選題依據(jù):遠(yuǎn)志Polygala tenuifolia是山西省道地藥材之一,且全國需求量較大。遠(yuǎn)志皂苷是遠(yuǎn)志發(fā)揮益智作用的主要活性成分,屬于齊墩果烷型五環(huán)三萜皂苷,結(jié)構(gòu)復(fù)雜,單體化合物遠(yuǎn)志皂苷價(jià)格昂貴,難以獲得,限制了該類成分的創(chuàng)新藥物研發(fā)。釀酒酵母Saccharomyces cerevisiae在適宜的環(huán)境下生長較快,尤其是在大型液體發(fā)酵罐中極容易生長,其DNA基因序列已知,故容易進(jìn)行基因編輯,而且酵母體內(nèi)具備合成萜類物質(zhì)所需的前體化合物（2,3-環(huán)氧角鯊烯）的能力,該能力使酵母在合成生物學(xué)研究中占有了相當(dāng)大的優(yōu)勢(shì)。上述特點(diǎn)使通過改造S.cerevisiae進(jìn)而實(shí)現(xiàn)萜類的異源生物合成成為可能。因此,為了提高遠(yuǎn)志皂苷的產(chǎn)量,利用S.cerevisiae為底盤細(xì)胞進(jìn)行萜類化合物的異源生物合成研究,是獲得遠(yuǎn)志皂苷的新方法。天然產(chǎn)物的異源合成,為遠(yuǎn)志皂苷的開發(fā)提供了新思路,具體為:通過研究遠(yuǎn)志中合成遠(yuǎn)志皂苷的具有催化功能的CYP450（cytochrome P450,CYP450）,利用酶切或者同源重組技術(shù)構(gòu)建基因表達(dá)盒或者目的片段,導(dǎo)入到具有表達(dá)基因的微生物細(xì)胞中,就能從微生物的代謝產(chǎn)物中獲... 

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
ABSTRACT
第一章 引言
    1.1 立題背景及意義
    1.2 課題的研究?jī)?nèi)容、技術(shù)路線圖及創(chuàng)新點(diǎn)
        1.2.1 研究?jī)?nèi)容
        1.2.2 技術(shù)路線圖
        1.2.3 創(chuàng)新點(diǎn)
第二章 文獻(xiàn)綜述
    2.1 植物細(xì)胞色素P450 分類
    2.2 植物細(xì)胞色素P450 的功能
    2.3 CYP450 在實(shí)際中的應(yīng)用
    2.4 植物CYP88 家族功能研究進(jìn)展
    2.5 植物 CYP88 族功能研究進(jìn)展
第三章 CYP88A85 的生物信息學(xué)分析
    3.1 實(shí)驗(yàn)方法
        3.1.1 CYP88A85 基因序列的獲得及生物信息學(xué)分析
        3.1.2 構(gòu)建CYP88A85 系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹
    3.2 結(jié)果與分析
        3.2.1 遠(yuǎn)志CYP88A85 基因序列分析
        3.2.2 遠(yuǎn)志CYP88A85 蛋白序列分析
        3.2.3 CYP88A85 氨基酸序列特征區(qū)域分析
        3.2.4 CYP88A85 系統(tǒng)發(fā)育分析結(jié)果
    3.3 討論
第四章 遠(yuǎn)志CYP88A85 基因的時(shí)空表達(dá)
    4.1 研究材料
        4.1.1 供試植物
        4.1.2 主要試劑
        4.1.3 主要儀器
    4.2 研究方法
        4.2.1 引物的設(shè)計(jì)與合成
        4.2.2 CYP88A85 基因在不同年限遠(yuǎn)志中的表達(dá)
        4.2.3 CYP88A85 基因在遠(yuǎn)志的根、莖、葉、花中的mRNA表達(dá)
        4.2.4 數(shù)據(jù)處理
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 內(nèi)參基因的引物特異性驗(yàn)證結(jié)果
        4.3.2 CYP88A85 基因在不同年限遠(yuǎn)志及其不同組織中的mRNA表達(dá)分析
    4.4 討論
第五章 遠(yuǎn)志CYP88A85 基因在釀酒酵母體內(nèi)的功能驗(yàn)證
    5.1 研究材料
        5.1.1 菌株與質(zhì)粒
        5.1.2 主要試劑
        5.1.3 主要儀器
        5.1.4 培養(yǎng)基及常用溶液
    5.2 研究方法
        5.2.1 構(gòu)建CYP88A85與CPR表達(dá)載體
        5.2.2 雙酶切及連接反應(yīng)
        5.2.3 轉(zhuǎn)化、重組質(zhì)粒的表達(dá)
        5.2.4 酵母菌株構(gòu)建及搖瓶培養(yǎng)
        5.2.5 提取酵母代謝物
        5.2.6 檢測(cè)酵母代謝物
        5.2.7 繪制對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)曲線
    5.3 結(jié)果與分析
        5.3.1 PCR擴(kuò)增、產(chǎn)物檢測(cè)及擴(kuò)增產(chǎn)物回收純化
        5.3.2 遠(yuǎn)志CYP88A85 基因重組表達(dá)載體的檢測(cè)
        5.3.3 釀酒酵母代謝物的檢測(cè)
    5.4 討論
第六章 總結(jié)與展望
    6.1 研究工作總結(jié)
    6.2 不足
    6.3 展望
縮寫詞表
參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)況及聯(lián)系方式


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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[2]甘草酸對(duì)CYP450酶的影響及其機(jī)制研究[D]. 涂江華.中南大學(xué) 2010

碩士論文
[1]利用基因同源重組技術(shù)構(gòu)建PtP450s的釀酒酵母在體功能研究體系[D]. 王倩玉.山西大學(xué) 2019
[2]遠(yuǎn)志皂苷生物合成關(guān)鍵酶CYP716A249在釀酒酵母中的功能鑒定[D]. 蒲雅潔.山西大學(xué) 2018
[3]基于高通量轉(zhuǎn)錄組測(cè)序與植物代謝組學(xué)技術(shù)研究遠(yuǎn)志皂苷生物合成途徑[D]. 李曉偉.山西大學(xué) 2014



本文編號(hào)：3708602