微小隱孢子蟲是一種腸道寄生蟲,是引起世界范圍內(nèi)腹瀉的重要原因。隱孢子蟲在環(huán)境中以卵囊形式存在,人和動物誤食了被卵囊污染的水或食品后感染,至今尚無有效的治療藥物和疫苗。目前,國際上檢測隱孢子蟲的金標(biāo)準(zhǔn)是免疫學(xué)方法EPA 1623,此方法的關(guān)鍵之處在于需要一個敏感特異的卵囊壁單克隆抗體,而國內(nèi)并沒有研制出相關(guān)試劑,因此本研究在于制備針對微小隱孢子蟲卵囊壁蛋白單克隆抗體,以彌補(bǔ)國內(nèi)空白。本研究采用兩種免疫策略來制備單克隆抗體。第一種是選取文獻(xiàn)報道的和生物學(xué)分析可能位于卵囊壁的4個蛋白（Gp15,COWP6,POWP6和MPA2）,通過選取高度特異的氨基酸序列設(shè)計(jì)多肽,將它們分別偶聯(lián)至載體蛋白KLH和BSA上,分別用于免疫小鼠和ELISA的血清效價檢測。另一種是采用傳統(tǒng)的卵囊進(jìn)行免疫。將1?10~6個微小隱孢子蟲卵囊經(jīng)80℃水浴滅活30min后,與弗氏佐劑乳化后免疫BALB/c小鼠,共免疫四次,每次間隔14天。通過間接免疫熒光來篩選定位于卵囊壁的單抗。經(jīng)過生物信息學(xué)分析,共設(shè)計(jì)了5個多肽,分別為c-GGKRIEVAVP（Gp15）、c-FYTGANSGTTNG（Gp15）、CESKIHEKHH... 

【文章頁數(shù)】：65 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

卵囊壁結(jié)構(gòu)示意圖

間接ELISA法對血清抗體效價的檢測Fig1.1DetectionofserumantibodytiterbyindirectELISA結(jié)果顯示，10只小鼠均免疫成功，取免疫效果最好的小鼠繼續(xù)后續(xù)試驗(yàn)，

種多肽的血清抗體的SDS-PAGE分析


本文編號：3696027