本文關(guān)鍵詞：幾種蚜小蜂的分子鑒定與麗蚜小蜂線粒體基因片段的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：蚜小蜂科寄生蜂是粉虱、介殼蟲、蚜蟲等農(nóng)林害蟲的重要天敵,在害蟲生物防治中發(fā)揮重要作用。目前,蚜小蜂分類鑒定僅依靠傳統(tǒng)分類的方法遠(yuǎn)遠(yuǎn)無法滿足需要,迫切需要找到一種能夠快速準(zhǔn)確識別蚜小蜂的方法。本研究利用在昆蟲上經(jīng)常使用的28S rDNA基因D2區(qū)、線粒體CO1基因3'端與5'端3種分子標(biāo)記,采用DNA條形碼分析方法研究蚜小蜂的分類鑒定技術(shù),旨在探究28S rDNA基因D2區(qū)、線粒體CO1基因3’端與5'端這3種分子標(biāo)記鑒定蚜小蜂的可行性,以期建立一種快速準(zhǔn)確鑒定蚜小蜂的新方法�；谀壳熬�粒體全基因組對蚜小蜂科昆蟲的分子研究起到越來越重要的作用,利用PCR技術(shù)進(jìn)行麗蚜小蜂線粒體不同基因片段的擴(kuò)增,旨在為下一步的麗蚜小蜂及其它蚜小蜂科昆蟲的全基因組研究打好基礎(chǔ)。通過研究獲得以下結(jié)果：1.在對17種蚜小蜂的CO1基因進(jìn)行研究時,發(fā)現(xiàn)通用引物lco1490/hco2198不能很好的對這些種類進(jìn)行擴(kuò)增。研究設(shè)計(jì)出一對用于擴(kuò)增蚜小蜂CO1基因5'端的引物,該對引物擴(kuò)增出的序列達(dá)到BOLD數(shù)據(jù)庫中對于標(biāo)準(zhǔn)DNA條形碼的要求。研究共獲得12種蚜小蜂的標(biāo)準(zhǔn)DNA條形碼序列,其中11種序列在BOLD systems中沒有收錄。2.對29種蚜小蜂28S rDNA基因D2區(qū)序列進(jìn)行分析,結(jié)果顯示：29種蚜小蜂種間與種內(nèi)遺傳距離差異為355,物種識別成功率為86.2%。但有25種蚜小蜂的種內(nèi)遺傳距離為零,種內(nèi)28S rDNA序列的保守性很強(qiáng)；夏威夷食蚧蚜小蜂Coccophagus havaiiensis與日本食蚧蚜小蜂Coccophagus japonicus種間的遺傳距離為零；Encarsia brimblecombei與Encarsia normarki種間的遺傳距離為零。Aphytis lingnanensis與Aphytis coheni種間距離與種內(nèi)距離相近。這表明該分子標(biāo)記還不能很好的對蚜小蜂近緣種進(jìn)行分辨,但仍可以作為屬間鑒定的依據(jù),甚至在屬內(nèi)不同種團(tuán)間也可起到較好的鑒定作用。3.基于線粒體CO1基因3'端與5’端兩個分子標(biāo)記對蚜小蜂的分子鑒定研究,結(jié)果顯示：從堿基組成和堿基替換這兩方面來看,兩者間不存在較大差異,A+T的含量都在75%左右,表現(xiàn)出明顯的T+A偏向性；平均堿基位點(diǎn)變異數(shù)相近；堿基轉(zhuǎn)換與顛換的比值相同(R=0.36)。從系統(tǒng)發(fā)育樹的聚類分析來看,每種蚜小蜂都能形成單獨(dú)分支。從種間和種內(nèi)遺傳距離來看,COI基因3’端序列種間遺傳距離是種內(nèi)的30.8倍,CO15’端序列為46.2倍；兩個分子標(biāo)記都能很好的對蚜小蜂進(jìn)行分類鑒定,但CO15’端序列比3’端序列稍有優(yōu)勢。4.利用線粒體通用引物進(jìn)行麗蚜小蜂的線粒體基因片段擴(kuò)增,找出了7對在麗蚜小蜂中可以應(yīng)用的引物,擴(kuò)增出麗蚜小蜂16S、CO1、CO2、CO3、Cyt b等7個基因片段,為以后蚜小蜂科昆蟲線粒體全基因組的研究打下基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：蚜小蜂 28S rDNA基因 CO1基因 分子鑒定 麗蚜小蜂 分子系統(tǒng)發(fā)育
【學(xué)位授予單位】：福建農(nóng)林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：S476.3
【目錄】：

• 摘要7-9
• ABSTRACT9-11
• 第一章 引言11-24
