5.2 基因組DNA的濃度與純度測定
        2.5.3 RAPD反應(yīng)測序的優(yōu)化
        2.5.4 RAPD引物的篩選
        2.5.5 RAPD差異性片段的回收
        2.5.6 差異性片段與T-載體的連接
        2.5.7 大腸桿菌感受態(tài)細胞的制備(氯化鈣法)
        2.5.8 重組質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化
        2.5.9 差異性DNA片段的檢測與測序
        2.5.10 SCAR引物設(shè)計與PCR驗證
3 結(jié)果與分析
    3.1 40份華蕉材料基因組DNA的提取
    3.2 RAPD反應(yīng)體系的優(yōu)化
        3.2.1 引物濃度的優(yōu)化
        3.2.2 RAPD-PCR反應(yīng)程序中退火溫度的優(yōu)化
        3.2.3 華蕉中RAPD-PCR最佳反應(yīng)系統(tǒng)的建立
    3.3 華蕉RAPD差異性片段的分析
        3.3.1 RAPD引物的篩選
        3.3.2 RAPD差異性條帶的連接、轉(zhuǎn)化與測序
            (1) 差異性片段的回收與純化
            (2) 差異性片段的克隆
            (3) 差異性片段的轉(zhuǎn)化驗證
    3.4 差異性片段的測序結(jié)果
    3.5 SCAR標(biāo)記的建立與分析
        3.5.1 SCAR引物的設(shè)計
        3.5.2 SCAR標(biāo)記的結(jié)果
    3.6 華蕉的聚類分析與分類
    3.7 36個華蕉品種和4個華蕉測試種的鑒別
4 討論
    4.1 香蕉基因組DNA的提取
    4.2 華蕉RAPD標(biāo)記的穩(wěn)定性與重復(fù)性
    4.3 華蕉SCAR標(biāo)記的應(yīng)用
5 結(jié)論
參考文獻
致謝



本文編號：3721574