蕓薹根腫菌侵染所引起的十字花科根腫病是一種感染性極強的世界級土傳病害,可以造成十字花科作物的大量減產(chǎn)。根腫菌侵染寄主根部后,將從寄主中攝取大量能源物質供以自身的生長繁殖最終形成腫塊。糖外排轉運蛋白（sugars will eventually be exported transporters,SWEET）是近年新發(fā)現(xiàn)的一類糖轉運蛋白,除了參與調控韌皮部裝載,逆境脅迫,生長發(fā)育等過程,還在寄主-病原菌互作中發(fā)揮重要作用。諸多研究表明,植物病原菌侵染寄主后將誘導寄主中的SWEEET基因的表達量上調從而參與病原菌-寄主之間的互作。根據(jù)本課題組的前期研究結果,我們發(fā)現(xiàn)了一些在根腫菌侵染后表達量大量上調的BraSWEET基因,經(jīng)表達分析后初步認定這些基因為大白菜-根腫菌互作的關鍵BraSWEET基因。在此研究基礎上,本論文對候選關鍵BraSWEET基因進行了表達驗證并使用己糖突變酵母菌株對大白菜-根腫菌互作的關鍵BraSWEET蛋白進行了異源功能互補驗證,明確了這些關鍵BraSWEET蛋白的糖轉運能力。大白菜-根腫菌互作中的關鍵BraSWEET蛋白間的互作分析是通過mbSUS系統(tǒng)酵母雙雜交試驗及... 

【文章頁數(shù)】：52 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 文獻綜述
    1.1 根腫病及其病原菌概論
        1.1.1 根腫病的危害
        1.1.2 根腫菌的生活史
        1.1.3 根腫病的防治
    1.2 SWEET蛋白研究進展
        1.2.1 SWEET蛋白結構
        1.2.2 SWEET蛋白的生理功能
    1.3 SWEET蛋白在植物-病原菌互作中的研究
    1.4 本研究的目的及意義
第二章 大白菜-根腫菌互作中關鍵BraSWEETs蛋白的篩選及其糖轉運特性驗證
    2.1 試驗材料
    2.2 試驗方法
        2.2.1 大白菜及擬南芥RNA的提取及反轉錄
        2.2.2 大白菜-根腫菌互作中關鍵SWEETs蛋白的篩選
        2.2.3 酵母糖轉運表達載體的構建
        2.2.4 酵母己糖缺陷型突變菌株EBY.4000感受態(tài)的制備
        2.2.5 酵母表達載體的轉化
        2.2.6 缺陷型酵母糖轉運功能互補試驗
    2.3 結果與分析
        2.3.1 大白菜-根腫菌互作中關鍵BraSWEETs基因的表達分析驗證
        2.3.2 酵母糖轉運載體的構建及檢測
        2.3.3 酵母糖轉運特性驗證
    2.4 討論
第三章 大白菜-根腫菌互作關鍵BraSWEETs蛋白間互作分析
    3.1 試驗材料
    3.2 試驗方法
        3.2.1 膜蛋白酵母雙雜載體的構建
        3.2.2 酵母雙雜菌株感受態(tài)的制備
        3.2.3 酵母雙雜表達載體的轉化
        3.2.4 mbSUS膜蛋白酵母雙雜試驗
        3.2.5 雙分子熒光互補載體的構建
        3.2.6 農(nóng)桿菌感受態(tài)細胞的轉化
        3.2.7 煙草農(nóng)桿菌注射及雙分子熒光互補的顯微觀察
    3.3 結果與分析
        3.3.1 酵母雙雜交載體的構建
        3.3.2 mbSUS系統(tǒng)酵母雙雜驗證關鍵BraSWEETs蛋白之間互作
        3.3.3 雙分子熒光互補載體構建
        3.3.4 雙分子熒光互補驗證關鍵BraSWEETs蛋白之間互作
    3.4 討論
結論
參考文獻
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
[1]大白菜抗根腫病基因CRq的精細定位及克隆[D]. 賈豪.鄭州大學 2018
[2]成都市十字花科根腫病調查及藥劑防治篩選[D]. 張日波.四川農(nóng)業(yè)大學 2010



本文編號：3646820