• 1.1 蚜小蜂科概述11-12
• 1.2 蚜小蜂科的分類鑒定12-14
• 1.2.1 幾個本文涉及的屬的鑒定特征12-13
• 1.2.2 蚜小蜂科形態(tài)鑒定存在的不足13-14
• 1.3 分子生物學(xué)技術(shù)在昆蟲分類學(xué)中的應(yīng)用14-19
• 1.3.1 昆蟲標(biāo)本DNA保存與提取方法14-17
• 1.3.2 分子標(biāo)記在昆蟲分類中的應(yīng)用17-19
• 1.4 DNA條形碼19-23
• 1.4.1 DNA條形碼概述19
• 1.4.2 DNA條形碼分析方法19-21
• 1.4.3 BOLD21-23
• 1.5 本研究的目的與意義23-24
• 第二章 基于28S rDNA基因?qū)?9種蚜小蜂的分子鑒定24-38
• 2.1 材料與方法24-28
• 2.1.1 標(biāo)本來源24-25
• 2.1.2 試驗(yàn)儀器和試劑25-26
• 2.1.3 總DNA的提取26-27
• 2.1.4 PCR擴(kuò)增、電泳檢測及序列測定27
• 2.1.5 28S rDNA基因序列比對和分析27-28
• 2.2 結(jié)果與分析28-37
• 2.2.1 Blsat比對分析28
• 2.2.2 28S rDNA基因序列分析28-30
• 2.2.3 種內(nèi)與種間遺傳距離30
• 2.2.4 系統(tǒng)發(fā)育樹的構(gòu)建30-37
• 2.3 小結(jié)與討論37-38
• 第三章 基于CO1基因3'端序列對15種蚜小蜂的分子鑒定38-48
• 3.1 材料與方法38-40
• 3.1.1 試驗(yàn)材料38
• 3.1.2 試驗(yàn)儀器38
• 3.1.3 DNA提取38-39
• 3.1.4 PCR序列測定39-40
• 3.1.5 CO1基因3'端序列分析40
• 3.2 結(jié)果與分析40-47
• 3.2.1 同源性比對40-41
• 3.2.2 CO13'端序列分析41
• 3.2.3 CO13'端序列堿基轉(zhuǎn)換分析41-42
• 3.2.4 遺傳距離分析42-43
• 3.2.5 系統(tǒng)發(fā)育樹的構(gòu)建43-47
• 3.3 小結(jié)與討論47-48
• 第四章 基于CO1基因5'端序列對17種蚜小蜂的分子鑒定48-58
• 4.1 材料與方法48-50
• 4.1.1 試驗(yàn)材料48
• 4.1.2 試驗(yàn)儀器48
• 4.1.3 DNA提取48
• 4.1.4 PCR擴(kuò)增、電泳檢測以及序列測定48-49
• 4.1.5 CO1序列比對和分析49-50
• 4.2 結(jié)果與分析50-54
• 4.2.1 同源性比對50-52
• 4.2.2 CO15'端序列分析52-53
• 4.2.3 種內(nèi)與種間遺傳距離53
• 4.2.4 系統(tǒng)發(fā)育樹的構(gòu)建53-54
• 4.3 小結(jié)與討論54-58
• 第五章 麗蚜小蜂線粒體部分基因片段的測序研究58-65
• 5.1 材料與方法58-59
• 5.1.1 試驗(yàn)材料58
• 5.1.2 試驗(yàn)儀器與試劑58
• 5.1.3 總DNA的提取58-59
• 5.1.4 PCR擴(kuò)增及測序59
• 5.2 結(jié)果與分析59-64
• 5.2.1 通用引物篩選59-60
• 5.2.2 序列同源性比對60-64
• 5.3 小結(jié)與討論64-65
• 第六章 總結(jié)與討論65-68
• 6.1 主要結(jié)論65-67
• 6.1.1 3種分子標(biāo)記鑒定蚜小蜂的可行性分析65-66
• 6.1.2 麗蚜小蜂線粒體部分基因片段的測序66
• 6.1.3 基于3種分子標(biāo)記對蚜小蜂科系統(tǒng)發(fā)育的研究66
• 6.1.4 基于線粒體CO1基因5'端序列擴(kuò)增66-67
• 6.2 創(chuàng)新和不足67
• 6.3 展望67-68
• 參考文獻(xiàn)68-73
• 致謝73-74
• 附錄74-77

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本文編號：365712