日本沼蝦（Macrobrachium nipponense）,俗稱青蝦,是我國(guó)重要的淡水經(jīng)濟(jì)蝦類。然而,由于工業(yè)化的迅速發(fā)展,環(huán)境惡化問題成為蝦養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)的限制性因素,并造成巨大經(jīng)濟(jì)損失。而氨氮是水體中常見的環(huán)境脅迫因子,過高的濃度會(huì)嚴(yán)重影響日本沼蝦的免疫系統(tǒng)和生長(zhǎng)發(fā)育。因此,探究日本沼蝦抵抗氨氮脅迫的分子機(jī)理為提高蝦類的免疫功能、保護(hù)日本沼蝦的種質(zhì)資源和培育抗逆品種奠定理論基礎(chǔ)。gC1qR是一個(gè)分子量為33 kD單鏈的蛋白質(zhì),屬于C1q受體家族,是一種表達(dá)廣泛,多功能性的蛋白質(zhì);在脊椎和無脊椎動(dòng)物的先天性免疫中發(fā)揮著重要的作用,可以保護(hù)機(jī)體抵抗病毒、細(xì)菌、不良環(huán)境的干擾。gC1qR可以在各種組織和細(xì)胞以及細(xì)胞表面表達(dá)。而在細(xì)胞表面表達(dá)的gC1qR蛋白質(zhì)可以作為胞外、胞內(nèi)、微生物以及病毒蛋白分子的受體,因此被稱為多功能伴侶。本研究以日本沼蝦為實(shí)驗(yàn)材料,隨機(jī)分為對(duì)照組和處理組。對(duì)照組的日本沼蝦飼養(yǎng)在正常水體不做任何處理,而處理組的日本沼蝦飼養(yǎng)在氨氮濃度為98 mg/L的水體中。在處理0 h、3 h、6 h、12 h、24 h、48 h、72 h和96 h后采集各組組織樣品放于-80℃保存,... 

【文章頁(yè)數(shù)】：71 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
1 前言
    1.1 日本沼蝦及其養(yǎng)殖現(xiàn)狀
    1.2 氨氮的來源及其危害
        1.2.1 氨氮的來源
        1.2.2 氨氮對(duì)水生生物的危害
    1.3 甲殼動(dòng)物的免疫系統(tǒng)
    1.4 gC1qR
        1.4.1 gC1qR的結(jié)構(gòu)與功能
        1.4.2 gC1qR的研究進(jìn)展
    1.5 研究的目的和意義
2 材料方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 樣品采集
        2.1.2 主要儀器設(shè)備
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)耗材
        2.1.4 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.1.5 實(shí)驗(yàn)所用引物
        2.1.6 主要數(shù)據(jù)庫(kù)及生物信息學(xué)軟件
    2.2 試驗(yàn)方法
        2.2.1 納氏試劑法測(cè)定實(shí)驗(yàn)用水氨氮含量
        2.2.2 日本沼蝦氨氮脅迫和樣品采集
        2.2.3 酶活力測(cè)定
        2.2.4 組織切片制備
        2.2.5 蘇木精-伊紅(HE)染色
        2.2.6 組織總RNA提取
        2.2.7 RNA質(zhì)量檢測(cè)和定量
        2.2.8 反轉(zhuǎn)錄
        2.2.9 RACE擴(kuò)增目的基因全長(zhǎng)c DNA
        2.2.10 PCR產(chǎn)物回收與載體的連接
        2.2.11 大腸桿菌的轉(zhuǎn)化及測(cè)序
        2.2.12 生物信息學(xué)分析
        2.2.13 熒光定量PCR
        2.2.14 構(gòu)建重組質(zhì)粒
        2.2.15 原核表達(dá)及純化
        2.2.16 誘導(dǎo)表達(dá)
        2.2.17 多克隆抗體制備
        2.2.18 Western-blot分析
        2.2.19 RNA干擾
3 結(jié)果與分析
    3.1 氨氮對(duì)日本沼蝦的致死率測(cè)定
    3.2 氨氮脅迫后日本沼蝦非特異性免疫指標(biāo)分析
    3.3 氨氮脅迫后日本沼蝦的組織學(xué)分析
    3.4 gC1qR基因全長(zhǎng)cDNA克隆和序列分析
        3.4.1 日本沼蝦gC1qR基因的分子克隆
        3.4.2 日本沼蝦gC1qR基因序列分析
        3.4.3 日本沼蝦gC1qR蛋白的二級(jí)、三級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)
    3.5 氨氮處理后日本沼蝦gC1qR基因表達(dá)分析
        3.5.1 氨氮處理后日本沼蝦gC1qR基因在mRNA水平表達(dá)分析
        3.5.2 氨氮處理后日本沼蝦gC1qR基因在肝胰腺組織和鰓組織中的表達(dá)分析
        3.5.3 日本沼蝦gC1qR基因的原核表達(dá)
        3.5.4 氨氮處理后日本沼蝦gC1qR基因在蛋白水平表達(dá)
    3.6 RNA干擾和氨氮處理后日本沼蝦gC1qR基因的表達(dá)分析
4 討論
    4.1 氨氮脅迫造成日本沼蝦免疫系統(tǒng)和器官損傷
    4.2 日本沼蝦gC1qR基因多功能性和高表達(dá)
    4.3 RNA干擾后氨氮處理導(dǎo)致日本沼蝦高死亡率
5 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀碩士期間發(fā)表論文



本文編號(hào)：3658659